Способ определения инсектицидной активности bacillus тнuringiеnsis

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(71) Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии (72) А. Н. Наумов и В. В. Кувичкин (53) 576.8 (088.8)(56) Энтобактерин сухой. ГОСТ 21108 - 75.2. Еацз 1 К. М. РоцдЬег(у Е. М., Неппре А. М Кесйе 1 дег 1 ег С. Е 81 апдагза 1 оп о 1 Ве Епсо 1 охп Ргоспсевд Ьу 8 ечега чаге 11 ез о 1 Васцз Вцгпрепз 1 з. - .оцгпа о 1 Есопопис Еп(огпооду, 1971, ч. 64, 3, р, 610 в 6(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНСЕКТИЦИДНОЙ АКТИВНОСТИ ВАС 1.Ш 8 ТН 1.) КМ 61 Е М 818 (5) Изобретение относится к области,микробиологических средств защиты растений и позволяет ускорить процесс определения инсектицидной активности Вас 11 пз афпгпрепзз. Личинки большой вощинной моли заражают культурой Вас 1 пз йпг 1 препзз 3 - 5 ч инкубируют гусениц, выделяют из них и гомогенизируют кишечники. Из гомогената удаляют твердую фазу. В жидкой фазе определяют эстеразную активность, по калибровочной кривой соответствия ЛК 50 начальной скорости эстеразной реакции оценивают инсектицидную активность. Калибровочную кривую строят по результатам измерений трех штаммов с известными ЛК 50. 2 ил., а 2 табл.Изобретение относится к области микробиологических средств защиты растений и может быть использовано для контроля активности Вас 111 цз йцгпрепяяЦель изобретения -- ускорение процесса определения инсектицидной активности Вас)1 цз йцпп репз 1 яБа фиг. 1 изображен калибровочный график для определения активности; на фиг. 2 - кривая реакции взаимодействия субстрата и фермента. 10Определение проводят на личинках большой вошинной моли, зараженных культурой Вас)1 цз йцппрепяя После инкубации выделяют кишечники, гомогенизируют, фильт руют и измеряют активность кишечных эстераз. По результатам измерений трех штаммов с известными ЛК.-,о строят калибровочный график зависимости скорости реакции взаимодействия эстераз кишечника и ВаС)1 цэ йШ)ддквхПЗ)В От ИНСЕКтнцИдНОй аК- тивности, Для этой цели по оси абсцисс 20 (фиг. 1) откладывают величины ЛК 5 о, а по оси ординат начальную скорость реак ции Ч.Начальную скорость реакции измеряют на флуориметре. Самописец флуориметра вычерчивает кривую реакции взаимодействия субстрата и фермента (фиг. 2). По оси абсцисс время реакции (, а по оси ординат интенсивность флуоресценции. Если из начальной точки О провести касательную к линии, полученной на самописце, и определить тангенс угла наклона этой касательной к оси абсцисс, то получают численное выражение начальной скорости реакции.Измеренную скорость отмечают на калибровочном графике на оси ординат (точка Х, фиг. 1). Из этой точки проводят линию, параллельную оси абсцисс до пересечения35 с калибровочной линией, Из точки пересечения опускают на ось абсцисс перпендикуляр, основание которого и указывает на искомую величину ЛКьо.Пример Пяти личинкам 7 возраста 40 большой вощинной моли вводят по 2- - 3 мкл шприцем регоз суспензию Вас)11 цз йцппреп 51 вЗараженных личинок помешают в чашки Петри без корма и ставят в термостат при 33 С на 3 - 5 ч. После инкубации вы деляют кишечники 5 лицинок, гомогенизируют их вместе в 30 мл 0,1 М фосфатного буфера рН 7,5, фильтруют. В кювету наливают фильтрат, добавляют флуоресцеиндиацетат, растворенный в ацетоне (2,5 мг/мл) и измеряют на флуори метре начальную скорость реакции при 520 нм. В табл, 1 показаны результаты биоиспытания и определение активности с использованием кишечных эстераз (коэффициент корреляции - 0,96).Коэффициент корреляции считают по формулеХ х - хх)х - х) .Х)у - у)где Х - ЛК 5 о в биоиспытании;У - начальная скорость;Х и 7 - средние арифметические величины;г - коэффициент корреляции.Расчет коэффициента корреляции приведен в табл. 2 (г=0,96).Измерение эстеразной активности кишечного гомогената личинок насекомых выбрано потому, что эстер азы - наиболее реактивная группа ферментов, дающая значительное отклонение активности от нормы при введении насекомым токсинов, продуцируемых Вас)11 цз Вцгпрепяя Причем изменение активности можно наблюдать уже в первые часы после введения токсина, цто особенно важно для создания экспресс- метода. Предлагается измерять эстеразную активность в гомогенате кишечника потому, что в кишечнике сосредоточено 95,8 Я всей эстеразной активности. Кроме того, берется вид насекомых, который восприимчив к испытуемому препарату (в данном случае личинки пчелиной огневки).Предлагаемый способ позволяет сократить время испытания до 5 ч по сравнению с тремя сутками в биоиспытаниях; определять активность культуры без выделения и очистки эндотоксина, а также достичь высокой степени корреляции с биоиспытанием на насекомых (0,96).Формула изобретенияСпособ определения инсектицидной активности Вас 11 цз йцп препз 1 з, включающий заражение гусениц, инку бирование их и оценку инсектицидной активности, отличающийся тем, цто, с целью сокрашения времени определения, инкубирование гусениц осуществляют 3 - 5 ч, затем из них выделяют кишечники, гомогенизируют их, из гомогената удаляют твердую фазу, в жидкой фазе определяют эстеразную активность, а оценку инсектицидной активности осуществляют по калибровочной кривой соответствия ЛК 5 о начальной скорости эстеразной реакции.1327866 Таблица 1 ЛК 50 определеннаяпо эстераэной акНачальнаяскорость Штамм тивности секомых 7,6 10 2,04 10 2, 14 10 7,9 10 0,65 119 0,76 69-6 1227 0,77 0,91 1070 УУ (ХХ) (УУ:Е 8, 62 гг гЮГб Фиг. 1 Фиг. витель О. БорисИ. Вересб 29СССР по делам5, Раушская нредприятие, г. У ваКорректор М. ДемчикПодписноеизобретений и открытийб., д. 4/5жгород, ул. Проектная, 4 Соста Техред Тираж дарственного комитет 3035, Москва, Ж - 3 но-полиграфическое п Редактор Е. ПаЗаказ 3415/3ВНИИПИ Гос Производств ЛКо, определен -ная на тест-на -6,9 101,910 т2,5107 1,107 ЛК о, Начальная Х - Х скорость, Х У Таблица 2