Способ определения поливинилового спирта в тканях на гистологическом препарате

( 9) (11) ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ на Ино, огичесеров телей: ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРг 10 делАм изОБРетений и ОтнРытий,странная литература, 1964,Седов А.А. Изучение биоких свойств некоторых полии сополимеров - .кровозаменДис. 1972, л. 113.(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛИВИНИЛОВОГО СПИРТА В ТКАНЯХ НА ГИСТОЛОГИЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕ путем фиксацииткани, обезвоживания, заключения впарафин, приготовления срезов и ихокрашивания, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью повышения точностиспособа, фиксацию ведут в растворесодержащем 96-градусный этиловыйспирт и формалин в соотношении 9:1,а в качестве красителя используют1%-ный водный раствор конго красного, при этом срезы перед окраской ипосле окраски помещают в 70-75-градусный этиловый спирт при 33+3 С.Изобретение относится к медицинеи предназначено для оценки токсичности и качества выпускаемых образцов поливинилового спирта, предназначенного для использования в разных областях народного хозяйства.Целью изобретения является повышение точности способа.Способ осуществляют следующим образом, 10Фиксируют кусочек ткани. Причем фиксацию ведут в растворе, содержащем 96-градусный этиловый спирт и формалин в соотношении 9:1, после чего гистологический материал обезвожива ют и заливают парафином. Приготавливают парафиновые срезы толщиной 5-7 М, которые затем окрашивают. При этом срезы до и после окраски помещают в 70"75-градусный этиловый спирт 2 О при 333 С, Окраску проводят 1 Е-ным водным раствором конго красного.Пример 1. Кусочки ткани почек крысы размером 0,50,5 см помещают в спиртоформол на 24 ч, после чего 25 гистологический материал проводят через одну порцию (обезвоживание), две порции хлороформа и заливают парафином. Парафиновые срезы толщиной 5,6 и )р расправляют на 707-ном спир-ЗО те при ЗЗфЗ С, затем подсушивают их при комнатной температуре. Далее срезы депарафинируют, погружая их последовательно в 2 порции ксилола и 2 порции 96-градусного спирта,35 быстро споласкивают в воде и помещают срезы в 1 Е-ный водный раствор конго красного на 3 мин, дифференцируют в 70-градусном спирте, помещают в 2 порции 96-градусного спирта, 2 порции40 ксилола и заключают в канадский бальзам,В результате окрашенные капли полимера (ПВС) красного цвета ясно прослеживаются в извитыхканальцах почек,45цитоплазме дегенерирующих эпителиаль.ных клеток и в просвете капилляровклубочков почек.П р и м е р 2. Опыт проводят по примеру 1, но срезы приготовляют на 75-градусном спирте.Результат тождественен тому, который показан в примере 1.П р и м е р 3. Опыт проводят по примеру 1, но срезы дифференцируют в 75-градусном спирте,Результат тождественен тому, который показан в примере 1. П р и м е р 4 (контрольный). Опытпроводят по примеру 1, но приготовленные срезы расправляют на 80-гра-.дусном спирте с температурой 33+3 С.В этом случае срезы мгновенно расправлялись на поверхности спирта,разрывались, а морфологические структуры повреждались, тем самым труднобыло судить о наличии ПВС.П р и м е р 5 (контрольный). Опытпроводят по примеру 1, но срезы расправляют на 60-градусном спирте стой же температурой.Расправить срезы удавалось с трудом, часть отложений ПВС вымывалась ина месте включений ПВС образовывалисьпустоты.П р и м е р 6 (контрольный). Опытпроводят по примеру 1, но приготовление срезов осуществляют на 70- градусном спирте с температурой 26+ЗОС.В этом случае срезы не расправлялись и исследование морфологическойкартины под микроскопом невозможнобыло проводить.П р и м е р 7 (контрольный). Опытпроводят. по,примеру 1, но срезы дифференцируют в 60 градусном спирте. Врезультате дифференцировки происходит окрашивание фона, что затрудняетоценку вложений ПВС.П р и м е р 8 (контрольный). Опытпроводят по примеру 1, но срезы дифФеренцируют в 80-градусном спирте,Врезультате дифференцировки происходитбыстрое вымывание Фона, что затрудняет оценку отложений ПВС,П р и м е р 9. Приготавливают назамораживающем микротоме срезы почектолщиной 14 /и, Фиксацию осуществляютв фиксирующих растворах, состоящих изсульфата аммония и насыщенного раствора периодата калия в соотношении1:1, в которые добавляют йодистыйкалий, последующую Фиксацию проводят в 107,-ном водном растворе нитрата уранила, в который добавляюткристаллический иод. После этогосрезы обрабатывают последовательноследующими растворами,1 раствор - 3 ч. абсолютного спирта + 7 ч. ксилола,11 раствор - 1 ч. абсолютногоспирта + 9 ч. ксилола111 раствор - ксилол.Смена растворов идет через 30 мин, .во все растворы введен кристаллический йод. Окраска происходит во времяЗаказ 6353/36 Тираж 896 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4 всей фиксации гистологического материала. Затем срезы заключают в канадский бальзам.В результате из-эа толщины срезов затруднено распознавание мест отло жений ПВС в морфологических структурах; из-эа частичного вымыванияполимера наблюдались пустоты в гистологическом срезе почек.П р и м е р 10. Крысам самцам 1 О вводили однократно внутрибрюшинно 10 -ный раствор ПВС с ММ 10000-12000 с содержанием ацетатных групп 5-15 . Окраску серийных срезов почек и селе зенки производили по методу Янксо в 15 модификации В.П.Теодоровича и по предлагаемому способу (см.пример 1). В результате окрашивания гистологических серийных срезов по предлагаемому способу в просветах капилляров 20 клубочков и извитых канальцев почек, а также в области красной пульпы селезенки обнаруживали капли ПВС во всех серийных срезах. При использовании метода Янксо в модификации 25 В.П.Теодоровича были видны только отдельные капли полимера в единичных срезах. Количество выявленного ПВС по методу Янксо в модификацииВ.П.Теодоровича составило 20-30 от ЗО содержанич ПВС на срезах, окрашенных предлагаемым способом, Во всех срезах использован для окраски 1 -ный водный раствор конго красного.0 непригодности 0,5 и 1,5 -ных водных растворов конго красного свидетельствуют такие примеры. П р и м е р 12 (контрольный).Опыт проводят по примеру 1, но срезы помещаютв 0,5 -ный водный раствор40 конго красного на 3 мин. Концентрация раствора недостаточна для окра-Ъ 162 4шивания морфологических структур, содержащий ПВС, а дифференцировка обеспечивает гистологические срезы.П р и м е р 13 (контрольный). Опыт проводят по примеру 1, но срезы помещают в 1,5 -ный водный раствор конго красного на 3 мин. В результате опыта происходит интенсивное диффузионное окрашивание фона среза и отдифференцировать отложения ПВС оказалось невозможным.Использованный в способе спиртоформол представляет собой смесь 9 ч, 96 -ного спирта и 1 ч, 40 -ного формалина.Во всех примерах конкретно указаны органы животных (печень, почки), а также дано формологическое описание отложений ПВС даже в тех случаях, ког да полимер откладывается в виде единичных капель.В контрольных примерах в каждом случае указано,ек чему приводит нарушение режимов обработки гистологического материала.Преимущества предлагаемого способа состоят в том, что благодаря минимальному контакту гистологического материала с водой в процессе проводки, фиксации и окраски ПВС не вымывается и мы обнаруживаем его полностью. Кроме того, исключается использование дефицитного, токсичного и радиоактивного нитрата уранила. Иэ-за химической токсичности естественного урана вдыхание урана любого изотопного состава в растворенной форме не должно превышать 2,5 в сут., а поглощение растворимого урана с пищей не должно превышать150 мг в сутки.Вместо четырех осевых реактивов используется один реактив - конго красный