Штамм. 853, содержащий гибридную плазмиду 4 продуцент 3, 5-циклического аденозинмонофосфата

ОЮЗ СОВ СНИХССЮНЛКЩНЕПИИХ Оо ОПИСАН И БРЕТЕН ьцмай наменститут им. по"Сап Е, ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬС(71) Ордена Трудового Краснони научно-исследовательскийэпидемиологии и микробиологичетного акад. Н,ф. Гамалеи(57) Штамм Е. со 1 Ь ВС 853, содержащий гибридную плазмиду р ТГ 4, Р 287(коллекция Ордена Трудового КрасногоЗнамени научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им. Н,ф. Гамалеи АМН СССР)продуцент 3,5 -циклического аденозинмонофосфата.1Изобретение относится к биотехнологии, микробиологии и медицине, в частности к получению 3,5 -циклического аденозинмонофосфата (цАМФ) путем микробиологического синтеза.5ГАМФ широко используется в клинической практике в диагностических целях, в частности при диагностике патологических состояний нервной системы (эпилепсии, шизофрении и др.). Определение содержания цАМФ в крови, цереброспинальной жидкости и т,д, является важным диагностическим признаком. Кроме того, этот циклический нуклеотид необходим в научных ис следованиях, связанных с изучением бактериальных и эукариотических аденилатциклаз.Известен штамм-продуцент цАМФ, полученный на основе введения мутации 20 по белку СЕР в штамм Е. со 11 1 1 1.Однако известный штамм характеризуется низкой продукцией .цАМФ,12 мг/мл.Цель изобретения - создание генно" 2 инженерным способом высокопродуктивного штамма-продуцента цАМФ, непатогенного для человека и животных и нетребовательного к питательным средам, ЗОПредлагаемый штамм 1. ВС 853, содержащий гибридную плазмиду р Т С 4, продуцирует в среду в 10 раз больше цАМФ по сравнению с известным штаммом-продуцентом.Этот штамм создан на основе Е. со К, которая не может колонизировать тонкий кишечник животных и человека. Штамм содержит гибридную плазмиду р ТС 4, которая несет ген 40 аденилатциклазы Е. со 1 г.Указанная гибридная плазмида р ТС 4 создана на основе мультикопий" ного вектора р ВР 325 и содержит вставку ЛНК в Рэ 1 сайте размером 3,6 Мд, Количество копий плазмиды р ТС 4 составляет около 15-18 в рас" чете на одну бактериальную хромосому. Штамм 1, ВС 853 содержит мутацию по структурному гену сгр. Совмещение 50 мутации ло белку СкР и гибридной плазмиды в одном штамме делает его значительно более продуктивным: содержание цАМФ в среде достигает более высокого уровня по сравнению с бесплазмидным 55 штаммом.Полученный штамм хранится в музее культур н лиофилнзиронаццом виде в Ълаборатории генетической регуляциибиохимических процессов ИЭМ им.Н.Ф,Гамалеи АМН СССР под регистрационнымномером 287.Характеристика штамма,Морфологические признаки.Клетки прямые палочковидной формы,1,1-1,5 х 2,0-6,0 мк, подвижные с перитрихальными жгутиками, граммотрицательные, неспорообразующие.Культуральные признаки.Индикаторная среда МакКонки с мальтоэой (17). Колонии светло-розовогоцвета, блестящие с гладкими краями,через 24 ч культивирования достигают1,5-2 мм в диаметре. Среда Хоттингера.Мелкие компактные колонии с ровнымикраями. Через 24 ч культивированиядостигают 1,5 мм в диаметре. СредаМс триптофаном (50 мкг/мл), аденином (20 мкг/мл) и глюкозой (2 г/л),Колонии светло-серого цвета, мелкие компактные с ровными краями,Физиолого-биохимические признаки.Оптимальная температура культивирования 370. Бактерии в качестве источника азота используют минеральные соли в аммонийной и нитритной форме, а также органические источники азота, такие как пептиды, аминокислоты. Желатину не разжижают. Индола не образуют. Устойчивы к тетрациклину и хлорамфениколу. Непатогенны 1для лабораторных животных и человека.Для количественного определения цАМФ в культуральной среде используют набор реактивов для определения цАМФ фирмы "Амершам" (Англия).П р и м е р.Штамм Ь ВС 853,содержащий гибридную плазмиду р Ть", 4 выращивают на минимальной синтетичес" кой среде Мс казаминовыми кислотами и глюкозой (0,5 Х). Через 24 чо культивирования с аэрацией при 37 С определяют содержание цАМФ в среде. Для этого используют набор реактивов для определения цАМФ фирмы "Амершам". Процедуру по определению концентрации цАМФ проводят в соответствии с прилагаемой фирмой прописью. В случае штамма Ь ВС 853, содержащего плазмиду р ТС 4, содержание цАМФ в среде составляет 1,1 мг/мл.Таким образом, непатогенность и высокая продуктивность предлагаемого,Составитель В. КузьмичевРедактор Г. Волкова Техред Ж.Кастелевич Корректор Д. Мельниченко Заказ 5724/20 Тираж 522 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент", г. ужгород, ул. Проектная, 4 3 1 штамма делает его перспективным для производства цАМФ путем микробио" , логического синтеза. Среда для 106836 4его культивирования относительнонедорогая и проста, по ,соста"ву.