Способ определения метилового эфира l-фенил-l-(пиперидил-2) уксусной кислоты гидохлорида

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ и 934365 Союз СоеетсиикСфциапнстичесиииРеспублик(5 )М. Кл. С 01 й 31/08 6 ЬеудврствеииыЯ комитет СССР в делом изобретениЯ и открытиЯ(72) Автор изобретения С.Е.Колбина Иркутский государственный медицинский институт(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МЕТИЛОВОГО ЭФИРА с ФЕНИЛ- Ы-(ПИПЕРИДИЛ) УКСУСНОЙ КИСЛОТЫ ГИДРОХЛОРИДА Изобретение относится к медицине, а именно к токсико-химическому аналит зу, и может быть использовано при определении метилового эфира о-фенил- о -(пиперидил) уксусной кис 5 лоты гидрохлорида (метилфенидата).Известны способы определения метилфенидата путем идентификации его в тонком слое сорбента.Известен способ определения метилфенидата, который экстрагируют из биологического объекта и хромотографи. руют полученный экстракт в тонком слое сорбента, В качестве сорбента используют силикдгель, Хроматографирование осуществляется в системе растворителей хлороформ-гептан 951-ный этанол, взятых в соотношении 1:1:11.Наиболее близким к предлагаемому является способ определения метилфенидата путем обработки анализируемой пробы эфиром, с последующим хроматографированием на тонком слое сорбента - окиси алюминия. Край пластитт ки с нанесенной пробой смеси веществ и свидетеля погружают в систему растворителей пропаиол - буферная смесь, взятых в соотношении 9:1, рН смеси растворителей равен 4,0. По мере продвижения жидкостей по пластине происходит разделение смеси веществ. Вь 1 явление зон метилфенидата проводят йод-платиновым реагентом. Зоны метилФечидата определяют по Р=0,8 и по появлению желто-оранжевого окрашива" ния 23Однако известные способы применяют лишь для определения значительного количества метилфенидата (1- 10 мг) и не используют для определения минимального содержания вещества в исследуемом объекте вследствие малой чувствительности. Кроме того, обладают малой специфичностью идентификации, так как при исследованииФ биологического материала из него ,экстрагируются совместно с метилфени 3 93436датом и балластные вещества, которыена хроматограмме также дают зонуй = 0,8-09 что затрудняет определение эон метилфенидата. Поэтомуизвестные способы не применимы длятоксико-химического анализа на метилфенидат,Цель изобретения - повышение чувствительности и специфичности определения, оПоставленная цель достигаетсяспособом определения метилового эфирЬ с.-фенил-о-(пиперидил)уксуснойкислоты гидрохлорида путем обработки"анализируемой пробы хлороформом с 5последующим хроматографированием натонком слое сорбента в системе растворителей и детектированием полученной хроматограммы реагентом, в качестве органицеского растворителя ис 20пользуют хлороформ, в качестве системырастворителей используют систему хлороформ - уксусная кислота - этиловыйспирт, взятые в объемном отношении2, 5-3,5 : 0,8-1,2 : 2,8-3,2, предварительно хлорируют хроматоргаммуперед детектированием и в качестве,реагента используют о-толидин.Экстракт метилфенидата хроматографируют на тонком слое силикагеля марЗОки КСК, КСК ЛСЛ/254 или на тонкомслое силуфола.Установлено, цто экстракцией хлороформом достигается наиболее полноеизвлечение метилфенидата из исследуемого объекта. Хроматографированиена тонком слое,сорбента в системе хлороформ - уксусная кислота - этиловыйспирт позволяет выявить малое качество метилфенидата в исследуемом объекте.4 аИспользуемое соотношение компонентов позволяет кацественно идентифицировать 0,2-0,3 мкг метилфенидата впятне против 1-10 мг в известном способе. При использовании данной системы растворителей повышается цувствительность идентификации почти в5 тыс. раэ и ее специфичность. Так,величина пробега растворителейдля метилфенидата в описываемых условиях составляет 0,530,01 при анализе на силикагеле КСК, КСК ЛСЛ/254и К=0,49 + 0,01 на силуфоле.Учитывая, цто В балластных веществ при извлечении метилфенидата Ыиэ биологических объектов = 0,8-0,9,наложение эон исследуемого метилфенидата и балластных веществ не происходит, в то время как в известном способе В метилфенидата = 0,8 и К балластных веществ = 0,8-0,9.Установлено, цто сорбенты силикагель КСК, КСК ЛСЛ/254 и силуфол повышают чувствительность определения метилфенидата, так как позволяют получить четкую зону исследуемого вещества в центре пластинки, Хлорирование и последующее опрыскивание хроматограмм о-толидином позволяет обнаружить зоны метилфенидата в виде синих пятен.П р и м е р 1, Две таблетки центендрина с содержанием по 1 О мг метилфенидата в каждой растирают и исчерпывающе экстрагируют хлороформом (3 раза по 5 мл хлороформа) .Экстракт отфильтровывают и доводят объем фильтрата хлороформом до 25 мл. Затем на стартовую линию хроматографической пластинки 9 х 12 со слоем силикагеля КСК ЛСЛ/254 наносят микро- капилляром 0,005 мл полученного раствора метилфенидата в хлороформе в виде пятен диаметром около 1 мл. Хроматограмму развивают в системе хлороформ - уксусная кислота - этиловый спирт, компоненты которой берут в соотношении 3;1;3 . Пробег Фронта растворителя составляет 10 см. Затем хроматограмму высушивают на воздухе, помещают в камеру для хлорирования на 1-2 мин,Камеру для хлорирования готовят следующим образом. В камеру наливают смесь равных частей 1, Я-ного водного раствора перманганата калия и 10-ного раствора соляной кислоты. После хлорирования хроматограмму выдерживают на воздухе в течение 10 мин и опрыскивают о-толидином.Для приготовления раствора о-толи- дина растворяют 160 мг о-толидина в 30 мл ледяной уксусной кислоты и доводят объем водой до 500 мл, добавляют 1 г йодистого калия. Зоны метилфенидата проявляются пятном синего цвета.В метилфенидата на тонком слое силикагеля КСК, КСК, ЛСЛ/254 составляет 0,53+0,01. Чувствительность детектора о-толидина по отношению к метилфенидату составляет 0,2-0, 3 мкг в пятне.Приготовление пластин для тонкослойной хроматографии.Растворяют смесь 2,4 г силикагеля, 0,16 г гипса и 6, 7 мл воды, затем наносят смесь на стекляннуюпластинку размером 9 х 12, сушат навоздухе и активируют в сушильномшкафу при Т=110 С в течение 20 мин.П р и м е р 2. Метилфенидат, извлеченный из затравленной биологической жидкости (кровь, моча), наносят на стартовую линию хроматографической пластинки размером 5 х 11со споем силуфола. Наносят, микрокапилляром 0,005 мл полученного раствора метилфенидата в хлороформе ввиде пятен диаметром около 1 мм, нарасстоянии 2 см наносят свидетель,Хроматограмму развивают в системехлороформ - уксусная кислота - этиловый спирт, компоненты берут всоотношении 3:1:3. Пробег Фронтарастворителей составляет 1 О см.После чего хроматограмму подсушивают 20на воздухе, помещают в камеру дляхлорирования на 1-2 мин, затем хроматограмму выдерживают на воздухев течение 15 мин и опрыскиваюто-толидином, 25П р и м е р 3. Две таблетки цен,тедрина с содержанием по 10 мг метил фейидата в каждой растирают и исчерпывающе зкстрагируют хлороформом 3 раза по 5 мл хлороФорма, Экстракт отфильтровывают и доводят объем фильтрата хлороформом до 25 мл. Затем на стартовые линии хроматографических пластинок размером 9 х 12 со слоем КСК, КСК ЛСЛ/254 и силуфола 5 х 11 наносят по 0,005 мл раствора метилфенидата в хлороформе в виде пятен диаметром около 1 мм, Хро.матограммы развивают в системе хлороформ - уксусная кислота - этиловый спирт, взятых в объемном соотношении 2, 5 : О, 8 : 2,8.Пробег фронта растворителей 10 см, После подсушивания на воздухе хроматограмму помещают в камеру для хлорирования на45 1-2 мин ( в камеру наливают смесь равных частей 1,53-ного раствора перманганата калия и 10/-ного раство - ра соляной кислоты), выдерживают на воздухе 10-15 мин и опрыскивают50 раствором о-толидина. В метилфенидата на силуфоле О, 44, на сорбенте КСК, КСК ЛСЛ/254 Вд=0,50.П р и м е р 4. Две таблетки центедрина с содержанием по 1 О мг метилфенидата в каждои растирают ич 55 исчерпывающе экстрагируют хлороформом 3 раза по 5 мл хлороформа. Экстракт отфильтровывают и доводят объем фильтрата хлороформом до25 мл, Затем на стартовые линии хроматографических пластинок размером9 х 12 со слоем КСК, КСК ЛСЛ/254 исилуфола 5 х 11 наносят 0,005 мл раствора метилфенидата в хлороформе в ви.де пятен диаметром около 1 мм. Хроматограммы развивают в системе хлороФорм - уксусная кислота - этиловыйспирт (объемное соотношение 3,5:1,2::3,2) . Пробег Фронта растворителей 10 см. После подсушивания навоздухе хроматограмму помещают вкамеру для хлорирования на 1-2 мин(в камеру наливают смесь равныхчастей 1,5 ь-ного раствора перманганата калия и 10-ного раствора солянойкислоты), выдерживают на воздухе 1015 мин и опрыскивают растворомо-толидина. В метилфенидата на силуфоле О, 52, на сорбенте КСК, КСКЛсл/254 ВХ= О 56Предлагаемый способ позволяетс высокой чувствительностью и специфичностью качественно определить метилфенидат. В предлагаемом способеспецифичность повышена за счет использования величин В, являющихсяхарактерными для токсико-химическихвеществ в данных условиях эксперимента. Значительные различия в величинах В веществ свидительствуют о высокой разделяющей способности, рекомендуемой хроматографицеской системы по отношению к веществам Вметилфенидата на КОК, КСК ЛСЛ/2540,53-0,01;,к,орф а В-О,12; Ви кодеина О, 085 0,01; В кокаина 0;В стрихнина 0; В йромедола 0,В Фенобарбитала й барбамила О).В метилфенидата на силуфоле0,490,01, В рф а О, 170,02,Ес коаеина 0,1-0,02, кокаина, стрик.нина, промедола, фенобарбитала ибарбамила В =О.Таким образом, предлагаемый способ расширяет возможности идентификации метилфенидата, так как установлено, что важные в токсико-химическом отношении вещества: морфин,кодеин, стрихнин, кокаин, промедолфенобарбитал, барбитал не мешают.его обнаружению, в то время какв известном способе В метилфенидата совпадает сВ балластных веществ.Кроме того, предлагаемый способпозволяет почти в 5 тыс. раз повысить чувствительность определения.934365 формула изобретения ФСоставитель Л.РусановаТехред А, Ач Корректор О.Билак ФРедактор С.Крупенина Тираж 887 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д, 4/5 Заказ 3927/40 филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,Способ определения метилового эфира о -фенил(пиперидил) уксусной кислоты гидрохлорида путем обработки анализируемой пробы органическим растворителем с последующим хроматографированием на тонком ,слое сорбента в системе растворите,лей и детектированием полученной хроматограммы реагентом, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности и специфичности определения в качестве органического растворителя исполь,зуют хлороформ, в качестве системы растворителей используют систему хлороформ - уксусная кислота - этиловый спирт, взятые в объемномотношении 2,5-3 5 : 0,8-1,2 : 2,8-3,2,перед детектированием хроматограммупредварительно хлорируют и в качест ве реагента используют о-толидин. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1, Тага В.А. МесаЬо 1 зв апддзроз 11 оп о 1 веЬу 1 - рЬепсаде1 С зйцсез 1 п вап апд ап 1 ваз- 191 Мф 3, р 535-5472. 5 сЬцЬегй В, Ое 1 есй 1 оп апс1 депт 1 сай 1 оп от МейЬу 1 рЬепсае 1 иНцвап Огпе апд В 1 оос 5 авр 1 езАсасйевса 5 сапдпачса, 24(1970),Н 2, р. 433-438 (прототип) .