Способ получения лейкопитарного бета -гликопротеида

СОЮЗ СОВЕТСКИХ ОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ СПУБЛИК 9) (1 546 01 И 33/48(59 ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИИ ЕТ СССРОТКРЫТИЙ АНИЕ РЕ ТЕНИЯ Н АВТОРСКОМУ ТЕЛЬСТВ с(71) 2-й Московский ордена Ленина государственный медицинский институтим. Н.И.Пирогова и Научно-исследовательский институт трансплантологии иискусственных органов(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕЙКОЦИТАРНОГОБЕТА -ГЛИКОПРОТЕИДА(57) Изобретение относится к медицинской биохимии, может быть примененопри получении биологически активногобелкового продукта - лейкоцитарногобета -гликопротеида для получениямоноспецифических антисывороток, определения этого белка, а также длятестирования его биологической активности. Цель изобретения - увеличениечистоты целевого продукта путем фракционирования женского молока. Дляэтого женское молоко смешивают с двуокисью алюминия, инкубируют 20 мин,трижды отмывают двуокись алюминиядистиллированной водой; всякий разотделяя сорбент центрифугированием.К отмытой двуокиси алюминия добавляют 50-607-ный насыценный раствор серно-кислого аммония, оставляя на суткипри 4 С, центрифугируют, надосадокудаляют, а осадок диализуют противдистиллированной воды при 4 С. Затемфракцию смешивают с влажным ЯР-сефадексом С, инкубируют, центрифугируют, надосадок удаляют, а сефадекс с сорбированными белками триждыотмывают в литре дистиллированной во-ды, всякий раэ удаляя воду центрифу- Цфгированием. Далее к отмытому сефадексу добавляют 8-123-ный раствор ВаС 1,инкубируют, осадок отделяют центрифугированием. Надосадочную жидкостьдиализуют против дистиллированнойводы и лиофилизуют. Таким образом рполучают препарат лейкоцитарного бета,-гликопротеида. 1 табл, 1280546 .Изобретение относится к медицинской биохимии, а именно к препаративности технологической биохимии,.икасается получения биологически активного белкового продукта - лейкоцитарного бета -гликопротеида, необходимого для получения моноспецифических антисывороток, и определения этого белка, а также для тестированияего биологической активности,10Целью изобретения является увеличение чистоты целевого продукта.Способ поясняется следующими примерами,П р и м е р 1. 500 мл женского мо 15лока смешивают с 500 мл влажной двуокиси алюминия, инкубируют 20 мин намагнитной мешалке, после чего трижды,отмывают двуокись алюминия 1 л дис"тиллированной воды, постоянно отделяясорбент при помощи центрифугирования.К отмытой двуокиси алюминия добавляют400 мл (50% насыщения) насьпценногораствоРа сернокислого аммония, остав ляют на 24 ч при 4 С, центрифугируютпри 8000в течение 30 мин, надосадок удаляют, а осадок растворяют в40 мл дистиллированной воды и диалиэуют против дистиллированной водыпри 4 С,Полученную после диализа фракциюсмешивают с 20 мл влажного БР-сефадекса С(приготовленного путемпредварительного замачивания дистиллированной водой), инкубируют в тече- З 5ние 20 мин при постоянном помешива-нии, центрифугируют, надосадок удаля"ют, а сефадекс с сорбированными бел"ками трижды отмывают 1 л дистиллиро"ванной воды, удаляя воду при помощицентрифугирования. К отмытому сефадексу добавляют 20 мл 8%-ного раствора хлористого натрия, инкубируютпри перемешивании 20 мин, осадок отделяют центрифугированием, а надосадочную жидкость диализуют против дистиллированной воды и лиофилиэируют.Таким образом получают препарат лейкоцитарного бета,-гликопротеида счистотой выхода 80%, выход белка составляет 30%. П р и м е р 2 500 мл женского молока смешивают с 500 мл влажной двуокиси алюминия, дальнейшую обработку проводят как описано в примере 1. К отмытой двуокиси алюминия добавляют 400 мл насьпценного раствора гидрофосфата натрия, в дальнейшем проводят обработку, как в примере 1, к полученному надосадку добавляют 480 мл (60%) насьпценного раствора сернокислого аммония, обработка в дальнейшемпроводится как в примере 1. Элюацию сефадекса проводят 12%-ным раствором хлористого натрия с дальнейшей обработкой, как в примере 1. Таким образом, получают препарат лейкоцитарного бета-гликопротеида с чистотой выхода препарата 75%, выходом белка 35%.Применение адсорбционной хроматографии с двуокисью алюминия в качестве сорбента приводит к меньшему количеству примесей и большей чистоте препарата по сравнению с аналогом (15-20% и 80% соответственно).Выбранные параметры представлены таблицей,Таким образом, приведенная таблица свидетельствует, что выбранные параметры являются оптимальными, повышают чистоту и выход препарата посравнению с прототипом.Формула изобретенияСпособ получения лейкоцитарцого бета, -гликопротеида путем фракционирования женского молока, о т л и - ч а ю щ и й с я тем, что, с целью увеличения чистоты целевого продукта, фракционирование осуществляют путемадсорбционной хроматографии на двуокиси алюминия, элюции насьпценным раствором двузамещенного гидрофосфата натрия, центрифугирования, осаждения надосадка сернокислым аммонием при 50"60% насыщения с последукпцейионообменной хроматографией раствореннога осадка на катионитном сильноосновном сефадексе зернистости и элюцией 8-12%-ным растворомповаренной соли..Заказ 7062/50 Тираж 778 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5