Способ определения флавоноидов

(71) Иркутский государцинский институт(56) В.А.Пешкова, М.П,ШУИзучение препаратов растии синтетического происхождзисы научной межвузовскойренции. Томск, 1978, ч.1,(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЛАВОНОИДОВ путем экстракции растительногосырья этанолом, Ферментолиза, растворения агликонов в этаноле с последующей хроматографией на бумаге,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью повышения точности и сокра-щения времени анализа, экстракциюпроводят 70-807-ным этанолом втечение 1,5-2 ч на кипящей водянойбане, затем агликоны разделяют ме- .тодом противоточной хроматографиис последовательной сменой систем1 Ои 55-652-ной .Уксусной кислоты,1213415 55 Изобретение относится к анализу лекарственного растительного сырья и может быть использовано для оценки доброкачественности сырья.Целью изобретения является повышение точности и сокращение времени анализа.П р и м е р. Точную навеску , 0,5007 г (А 1 травы змееголовникапоникшего, проходящей через сито с размером отверстий 2 мм, помещают в колбу емкостью 100 мл, заливают 50 мл (Ч) 757.-ного этанола,предварительно взвешивают и экстрагируют на водяной бане (С 85 С ) во течение 2 ч в колбе с обратным холодильником. Затем колбу охлаждают до комнатной температуры, доводят да первоначального веса 753-ным этаколом и отфильтровывают через фильтр.Извлечение в объеме 25 мл (Ч,) переносят в выпарительную чашку и удаляют спирт нагреванием на водяной бане. Оставшееся водное извлечение количественно переносят в дели- тельную воронку на 50 мл. Хлорофилл со стенок выпарительной чашки смывают 10 мл хлороформа, добавляя его порциями по 3-4 мл, хлороформ присоединяют к водному извлечению в делительной воронке.Содержимое делительной воронки аккуратно перемешивают встряхиванием и оставляют в покое до полного расслоения водного и хлороформного слоев,Затем хлороформное извлечение отделяюти водный слой сливают в ту же выпарительную чашку. Делительную воронку дважды споласкивают дистиллированной водой порциями по 2 мл иприсоединяют к содержимому в выпарительной чашке.К очищенному таким образом водному извлечению прибавляют 0,1 г фермеитного препарата "Пектаваморин Г 10 х" и гидролиз проводят в течео рие 72 ч в термостате при 38 С. Полноту ферментолиза контролируют методом двухмерной бумажной хроматографии в системах бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:2) и 153-ная уксусная кислота, просматривая хроматограммы в Уф-свете.По окончании ферментолиза гидроизат обрабатывают 953-ным этанолом 1оподогретым до 50 С, добавляя его порциями по 2-3 мл. Спиртовый растгвор агликонов фильтруют в мернуюколбу на 25 мл. Полноту растворенияагликонов контролируют капельнойпробой на фильтровальной бумаге,отработанной 1 Х-ным спиртовым раствором хлористого алюминия. Объем доводят до метки (Ч , ), тщательнообрабатывая чашку и фильтр этанолом.Полученный раствор агликонов в объеме 0,2 мл (Ч ) нано ят на лист хроматографической бумаги. марки "М"на линию старта сплошной полосой ипроводят противоточное хроматографирование, дпя чего хроматографируютв одном направлении в 123-йой Уксусной кислоте, обеспечивая развитие хроматограммы на всю длину хроматографического листа, После просушивания хроматограммы просматриванием в УФ-свете определяют распо-.ложение флавоноидов и фенолкарбоновых кислот. Затем зону А, соответ;ствующую расположению фенолкарбоновых кислот, срезают. Оставшуюсячасть хроматограммы развивают в противоположном направлении в системе603-ной уксусной кислоты. После высушивания хроматограммы детекцию агликонов проводят просматриванием вУФ-свете.Зоны хроматограммы, соответствую- .щие определяемым агликонам, разрезают и высушивают в термостате прио40-50 С до исчезновения запаха уксусной кислоты. Подготовленныетаким образом кусочки хроматограммпомещают в пробирку со шлифом, заливают 4 мл (Ч) абсолютного, этанола и оставляют до достижения равновесной концентрации (2 ч - дляапигенина и 4 ч - для лютеолина.Параллельно аналогичным способом ,получают элюаты стандартных агликонов лютеолина и апигенина, обеспевчивая концентрацию их в элюате по1 О мкг/мл.Оптическую плотность элюатовизмеряют на спектрофотометре СФ в области аналитической длины волны (338 нм - для апигенина и 350 нмдля лютеолина) при толщине поглощающего слоя 1 см,10 15 20 25 30 35 40 45 50 В качестве раствора сравнения используют элюат холостой пробы, обработанной аналогичным образом.Сравнительные данные известного и предлагаемого способов представлены в таблице.213415 Относительная ошибка определения, Х Определяемыеагликоны известного способа предлагаемого способа 6,26 4,76 Такщю образом, точность определения по предлагаемому способу, вышетак как относительная, ошибка Составитель Е.Кс счина Редактор Т.Кугрышева Техред М.Пароцай Корректор Т,КолбЗаказ 778/55 Тираж 778 . Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 13035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул.Проектная, 4 Лют еолин Апиге вин 10,60 13,72 определения ниже.Крометого,время анализа по известному способу составляет104,8 ч.,по предлагаемому - 82,4 ч.