Способ получения -2-амино-4-метилфосфиномасляной кислоты

СОЮЭ СОВЕТСНИХСОЦИАЛ ИСТИЧЕСНИРЕСПУБЛИН а) 4 С 12 Р 13 МИТЕТ СССРИЙ И ОТКРЫТИИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТ ИСАНИЕ БРЕТЕНИЯ АТЕН тем ферме зой в вод -ацил, 1 ляной кисл 4/28-13818 612.580 тативног дролиза и среде прои -амино-мет ты с последу зводно- осф омаслениа юыд ем целевого п щийс я те ния выхода из в качестве пр И-арилацетильрмулы кта т л и ч целью повчто, смера Ь - ф ышефинотрицин используют дное общеи оиз в од ног ное произ В 94 (088. 8)а ФРГ2739/13, опубФРГ29392 9/30, опуб фо 301,ик, 1979.9,ик. 1980. г - СН 2 - С 1 - ЪН - СО СООН30 После этого колонку промываютводой до выхода из нее нейтрального 55и не содержащего ионов хлора элюата,а затем 0,8 н.раствором хлористоговодорода в смеси с этиловым спиртом Изобретение относится к производству аминокислот, а имейно к способуполучения Е-амино-метилфосфиномасляной кислоты ферментативным путем.Целью изобретения является повышение выхода изомера Е-фосфинотрицина,Способ осуществляется следующимобразом.Готовят водный раствор Б-арилацетильного производного общей Формулы 10О11СН,-Р-СН,-СН,-СН-ЗН-СО-СН;Лг1ОН СООНЭгде Аг - Фенил,и осуществляют ферментативньгл гидролизацилазой, в качестве, которой используют пенициллин-С-ацилазу, выделенную из ЕзсЬегсЬа со 1 х ЛМСС 11105.Затем после окончания процесса изобразовавшейся смеси, состоящей изЕ-амино-метилфосфиномасляной кислоты (Ь-ФТЦ), Б-фенилацетил-П-ами но-метил-Фосфиномасляной кислоты(И- фенилацетил-Э-ФТЦ) и фенилуксусной кислоты, можно выделить Ь-ФТЦ, отличающуюся высокой степенью чистоты.Пример 1, Берут 10 г(33,4 ммоль) И-фенилацетил-П,Ь-ФТЦ исуспендируют в небольшом количестведважды дистиллированной воды. Затемдоводят рН суспензии путем добавленияЦ н. раствора гидроокиси натрия до 7,8, после чего добавляют дистиллиро 4ванную воду до получения 500 мл раствора.сВ него вносят 15 мг пенициллин-С-ацилазы в виде лиофилизата, выделенной из ЕзсЬегхсМа со 11. АМСС 11105,и полученную. реакционную смесь выдерживают 15 ч при комнатной температуре, после чего отбирают пробу и устанавливают путем окрашивания ее нингидрином содержание свободной аминокислоты, В данном случае степень 45превращения составляет около 50%, Затем с помощью концентрированной соляной кислоты доводят рН смеси до 2,01 в .3,0, Фильтруют и полученный прозрачный раствор субстрата пропускают через колонку, заполненную 150 г Пауепса (К) 50 И х 2 (Н -Форма) . и водоц из колонки вымывают свободнуюаминокислоту в виде гидрохлорида.Из упаренного элюата получают чистыйгидрохлорид ФТЦ с т. пл. 199-200 С. Выход составляет 3,3 г (15,2 ммоль)45 4%),Из гидрохлорида путем обработкиокисью пропилена получают свободнуюкристаллическую 1,-аминокислоту ст,пл. 217-219 С и удельным углом враощения 1 Ю 1 р =- +28П р и м е р 2, Берут 60 г(200,5 ммоль) Ы-Фенилацетил- П,Е-ФТЦи смешивают с небольшим количествамводы. Затем раствором гидроокиси натрия доводят рН суспензии до 8,0. После этого добавляют воду до объемасуспензии, равного 1,0 л, и смешивают. с Фиксированной пенициллин-С-ацилазой (активность примерно равна80 l /г). Полученную реакционнуюсмесь перемешивают 1,5 г, а затемотделяют Фильтрацией нерастворимыйв воде катализатор, Полученный фильтрат пропускают через колонку, заполненную 750 г сильно кислотной катионообменной смолы.Дальнейшую обработку раствора ведут по примеруВ результате получают 20 г(92 ммоль = 46%) гидрохлорида Е-ФТЦос т.пл. 199-201 С, удельным углом122 овращения= 23,3 и молярным вра 2,-33 .щением р = 50,7.Полученная после обработки гидрохлорида окисью пропилена свободнаяЕ-ФТЦ имеет т,пл. 216-217 С, удельный угол вращения о 3 = +28,5 и молярное вращение р, = 51,6П р и м е р 3. С целью исследования стабильности, связанной с носителемпенициллин-С-ацилазы, используемойв примере 2, по отношению к Х-аенилацетил-П,.-ФТЦ,. 100 мг ФиксированнвгоФермента смешивают с 10 мл 5%-ноговодного раствора И-фенил-ацетил-Р,.-ФТЦ (рН суспензии стабилизируют науровне 7,8 путем добавления Фосфатнвго буфера). Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре, Через24 ч раствор субстрата Фильтруют, отделяют фермент и вновь смешивают сраствором субсграта.Активность Фермента измеряют посодержанию свободной ФТЦ через 45 мини через 22,5 ч. путем окрашивания пробнингидрином,Значительного уменьшения стабильнэсги, связанной с носителем пенициллин1246897 Составитель М,АндрееваТехред Г,Гербер Корректор Г.Решетник,Редактор А.Шандор Заказ 4030/60 Тираж 490 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5-С-амилаэы, не было обнаружено спустя8 недель. В каждом случае через 45 минс начала реакции гидролизовалось около 207, а спустя 22,5 ч около 50 Е врасчете на примененную рацемическуюсмесь,П р и м е р 4, Для получения фиксированной пенициллин-С-амилазы берут коллагеновые мембраны, их активируют О по методике Кулэ, а затем смачивают 2 мл раствора пенициллин-С-амилазы, содержащего О, 1 моль фосфата калия с рН 8,0, 0,25 моль ацетата натрия, и 0,0247-ным раствором водного азида натрия. Мембраны в этой смеси выдерживают 4 ч при 4 С, а затем промывают 1 М раствором хлористого натрия и 50 ммоль калпфосФатного буфера (рН равна 7,0).Полученный материал вводят в реак" цию описанным в примере 2 образом с 60 г И-фенацетил-П-Ь-ФТЦ. В результате получают Ь-ФТЦ с тем же уровнем оптической чистоты, что и гидрохлорид Ь-ФТЦ по примеру 2.