Способ получения микрокапсулированной липазы

,ЯО 1112056 Зсщ С 12 11 9/18 С 12 Дт 11/02 НЫЙ КОМИТЕТ СССРОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ АМ ОБРЕТЕНИ И 6 МОТЕК(54)(57) 1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ К 4 КРКАПСУЛИРОВАННОЙ ЛИПАЗЫ путем диспергирования ее порошка в раствореацетилфталилцеллюлозы в органическом растворителе, добавления дисперсионной среды и испарения органического растворителя из полученнойэмульсии, отличающийся тем, что, с целью повышения стабльности фермента, используют липазу, предварительно смешанную с водорастворимым высокомолекулярным наполнителем при соотношении 1:0,25 0,75 соответственно.2, Способ по и, 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что в качестве наполнителя используют желат эфиры целлюлозы, или крахмал, или поливиниловый спирт.3. Способ по и. 1, о т л н ч а ющ и й с я тем, что, с целью упрощения процесса, в качестве органического растворителя используют н ил Отон,4, Спсс а ю дисперсионн ий парафин ОПИСАНИ по пп. 1 и 3, о т л ис я тем, что в качествей среды используют жид 1112956Изобретение относится к биохимии,а именно к способу получения микракапсулированной липазы, которая может найти применение в медицинепри заместительной терапии болезней,Обусловленных дефицитом ферментЯ,Поскольку липЯза инЯктивируетсяпри кислых значениях рН, а действиеФерментапроисходит в кишечнике,где значение рН составляет 7-8, цдля медицинского применения необхо-.димо иметь препараты линазы, микрокапсулированной в оболочке, котораяпредохраняла бы липазу от действияжелудочного сока. но растворялась 15в кишечнике.Известен способ получения микро-.капсулированной липазы, согласно которому путем высаживания полимера израствора получают микрокапсупы с обо-;:Олочкой из этилцеллюлозы 1:11:Однако такая оболочка не растворяется ни в желудочном соке, ни в ки -шечнике, поэтому действие ферментаможет происходить очень медленноза счет диФфузии.Наиболее близким к предлагаемомупо технической сущности и достигаемому результату является способ получения микрокапсулировянной липазыпутем диспергировяния ее порошка грастворе ацетилфтяпилцеллюлозы в органическом растворителе, добавлениядисперсионной среды и испаренияорганического растворителя из полученной эмульсии, при этом в качествеорганического растворителя используют изопропанол, а в качестве дисперсионной среды - 30%-ный раствор хлорида кальция.Оболочка микрокапсул Формируется4 Диспарением изопропанола при 35 С ипониженном давлении 21.Недостатком известного способаявляется невысокая стабильность Фермента, который при инкубации в желуэдачном соке рН 12) при 37 оС в течение 30 мин сохраняет 5-10% первоначальной активности,Цель изобретения - повышениестабильности Фермента,Указанная цель достигается тем,что согласно способу получения микро-:капсулированной липазы путем диспергирования ее порошка в растворе яцетилфталилцеллюлоэы в органическом 5-растворителе, добавления дисперсионной среды и испарения органическогорастворителя иэ полученной эмульсии используют липазу, предварительно смешанную с водорастворимым высокомол купярным наполнителем при соотношении 1:0,25-0,75 соответственно.При этом в качестве наполнителя используют желатин или эфиры целлю- Л.1 ИЛН КРЯХМЯЛ ИЛИ ЦОЛИВИНИЛО- ьый спирт.Целесообразно с целью упрощения процесса в качестве органического растворителя использовать ацетон,В качестве дисперсионной среды обычно используют жидкий парафин.Способ осуществляют следующим образом.Порошок фермента в соотношении 1."0 25-075 смешивают с водорястворимым няполннтелем, в качестве кот ар от о используют желатин, эфиры целлюлозь., крахмал, поливиниловый спирт, растворяют в небольшом количестве воды и высушивают, Полученную пластинку измельчают и диспергивчот в растворе ацетилфталилцеллюлозы в ацетоне: К полученной суспенэии приливают жидкий парафин и раствори- тель испаряют при комнатной температуре и нормальном давлении. Полученные микрокапсулы отделяют, промывают и сушат. В результате липаза полноцтью сохраняет свою активность. Оболочка из ацетилфталилцеллюлозы устойчива к действию желудочного сока и растворима в кишечном соке.Исгользование дпя капсулирования смеси липязы с напопнителем приводит к тому, что няполнитель защищает липазу от инактивации в процессе получения микрокапсул, а также от действия кислой средл. При инкубации при 37 С в течение 30 ьин липаза, микрокапсулированная с наполнителем, сохраняет 54-б 5% активности, в то время как липязя, микрокапсулирован.няя без няполнителя сохраняет 5-10%, я нятивняя липязя полностью теряет активность за 20 мин.П р и и е р 1. Липазу и метилцеплюпозу в соотношении 1:0,25 растворяют в ьь."нимапьном количестве дистиллированной воды и высушивают при 4 оС, Полученную однородную смесь измельчают до частиц диаметром меньше 250 мкм. 2 г.этого порошка дис - Нервируют в 15 мп 13,3%-ного раствора яцетилфталилцеллюпозы в ацетоне. Е суспенэии приливают 30 мп жидкого парафина и систему перемешивают в течение 1,5 ч при комнатной темпера1112056 Составитель О.СкородумоваТ хред Т.Фанта Редактор С.Пекарь 1(орректор В,Синицкая Заказ 6 ч 19/18 Тираж 521 ВНИИ)И Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, )К - 35, Раушскгя наб., д, Й/5Подписное Филиал П 1 П 1 "11 гтент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 туре до полного удаления ацетона и отверждения оболочек микрокапсул. Готовые микрокапсулы отфильтровывают от дисперсионной среды, прот- вают гексаном и сушат при комнатной температуре в течение 6 ч. Липаза после капсулирования полностью сохраняет свою активность. При инкубации микрокапсулированной липазы в желудочном соке при 37 фС в течение 20 мин сохраняется 807 первоначальной активности, в течение 30 мин - 657., в то время как нативная липаза в этих условиях полностью теряет активность за 20 мин.П р и м е р 2. Липазу и желатин в соотношении 1:0,5 растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды и далее поступают, как описано в примере 1, Препарат сохраняет 98/ активности после микрокапсулирования и 557 активности после инкубации в желудочном соке в течение 30 мин. П р и м е р 3. Липазу и поливиниловый спирт в соотношении 1:0,75 растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды и далее поступают, как описано в примере 1. Препарат сохраняет 987 активности после микрокапсулирования и 657 активнос - ти после инкубации в желудочном соке в течение 30 мин. П р и м е р 4. Липгзу н ргствсримый крахмал в соотношении 1:0,25растворяют в небольшом количестведистиллированной вогь: и по тупают, 5 как описано в примере 1, Препаратсохраняет полисстью фермента":"вную,активность после микрокапсулиронгния и 607 активности после ипкубации в желудочном соке в тече О ние 30 минП р и м е р 5, Липазу и нгтрийкарбоксиметилцсллюлозу в соотношении 1:0,4 растворяют в небольшомколичестве дистиллированной воды и 15 далее поступают, кгк описано в примере 1. Препгргт после микрокгпсулировгния сохраняет 997. активностии 577 активности после инкубгциив желудочном соке в течение 30 яин.П р и м е р 6 (контрольный 1,Микрокгпсулировгние проводят, используя липгзу без наполнителя. 2,0 глипазы диспергируют в 15 мл 13,37 нога раствора ацетилфталилцеллюлозы в ацетоне и далее поступают, какописано в примере 1.После кгпсулирования липгзг сохраняет 64,67 активности. Послеинкубглии липгзг сохраняет 64,6 ЗО активности. После инкубации микро -кгпсулировгнной липазы в желудочномсоке в течение 20 мин сохраняется102 активности, через 30 мпп - 57.