Штамм для идентификации -плазмид

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советских Социалистических Республиксоединением заяв сударственный комитет(72) Авторы нзобретени Малышев А. Г.Пи. А, И, Коротяев, Н. Н М, Ш, Манувахова, В сличкин, Т. Максимов(71) Заявитель кий инст т ут.1 тс; .;(54) ШТАММ ЕЯСНЕК 1 СНДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ 01.1 МГ ЛАЗМН ирован во ьском ин- ромышлен- номером банский государственный им. КраснойИзобретение относится к области микробиологии, а именно идентификации определенных К-плазмид, обусловливающих устойчивость бактерий к антибиотикам и другим лекарственным препаратам.Известен штамм Езс 1 тег 1 сЫа со 11 К 12 Е- для идентификации К-плазмид 1 Ц.Однако известный штамм хотя и обладает свойствами универсального реципиента в генетических скрещиваниях, но лизируется фагом ТЗ и фагом Т 7.Целью изобретения является новый штамм, обладающий свойствами универсального реципиента в генетических скрещиваниях. 1Штамм Е. со 11 МЕ - выделен из кишечника белой мыши.Штамм Е. со 11 МР депон Всесоюзном научно-исследовател ституте генетики и селекции п И ных микроорганизмов под В.Морфологические признаки. Клетки Е. со 11 МГ - имеют вид прямых палочек величиной 1,5 - З,ОХО,З - 0,5 мкм, слабо под вижны, перитрихи, спор и капсул не образуют, по Граму не окрашиваются.Культуральные признаки. На мясо-пептонном бульоне (рН 7,2 - 7,4) через 18 ч при 37 Е, со 11 МЕ образует равномерное з 0 помутнение и осадок, на мясо-пептонном агаре - круглые слегка выпуклые полупрозрачные колонии диаметром 1 - 3 мм, на среде Эндо - круглые колонии, окрашенные в темно-красный цвет с металлическим блеском, диаметром 1 - 3 мм, на среде Левина (мясо-пептонный агар с эозин-метиленовым синим) - круглые колонии, окрашенные в темно-синий цвет, диаметром 1 - 3 мм, на среде Плоскирева - круглые колонии, окрашенные в розовый цвет, диаметром 1 - 3 мм, на кровяном мясо-пептонном агаре - круглые колонии без гемолиза, полупрозрачные, диаметром 1 - 3 мм, па голодном агаре с глюкозой (среда М+ + 0,4% глюкозы + 2% агар-агар а) через 48 ч - плоские полупрозрачные колонии размером от 1 до 3 мм в диаметре (прототроф), Штамм размножается при 20 - 40, оптимум роста 36 - 37,Физиологические признаки. Е, со 1 МР- не образует оксидазу, глюкозу расщепляет с образованием кислоты и газа, ферментирует арабинозу, лактозу, мальтозу, маннозу, сорбит, ксилозу, восстанавливает нитраты в нитриты, образует индол, обладает лизин- и орнитиндекарбоксилазой, дает положительную реакцию с метиловым красным, не ферментирует сахарозу, дульцит, инозит, не образует ацетилметилкарбинола,786329 Формула изобретения Корректор С. файн Техред Л, Куклина Редактор Н. Аристова Заказ 25/33 Изд,104 Тираж 504 ПодписноеНПО сПоиск Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий13035, Москва, Ж, Раушскаи наб д. 4/5 Тын, Харьк. фвл, пред. Патент не усваивает цитрата натрия, не образуетсероводорода, не обладает уреазной активностью,Генетические особенности. Штамм Е.соИ МР - служит хорошим реципиентом вопытах по передаче К-плазмид от различных доноров, Штамм Е. соИ МР - обладаетприродной устойчивостью к фагам ТЗ, Т 7,Х и Р 1. Однако Е. соИ МР- становитсячувствительной к фагу ТЗ и Т 7 после передачи ей путем конъюгации Р-плазмид некоторых групп несовместимости, например,1 пс 1 - и 1 пс Х - .С целью облегчения отбора эксконъюгантов в опытах при генетических скрещиваниях из исходного штамма Е. соИ МР получены два мутанта, один из которых обладает устойчивостью к 120 мкг/мл налидиксовой кислоты (Е. соИ МР - Яа 1), другой - к 200 мкг/мл рифампицина (Е. соИ 20МР - К 11),Пример практического использованияштамм а.У диких штаммов шигелл и кишечнойпалочки выявлены 23 различные конъюгативные К-плазмиды: рКМК 13, рКМК 14,рКМК 16, рКМК 20, рКМК 26, рКМК 34,рКМК 46, рКМК 51, рКМК 64, рКМК 73,рКМК 74, рКМК 77, рКМК 90, рКМК 95,рКЫК 98, рКМК 105, рКМК 111, рКМК 117, 30рКМК 155, рКМК 161, р 1(МК 169, р 1(МК182, рКМК 200. Передачу этих К-плазмидпроводят Е, соИ МР Ыа 1 (К 1) по стандартной методике. Культуры донора (дикиештаммы кишечных бактерий,обладающие 35устойчивостью к антибиотикам) и реципиента (Е. соИ МР ) выращивают в течение 12 ч в 5 мл мясо-пептонного бульона(МПБ), разводят свежим МПБ в соотношении 1: 10, подращивают в течение 3 ч, готовят конъюгационные смеси из донора и реципиента 1: 10 соответственно, смеси выдерживают в термостате 2 ч и 20 ч, производят высев смесей на селективные (с антибиотиками) питательные среды в чашках, 45чашки выдерживают в термостате 24 ч, эксконъюганты отсевают на питательные среды в пробирках, Все 23 К-плазмиды были переданы Е. соИ МР - .Штамм Е. соИ МГ - и его производные - Е. соИ МР - 1 Ча 1 и Е. соИ МР К 11 были проверены на устойчивость к колифагам ТЗ, Т 7, Х и Р 1 методом спорт-теста. Для этого 0,1 мл четырехчасовой бульонной культуры бактерий вносят в расплавленный и охлажденный до 45 С 0,7%-ный МПА, который перемешивают и наслаивают на пластинку 1,5%-ного МПА. После охлаждения чашки подсушивают и на поверхность верхнего слоя МПА пастеров- ской пипеткой наносят капли фагов ТЗ, Т 7, Х и Р 1 с титром 10 бляшкообразующих единиц в 1 мл (БОЕ/мл). Посевы инкубируют в течение ночи при ЗT С и учитывают результаты опыта по наличию или отсутствию лизиса бактерий в точках нанесения соответствующих фагов.Предложенный штамм является универсальным реципиентом в генетических скрещиваниях, но в отличие от известного штамма Е. соИ К 12 Р и его производных не лизируется колифагами ТЗ, Т 7, А и Р 1. Вместе с тем штамм Е, соИ МР- приобретает способность лизироваться фагом ТЗ при передаче ему путем конъюгации К-плазмид 1 пс Х - , 1 пс А - , 1 пс 1 - групп несовместимости и фагом Т 7 - после передачи ему К-плазмид 1 пс 3- и 1 пс Х -- групп несовместимости, что позволит быстро идентифицировать исследуемые К-плазмиды. Штамм Езс 11 епс 111 а соИ МР - для иден. тификации К-плазмид. Хранится в музее культур промышленных микроорганизмов института ВНИИгенетика под номером В.Источник информации, принятый вовнимание при экспертизе: 1. Жакоб Ф., Вольман Э. Пол и генетика бактерий. М., И, Л 1974,