Способ выделения гиббереллинов

801060 СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 51)С 12 Р 2 ГОСУДАРСТВЕННЫЙПО АМ ИЗОБРЕТЕН ОМИТЕТ СССРИЙ И ОТКРЫТИЙ ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ПАТЕН 9 45льитаньски, Халь новольска-Осытэк и Пшэмыслоэй и фармацэутычнэ Р 29807 1.2950288,0 (прототип).ДЕЛЕНИЯ ГИБББРэкстракцию исх(72) Рышард Хэропона Снойэк, Анита Ии Анна ЯсКуловска(71) Институт ХэмиКутновске Закалады(54)(57) СПОСОБ ВЫЛИНОВ, включающий ного сырья этилацетатом и кристаллизацию целевого продукта, о т л и - ч а ю ш и й с я тем, что, с целью расширения сырьевой азы, в качестве исходного сырья используют маточный раствор, остающийся после кристаллизации целевого продукта, экстракцию проводят при соотношении маточный раствор: этилацетат 1:4-15, отделяют выпавший осадок, полученную осветленную жидкую Фазу экстрагируют водным раствором гидроокиси натрия или кислого карббната натрия, затем экстракт подкисляют до рН 3,5-1,5 при интенсивном перемешивании, смесь разделяют на жидкую и масля- . нистую фазы и выделяют целевой продукт из маслянистой Фазы экстракцией этилацетатом или сорбцией.ЪИзобретение относится к микробно логической промышленности и касается получения гиббереллинов.Известен способ получения гиббереллиновой кислоть 1 из культуральной жидкости путем экстракции кетоном, несмешивающимся с водой, с последующей адсорбцией гиббереллиновой кислоты нейтральными карбонатами щелочных металлов, промывкой и кристаллизацией целевого продукта 1 3.Известен также способ выделения гиббереллинов, включающий экстракцию исходного сырья - культуральной жидкости при рН 1,5-4,0 этилацетатом и кристаллизацию целевого продукта Г 2Однако известные способы предусматривают использование в качестве исходного сырья культуральной жидкости.Цель изобретения - расширение сырьевой базы.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу выделения гиббереллинов, включающему экстракцию исходного сырья .этилацетатом и кристаллизацию целевого продукта в качестве исходного сырья используют маточный раствор, остающийся после кристаллизации целевого продукта, экстракцию проводят при соотношении маточный раствор: этилацетат 1:4-15, отделяют выпавший осадок, полученную осветленную жидкую Фазу экстрагируют водным раствором гидро- окиси натрия или кислого карбоната натрия, затем экстракт подкисляютдо рН 3,5-1,5 при интенсивном перемешивании, смесь разделяют на жидкую и маслянистую Фазы и выделяют целевой продукт из маслянистой Фазы экстракцией этилацетатом или сорбцией.Сущность предлагаемого способа заключается в том, что высоковязкие отбросные маточные растворы разбавляют тем же растворителем, что и в маточном растворе, в отношении 1:4-15 с целью уменьшения вязкости обрабатываемого раствора. рН.водногоэкстракта Концентрация гиббереллинов в экстрагирован. ном слое ацетата,Экстракт 40 4,8 0,77 0,39 2453 0,12 6,9 7,7 Следы 0,00 8,0 50 В 5-м водном экстракте не обнаружено присутствия гиббереллинов.551-й - 4-й экстракты соединяют. В сумме получают 30 л экстракта со средним значением рН 6,1, содержащего 0,73 гиЬВереллинов. Выход после экстрагиронания 93,6 от исходного количества гиббереллинов в маточ ном растворе,. К водному экстрактупри сильном перемешивании механической мешалкой добавляют медленно по каплям 5-ный водный раствор соляной кислоты, По ходу добавления 65 кислоты прозрачный раствор мутнеет Такая обработка приводит к осаждению значительного количества осадка в виде хлопьев, содержащего только 0,05 гиббереллинов. После отделения осадка ацетатный раствор экстрагируют водным раствором соединения основного характера, например кислый карбонат натрия, гиббереллины образуют соли и переходят в водный раствор. Переходящие в раствор загрязнения почти полностью удаляют путем постепенного и осторожного подкисления нодного экстракта. Медленная дозировка кислоты при постоянном сильном перемешивании противодействует выделению гиббереллинов совместно со смолообразными веществами, чаще всего достаточно подкислять до рН 3,5-1,5.После отделения смолообразныхпримесей выделение гиббереллиновиз водного раствора-экстракта можно проводить экстрагированием этилацетатом, концентрированием экстракта и кристаллизацией или путем отгонки растворенного в воде этилаце тата и возвращения водного остаткав основной цикл обработки свежейпартии культуральной жидкости.П р и м е р 1, 3 л этилацетатногоматочного раствора после днукрат ного выделения гиббереллинон кристаллизацией, содержащего 7,8 гиббереллинон, разбавляют 12 л чистогоэтилацетата.После тщательного перемешива ния раствор оставляют на 30 мин.В течение этого времени выпадаетхлопьевидный сильнокоричненый осадок. Осадок отделяют и осветленный ацетатный раствор экстрагируют2-ным водным раствором кислогокарбоната натрия. Экстракцию проводят пятикратно, применяя каждыйраз по 7 л водного раствора кислого карбоната натрия. В таблице приведены выходы целевого продукта после каждой экстракции.1060121 Составитель Г. СмирноваРедактоо М. Рачкулинец Техред М.Надь Корректор Г.Огар Заказ 9872/61 Тираж 523 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 и выделяется темная маслянистая жидкостьПосле доведения рН экстракта до 2,5 прекращают перемешивание и оставляют жидкость на 3 ч. По истечении этого времени происходит разделение. Маслянистая темная жидкость скапливается на дне реактора, в котором проводят подкисление. В результате получают фракцию смолообразных веществ объемом 450 смЗ, содержа щую 5,3 (23,8, г) гиббереллинов.Водный раствор после подкисления экстрагируют этилацетатом, а затем выделяют гиббереллины. В результате получают 182 г кристаллического 35 продукта, содержащего 76,2 гиббереллинов. Общий выход процесса выделения 59,26.П р и м е р 2. 3 л этилацетат; ного маточного раствора той же производственной партиИ,что и в примере 1, разбавляют 12 л этилацетата, а образовавшийся осадок отделяют. Осветленный ацетатный раствор трижды экстрагируют 1-ным водным раствором гидроокиси натрия, применяя в каждой экстракции по 7 л раствора. Экстракты соединяют, получая .22 л жидкости с рН 7,2, содержащей 1,02 гиббереллинов. Общий выход экстракции 95,89.30Водный экстракт подкисляют. при интенсивном перемешивании 8-ным водным раствором серной кислоты. Подкислив экстракт до рН 3,5, жидкость оставляют отстаиваться. После отстаивания получают 320 см 3 масляйистой фракции, содержащей 3,9 гиббереллинов, Осветленный раствор после отделения смолообразующихвеществ обрабатывают, как и в примере 1. В общем получают 253 г кристаллического продукта, содержащего 62,5 гиббереллинов. Полный выход процесса выделения 67,5, однако продукт требует дополнительной кристаллизации.П р и м.е р 3, 3 л этилацетатного маточного раствора разбавляют 30 л этилацетата. После тщательного перемешивания отделяют выпавший осадок. Осветленный фильтрат зкстрагируют четыре раза 2,5-ным водным раствором кислого .карбоната натрия в объеме 8 л для каждой экстракции. Полученные экстракты соединяют и подкисляют 18-ной соляной кислотой до рН 1,5 при интенсивном перемешивании, Затем жидкую массу оставляют для разделения фаэ, после чего отделяют выделившуюся маслянистую жидкость. Получают 280 см 3 масла, содержащего 3,2 гиббереллинов. После отделения маслянистого слоя жидкость экстрагируют этилацетатом.Получают 150 г кристаллического продукта, содержащего 85,2 гиббереллинов. Общий выход процесса извлечения 55, однако получают продукт более чистый, чем в примерах 1 и 2. Использование изобретения позволяет получать дополнительные количества гиббереллинов иэ отходов производства гиббереллиновой кислоты,