Способ идентификации

-гиги ва О.го,. етодамиорное ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ОПИСАНИЕ ИЗОБР АВТОРСКОМУ СВ(71) Ленинградский санитарннический медицинский инстит(54) (57) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ЗТАРНТ 1,0 СОСС 08 АОВЕОБ путем приготовления мазков микробной культуры, фиксации, обработки гетерологичиой люминесцирующей сывороткой и определением белка А при люминесцентиой микроскопии клеток, о т л и.ч я ющ и й С я тем, что, с. целью повыщения точности способа, мазки культуры стайилококков обрабатывают гетерологичной ослиной. сывороткой при рН 9,0-9,4.Изобретение относится к микробиологии, а именно к методам идентификации стаАилококков, и может бытьприменено в диагностических целях.Целью изобретения является повышение точности идентификации .Б.ацгецз по белкуАФП р и м е р 1. ИдейтиАикацияБ 1:, ацгецэ по белку А в мазках чистых культур, выращенных на плотныхсредах. Из материала колонии, выращенной на питательном агаре, готовят извесь культуры в 0,15 М растворе хлористого натрия плотностью200 млц микробных тел в 1 мл пооптическому стандарту мутности. Полученную взвесь наносят на предметное стекло в виде тонкого мазка. Мазок высушивают при 18 С. Высушенныймазок Ъиксцруют погружением в ацеГ0тон на 15 мин и высушивают при 18 С.Сухую ампулированную люминесцентцую ослиную сыворотку (коммерческий биопрепарат) разводят до рабочего титра согласно указанному. на этикетке ампулы титру конкретной сериибиопрепарата 0,05 М раствором тетрабората натрия (Ба, В.О 10 Н, 0),приготовленным ца 0,15 11 растворехлористого натрия. рН полученнойразведенной ослиной люмицесцецтцойсыв 01 отки 9,2,Полученной разведенной ;ывороткойобрабатывают маэки культуры прио,рН 92 во влажной камере при 37 Св течение 20 мин,Окрашенные мазки промывают в течение 10 миц трехкратно меняемымипорциями 0,15 М раствора хлористогонатрия ополаскивают дистиллированной водой и высушивают при 18 С,На высушенный мазок наносят каплюне люмицесцирующего иммерсионногомасла и микроскопируют мазок в люминесцецтном микроскопе с объективом 90 и окуляром 7 , БГ. ацгецзидентифицируют по специйической люминесценции клеток в виде яркой,изумрудной, сверкающей люминесценции по церидерии клеток с темнымцентром, интенсивностью 4 креста,П р и м е р 2, ИцентийикацияБ. ацгецэ по белку А в мазках чистых культур, выращенных в жидкихпитательных средах. Каплю культуры,выращенной на мясо-пептонном бульо 50 55 10 Н 0), приготовленным на 0,15 М 5 1 О 15 20 25, 30 35 40 45 це, наносят в виде топкого мазкана предметное стекло.б,Мазок высушивают при 18 С. Высушенный мазок Ьихсируют .погружениемв ацетон ца 15 миц ц снова высуши-вают при 18 С.Сухую ампулированную люминесцентную ослиную сыворотку (коммерческийбиопрепарат) разводят до рабочеготитра согласно указанному на этикетке ампулы титру конкретной сериибиопрепарата 0,05 М раствором тетрабората натрия (ИаВОТ 10 Н О), п 1 иготовленцым на 0,15 М растворе хло"ристого натрия. рН полученной разведенной ослиной люминесцецтной сыноротки 9,2,Полученной разведенной сывороткой обрабатывают мазки кУльтуры прирН 9,2 во влажной камере при 37 Св течение 20 мин,Окрашенные мазки промывают в течение 10 мин трехкратцо меняемымипорциями 0,15 М раствора хлористогонатрия, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают при 18 С,На высушенный мазок наносят каплюне люминесцирующего иммерсиоцногомасла и микроскопируют мазок в люмицесцентном микроскопе с обьектиХ Квом 90 и окуляром 7 . Бг., ацгецзидентифицируют по специфической люминесценции клеток в виде яркой,изумрудной, сверкающей люминесценции по периферии клеток с темнымцентром, интенсивностью 4 креста,П р и м е р 3. ИдентификацияБ 1.ацгецэ по белку А в мазках изматериалов от больных, Из материалаот больных в виде гноя ран, полостейделают тонкий мазок на предметномОстекле. Мазок высушивают при 18 С.Высушенный мазок фиксируют погружением в ацетон на 15 миц и снова высушивают при 18 С. Сухую ампулированную люминесцентную .ослиную сыворотку (коммерческий биопрепарат) раэводяг. до рабо, чего титра согласно указанному на этикетке ампулы титру конкретной серии биорепарата 0,05 М раствором тетрабората натрия (НаВО " растворе хлористого натрия. рН полученной. разведенной ослиной люминесцентной сыворотки 9,2,1192830 Составитель Г.КрюковаРедактор Т,Кугрышева Техред С.Мигунова Корректор В.Синицкая Заказ 8119 Тираж 721 Подписное ВНИИПИ Государственного. комитета СССР по делам изобретений и.открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 полученной. разведЕнной сывороткой обрабатывают мазки материала от больныхпри рН 9,2 во влажной камере при 37,С в течение 20 мин.Окрашенные мазки промывают в течение 10 мин .трехкратно меняемыми порциями. 0,15 М раствора хлористого натрия, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают при 18 С,На высушенный мазок наносят каплю не люминесцирующего.иммерсионного масла и микроскопируют мазок влюминесцентном микроскопе с объективом 90" и окуляром 7", Яй.аогепзидентифицируют по специфическойлюминесценции клеток в виде яркой,изумрудной, сверкающей люминесценции по периферии клеток с темнымцентром, интенсивностью 4 креста,В результате использования способа идентификации. ЯС.апгепз по белку А при рН 9,0-9,4 с помощью гетерологичной ослиной люминесцирующейсыворотки повышается точность .идентификации Я. апгеиз до 99,6 Х,Предлагаемым способом и известнымизучено 1. 180. культур микроорганизмов разных видов и таксономи ческих групп.При использовании известного способа удалось идентифицировать только 22,9 Х культур вида Яй.алагема.При использовании предлагаемого 15 способа идентифицируется 99,6 Хкультур ЯС. ацгецз, а также незначительное число ЯТ.ерЫепцЫ 1 в(2,9 Х культур). Микроорганизмы прочих видов и физиологических групп, 2 п не обладая протеином А, не идентифицируются с помощью предлагаемогоспособа.