Способ получения толерогена

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 56079 А 19) (11) 51) 4 6 09 В 23 СУДАРСТВЕННЫЙ КОМ О дЕлАм изОБРетени ЕТ СССРОТНРЫТИЙ ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ОЛЕРО(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТГЕНА(57) Изобретение относится к иммЦель изобретения - повышение стти при сохранении толерогенныхупрощение способа. Гамма-глобулдят физиологическим раствором. Кному раствору добавляют мочевинбируют при комнатной температур институтН СССРСофронов закономерческой тогии. Докт. Ж К АВТОРСКОМУ СВИДТЕЛЬСТВ(56) Сафронов Б. Н. Основныености приобретенной иммунологлерантности и ее роль в патолдиссерт. Л., 1967, с. 27 - 45,у нологии. абильноссвойств и ин разво- получену и инкуе. 3 табл,1256079 Пример 1, 0,1 мл донорского противо- гриппозного гамма-глобулина (80 мг)мл) разводят физиологическим раствором до 8 мл (концентрация 1 мг/мл) . К полученному раствору антигена добавляют 8 мл 0,12 М мочевины и инкубируют в течение 24 ч при комнатной температуре. Восьми мышам линии С 57 В 1./СВА) Р вводят внутривенно по 1 мл полученного препарата. Одновременно двадцати контрольным мышам внутривенно вводят по 1,0 мл физиологического раствора. Через неделю опытным и контрольным мышам делают тест-инъекцию, вводя внутрибрюшинно 4 мг антигена в адъюванте Фрей нда.Результаты представлены в табл. 1. Таблица Число животных Группы 20 КонтрольОпыт 1000 й гемолизу С,Н модифицированным методом, Толерогенность препарата подтверждают в опытах на мышах (С 57 ЦСВА) Р Трем группам мышей (по 20 шт в группе) внутривенно в объеме 1,0 мл вводят либо антиген, обработанный мочевиной (опыт), либо ультрацентрифугированный (контроль 2), либо нативный (контроль 1). Через неделю всем животным вводят внутрибрюшинно 4 мг антигена (тест-инъекция) в адъюванте Фрейнда. Циркулирующие антитела выявляют в реакции пассивной гемагглютинации по Бойдену на 20-е сутки после иммунизации. Результаты представлены в табл. 2. Таблица 2 Уровень досто Человеческий иммуноглобулин Групп ерости,280+5 3,951,5 онтроль 1 онтроль 2 1,7+О 5,0+О 01 Опы 1Изобретение относится к медицине, точнее к иммунологии, и может найти применение при изучении механизмов иммунологической толерантности и обоснования способов создания специфической ареактивности к чужеродным белкам, аллергенам, трансплантатам.Цель изобретения - повышение стабильности при сохранении толерогенных свойств и упрощение способа за счет исключения физического воздействия на антиген,Способ осуществляют следующим образом.К антигену, перед введением его животному, в концентрации 1 - 75 мг(мл добавляют раствор 0,03 - 1,0 М мочевины равного объема и инкубируют в течение 1 - 24 ч. Как показано в табл, 1, число животных, имеющих антитела в ответ на введение тестантигена, достоверно меньше в опытной группе по сравнению с контрольной (Рс 0,01)Пример 2. 2,0 мл донорского противо- гриппозного гамма-глобулина разводят физиологическим раствором до 8 мл (концентрация 20 мг(мл), К полученному раствору антигена добавляют 0,03 М мочевины в объеме 8 мл и инкубируют в течение 3 ч при комнатной температуре. Полученный препарат оценивают по способности к потреблению комплемента и вводят мышам для индукции толерантности, Способность препарата к сорбции комплемента оценивают по НативныйУльтрацентрифугированныОбработанный мочевиной Из них с антите- Уровень дослами товерности,Р оглощение Титр антителомплемента1256079 Таблица 3 Сохранение толерогенных свойств Возможность повторения экс- перимента 7 сут30 мин Предлагаемый способИзвестный способ Составитель М. Позняк Техред И. Верес Корректор Л. Патай Тираж 455 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП Гатент, г. Ужгород, ул. Проектная, 43Как показано на табл. 2, антиген, обработанный мочевиной, так же как и ультрацентрифугированный антиген, достоверно меньше потребляет комплемент и предотвращает выработку антител, т.е. обладает толерогенным действием.Пример 3. К 2 мл донорского противо- гриппозного гамма-глобулина добавляют 2 мл 1 М раствора мочевины и инкубируют в течение 1 ч при комнатной температуре, Полученный препарат разводят физиологи ческим раствором до концентрации 1 мг/мл (0,1+7,4 мл физ,р-ра) и определяют его способность сорбировать комплемент по 100 о/, гемолизу. Одновременно определяют формула изобретенияСпособ получения толерогена, включаю 1 ций дезагрегацию глобулиновых препаратов, отличающийся тем, что, с целью повышения стабильности при сохранении толерогенных сорбцию комплемента нативным антигеном. При отчете реакции гемолиза нативный антиген потреблял 4,5 ед. комплемента, тогда, как антиген, обработанный мочевиной, 2,5 ед, комплемента. Антиген, обладающий сниженной антикомплементарной активностью, является индуктором толерантности.Препарат, полученный предлагаемым способом, обладает толерантными. свойствами, отличается стабильностью, 100% выходом препарата.В табл. 3 приведены сравнительные данные о сохранении толерогенных свойств препарата, полученного известным и предлагаемым способами. свойств и упрощения способа, дезагрегацию осуществляют 0,03 - 1,0 М раствором моче- вины при содержании 1 - 75 мг/мл белка в исследуемом материале и инкубируют в течение 1 - 24 ч.