Способ культивирования -продуцентов -амилазы

Изобретение относится к биосинте.зу Ферментов, а именно к способукультивирования продуцентов аклазы.,например Васх 11 из заЬ;.;.11 а, ча питательной среде с биостимуляторамии может быть использовано дпя полу,чения высокоактивных репаратов длядвотновопства а т ге цдт:щевойлегкой и других отраслей промышленности.9Известны способы с использованиемстимуляторов для биосинтеза амилазу бактериальных продуцентов, например, с использованием в качестве стимуляторов полиалкилдиаминов, извлека-:-.,емых из культуральной жидкости после выращивания этих же бактерий ).11,а также .полиоксинропиленового эФира,добавляемого в болыпих количествахи порционно 23,20Однако указанные стимуляторы илидобавляются в среду в больших количествах, или имеют сложную технологию получения и нестандартны.Наиболее близким к предлагаемомупо технической, сущности и достигаемому положительному эФФекту является способ культивирования продуцентаваС-амилазы в условиях аэрации на пита-тельной среде, содержашей источникиг 0углерода, азота, минерапьлще соли,стимуляторы роста и воду, согласнокоторому микроорганизлы выращивают Таблиц а Содержание элементов, мас.7 Стимулятор Дополнительный Н; И ион металла раз- ности) 9,0 Фа-ВИК 59 6 5 3 Следы 26,) 3,7 Ыз.; 6,2 2,6 Ия; 3,5Со; 2,4 26,5 25,5 ва, мас.Х; крахмал 24,0; кукуруз 55 ный экстракт 502 СВ) 1,20;.сухие дрожжи 0,24, лактоза О,ЗО, магнии сернокислый 0,015; калий ФосФорнокислый 0,30; аммоний фосФорнокислыйИг.-Ьа-ВИК 59,5 5, О Ия-На-ВИК 61,8 5,5 Со-ВИК 60,9 6,1 Способ осуществляют следуюшим образом.Для культивирования продуцентов например ВасхПцз зцЬ 1 х 11 з, готовят питательную среду следующего сос;ана богатых крахмалом средах с. применением стимуляторов роста - кукурузного экстракта и гидролизата дрожжей 33.Однако интенсивность биосинтеза амилазы при известном способе культ.;вирования недостаточно высока, особенно если учесть высокое содержание крахмала в питательной среде .2/) .Цель изобретения - повьппение ами" политической активности. Поставленная цель достигается тем, .что согласно способу культивирования Вас 111 ыз вцЬ 1118 проду центов ь.-амилазы в условиях аэрации на питательной среде, содержащей источники углерода, азота, минеральные соли, стимуляторы роста и воду, в качестве стимуляторов роста используют сопи высокомолекулярных сланцевых кислот, содержащие ионы Со йа и Ис+, йа+ и Мг которые добавляют в среду в концентрации 0,0005-0,00) мас,Е.Используемые стимуляторы - соли высокомолекулярных сланцевых кислот ВОВИК) - представляют собой смесь полиФункциональных соединений с молекулярной массой оттыс, до 100 тыс. и элементным составом, приведенным в табл. 1.СЙВ-ВМК ССо-ВИК СМ-йа-ВМК С Ю-Ча-ВМК З 1 20двузамещенный 0,84; натрий хлористый 0,03; медь сернокнслая 0,00039окись кальция 0,012; кальций углекислый 0,03; амилосубтилин ГЗХ 0,165рН среды 6,2-6,4,5Для интенсификации процесса образования с 1,-амилаэы перед посевомкультуры бактерий в среду вводятстерильно стимулятор биосинтеза фер"ментов, в качестве которрго нспольэуют соли высокомолекулярных кислот "продуктов водно"щелочного окисления керогена сланцев, содержащие ионы кобальта, натрия, а также никеляили магния при концентрации стимулятора 0,0005-0,001%,Культивирование микроорганизмовпроводят в колбах на качалке илив полупромышленных условиях на ферментаторах емкостью 1,5 м периодическнм методом.Эффект от применения стимулято"ров биосинтеза амилазы определяют поприросту ее активности по сравнениюс активностью полученной в условиях 25без стимулятора, и выражают в единицах активности и в процентах.П р и м е р 1. При выращиваниибактерий Васд 11 цз зцЬСд 11 в БКнапитательной среде с крахмалом,состав которой приведен выше - производственной среде Вильнюсского ОПЗферментных препаратов - и при добавлении в качестве стимулятора биосинтеза з.-амнлаэы натриевых солейвысокомолекулярных сланцевых кис 35лот а-ВМК) в количестве 0,001% вферментаторах емкостью 1,5 мэ активность амилаз в опыте составляет4395-5160 ед/мп по сравнению с4028 ед/мл в контроле т.е, 110,528% в опыте по сравнению со 100%контроля .П р и м е р 2, При выращиваниипроизводственной культуры бактерийВас 111 цз зцЬе 111 з 8 Кв условияхпримера 1, но при добавлении в качестве стимулятора кобальтовых солей высокомолекулярных сланцевыхкислот (Со-ВМК) в концентрации0,0005% биосинтез:. амилаз составляет в среднем 3554 ед/мл по сравнению с 3025 ед/мл в контроле 4 116и 100% соответственно).П р и и е р 3, При выращиваниикультуры Вас 111 цз вцЬсх 11 в 5140в лабораторных условиях на производственной среде с крахмалом вкачапочных колбах емкостью 750 мп 57 4с объемом среды 50 мп при 32"С и при добавлении в качестве стимулятора 0,0075% натриевых солей высокомолекулярных кислот йа-ВМКбиосинтез амилаэ составляет в среднем 706 ед/мп по сравнению с 668 ед/мл в контроле (105,7 и 100% соответственно 1.П р и м е р 4. При выращивании Вас 111 цз вцЬС 11 з ЯКв условиях примера 3, но при использовании в качестве стимулятора магниево-натриевой соли высокомолекулярных сланцевых кислот М-Йа-ВМК 1 в количестве 0,0005% биосинтез ачилаэ составляет в опыте в среднем 779 ед/мп ,по сравнению с 668 ед/мл в контроле 113,8 и 100% соответственно 7П р и м е р 5. При выращивании культуры Вас 111 ив зцЬс 11 дв 5 140 в условиях примера 3, но при использовании в качестве стимулятора 0,0005% кобальтовых солей высокомолекулярных сланцевых кислот (Со-ВИК 1 биосинтез амнлаз в опыте составляет 735 ед/мл по сравнению с 668 ед/мл в контроле 110 и 100% соответственно).П р и м е р 6. При выращивании ,культуры Вас 111 цв зцЬд 11 в 8 Кв условиях примера З,но при использовании в качестве стимулятора биосинтеза Ы-амилазы никелево-натриевых солей высокомолекулярных сланцевых кислот 14 -а-ВМК 1 в количес 1 ве 0,0005% биосинтез амилаз составляет в среднем в опыте 779 ед/мл, в контроле 668 ед/мл, т.е. 116,6 и 100% соответственно ,В табл. 2 приведены результаты лабораторных испытаний стимуляторов бносинтеэа Ы-амилазы у Вас 111 цв вцЬ- с 111 з.Вариант ед/мл % Таблица 3 Вариант Амилолитическая активность ед/мл 7 Контроль безстимулятора С0,0017 М а-ВМК 4028 100,0 119,2 4778 Составитель Е,ВоробьеваТехред Т.Дубинчак КоРРектоР О,Тигор Редактур С,Пекарь Заказ 6419/18 Тираж 521 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, ЖРаушская наб., д. 4(5Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная,4 5В табл. 3 приведены результаты опытно-промышленных испытаний применения стимуляторов биосинтеза Ю-амилазы у бактерий Вас 111 из зцЬЕ 1 дз БКв условиях глубинного культивирования на ферментаторах 1,5 м Контроль без стимулятора С1 О 0,00057 Со-ВМК 3025 100,0 3554 116,0Таким образом, использование предлагаемого способа культивирования продуцентов о 1-амилазы из рода Вас 111 из обеспечивает увеличение амилолитической активности на 5,7-16,67 в лабораторных условиях и на 16,0 в 9,27 в полупроизводственных условиях,