Способ получения солей гепарина из материала тканей животных

.ЗА А 61 К 31 НИЕ ИЗ ФЬ Е СТВУ сев нов 342991,гическнйство ге- .ки тонкоСОЛЕЙЕЙ ЖИВОТСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКР ЫТИ АВТОРСКОМУ СВИДЕ(56) 1. Патент Франциикл. С 08 В 37/10,ф 19782. Лабораторный технолорегламент В 25 на производпарина из слизистой оболого кишечника свиней, 1979(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯГЕПАРИНА ИЗ МАТЕРИАЛА ТКА НЫХ, включающий обработку материала тканей, очистку гепариносодержащегопродукта и выделение солей гепарина, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа и увеличения выхода солей гепарина, обработку материала тканей ведут путем добавления к пульпе ткани ионообменной смолы с последующим отделением ионообменной смолы от пульпы ткани, а очистку гепарина ведут путем ионообменного извлечения гепарина из пульпы ткани при рН 2-12 н 0-10 С.Изобретение относится к техноло"гии получения органопрепаратов изживотной биомассы и может быть использовано на эндокринных заводахи мясокомбинатах для получения гепарина.Известен способ производствагепарина, включающий следующие основные технологические операции:консервирование нативной мукозы замораживание, обработка бисульфитом натрия, сушка); подготовку консервированной мукозы к процессу экстракции гепарина (дефростация, -, отмывка: замачивание в воде и растворах щелочей, солей); экстракциюгепарина раствором хлористого натрия (1 М) при рН 9,1-9,5. В процессе экстракции гепарина из слизистой оболочки тонкого кишечника свиней реакционную смесь нагреваЮт10 мин до 50-55 С, выдерживают при0этои температуре 20 мин и затемтемпературу реакционных масс доводят до 95-100 С в течение 10-15 мин.Охлажденную до 75".80 С смесь сбраосывают на нутч-фильтр и фильтрациейотделяют экстрагент от скоагулировавшейся мукозы. Жмых мукозы .нанутч-фильтре промывают ХМ раствором хлористого натрия и присоединяютк экстракту, Экстракт охлаждают,дают отстояться, освобождают от жира и направляют на ионообменное извлечение гепарина, которое осуществляют. в .статических условиях ионообменной смолой АРА-М в СЯ-Форме.Для этого в 70 .л экстракта вводят3 л анионообменной смолы и при непрерывном перемешивании выдерживают 18-20 ч; Сорбент фильтруют и отмывают водой на нутч-фильтре. Затемпроводят десорбцию гепарина. Отмы- .тую анионообменную смолу загружаютв стеклянную колонку и элюируют ге-,парин 2,5 М раствором хлористогонатрия при скорости элюирования50 мл/см ч. Элюат охлаждают до 2-5 С2и направляют на выделение.гепаринасырца Щ .Наиболее близ.ким к предлагаемомуявляется способ производства, гедарина 21, который по своим основным технологическим операциям повторяет аналог.Изложенная выше технология извлечения и производства гепарина обеспечивает выход формакопейного гепариыа 20000-25000 ед/кг сырья при егоактивности 130-140 ед/мг.Известные способы производствагепарина характеризуются многостадийностью технологического процесса обеспечиваот получение гепарина-сырца; высокими энергозатратами на процесс нагревания реакционных масс использованием больших количеств солей хлористого аммония, хлорнстого натрия, натриевой щелочи,аммиака; использованием ионообмен"ного извлечения гепарина из экстракта от выщелачивания биомассы; длительностью технологического процес" 5 са извлечения гепарина, низким .выходом целевого продукта из-эа потерь со жмыхом мукозы и ферментативного разложения гепарина в процессах извлечения10 Цель изобретения - упрощение спо"соба и увеличение выхода гепарина,Указанная цель достигается согласно получения солей гепарина изматериалов тканей животных, включа"ющему обработку материала тканей,очистку гепариносодержащего продукта и выделение: солей генарина, обработку материала тканей ведут путем .цобавления к пульпе ткани ионообменной смоли с последующим отде- лением ионообменной смолы от пульпы ткани, а очистку гепарина ведутпутем ионообменного извлечения .юепарина из пульпы ткани при рН 2-12и 0-1200 С.25П р и м е р 1. 200, г заморожен-ной скоагулированной мукозы влажностью 89,4 после дефростации направ".ляют.в гомогенизатор.и измельчают.Измельченную биомассу раэбавляют.водой 1:1 и дозируют со скоростью100 мл/ч в аппарат для.,противоточного сорбционного извлечения гепари-на анионитом. рН биомассы в процессе извлечения гепарииа поддерйяаа-ют в,различных сериях экспериментана уровне 7,0, а температуру реак-ционных масс.на уровне температурыокружающей среды (20 С 1. Объемный. расход анионита, транспортирунвего 4 О в аппарате лротйвотоком биомассе,.: .поддерживайт равным 12 мл/ч. Обработанная биомасса на выходе из ионообменного аппарата практически несодержит гепарина. Иоиит, отмытыми 45 в специальном отсеке аппарата, направляют в непрерывно действующийпротивоточный аппарат десорбции.Десорбцию гепарина ведут 2,5 Мраствором, хлористого натрия. При. щ 0 этом объемный расход сорбента поддерживают равным 12 мл/ч, а десорбирующего раствора - 24 л/ч. Сцелью перечистки гепарина элюатразбавляют вдвое и гепарин повтор".но сорбируют из водного. раствора наанионообменной смоле в указаннывыше условиях. Очищенный гепаринэлюируют в режиме концентрированияв аппарате противоточного типа2,5 М раствором хлористого натрия.60 Объемный расход ионита поддерживаютравным 12 мл/ч, а десорбирующегораствора - 24 мл/ч. Концентрация гепарина в элюате в среднем составляет 152,5 ед/мл. рН элюата уста,навливают в пределах 6,0-6,5 и31052234 ВНИИПИ Заказ 8719/3 Тираж 713 Подписное филиал ППП,"Патентф, г, ужгород,ул,Проектная,4 фильтруют раствор через мембранный , фильтр с диаметром пор 0,22-0,45 мк. Затем гепарин из элюата выделяютвысаливанием, для чего элюат охлаждают до 0-5 С; добавляют к нему охлажденный до 0-5 С этиловый спирт(96) в соотношении к элюату 1:1 и оставляют в холодильнике на 1618 ч для отстаивания осадка; осадок. гепарина отделяют на центрифуге, промывают 4 раза этиловым спиртом, , 10 объем которого соответствует объему маточника, и высушивают на воздухе до постоянного веса гепарин сушат в сушильном шкафу при 55- .60 С. Активность апирогенного гепарина, полученного по приведенной .выше технологии, составляет 170 ед/мг, на выход - 76000 ед. на 1 кг биомассы.П р и м е р. 2. Получают гепарин как в примере 1, но рН суспензии 20 животной биомассы поддерживают равным 2,0, Активность полученного апирогенного гепарина составляет 170 ед/мг, а выход 72000 ед на1 кг биомассы. 25П р и м е р 3. Получают гепарин как в примере 1, но рН поддерживают равным 12. Активность поЛученного апирогенного гепарина составляет 170 ед/мг, а выход 78000 ед на 1 кг 30 биомассы.П р и м е р 4. Получают гепарин как в примере 1, но температуру .сускензииживотной биомассы поддерживают равной 0 С, Активность полу-. З 5оченного апирогенного гепарина со ставляет 165 ед/мг, а выход 72000 ед на 1 кг биомассы.П р и м е р 5. Получают гепаринкак в примере 1, но температуру сус" 40пензии животной биомассы и рН поддерживают равными соответственно ОС и 2. Активность апирогенного гепарина и выход соответствуют данным примера 2.П р и м е р 6. Пблучают гепарин . 45как.в примере 5, но температурусуспензии биомассы поддерживают равной 120, С. Активность полученОного апирогенного гепарина составляет 140 ед/мг, а выход 6500 ед,на. 501 кг биомассы.П р и м е р 7; Получают гепарин, как в примере 1, но температуру и рН суспензии жйвотной биомассы поддержиВают раВными соотВетственно55 120 фС и 12. Активность полученного апирогенного гепарина составляет 140 ед/мг, а выход 60000 ед на 1 кг биомассы.П р и м е р 8. 200 г легких крупного рогатого скота измельчают и разбавляют водой в соотношении 1:1, Пульпу водной биомассы дозируют со скоростью 100 мл/ч в аппарат для противоточного сорбционного извлечения гепарина анионитом. рН биомассы в процессе извлечения гепарина поддерживают на уровне 7,0, а температуру реакционных масс - на уровне температуры окружающей среды (около 20 С). Объемный расход анионита, транспортирующегося.в аппарате противотоком биомассе, поддержи-вают равным 12 мл/ч. Обработаннаябиомасса на выходе из ионообменного аппарата практически не содержит гепарина. Ионит, отмытый в специальном отсеке аппарата, направляют в "секцию десорбции того же аппарата. Десорбцию гепарина ведут 2,5 И раствором хлористого натрия. При этом объеМный расход сорбента подцерживают равным 12 мл/ч,.а десорбирующего - 24 мл/ч. С целью перечистки гепарина элюат разбавляют вдвое и гепарин повторно сорбируют иэ водного раствора на анионообменной смоле в условиях, изложенных выше. Очищенный гепарин элюируют в режиме концентрирования в.аппарате противо- точного типа 2,5 М раствором хлористого кальция, Объемный расход ионита л равным 12 мл/ч, а десорбирующего раствора - 24 мл/ч. Концентрация гепарина в элюате в среднем составляет 52,78 ед/мг. Далее процесс выделения кальцие= вой соли ведут так же, как выделение натриевой соли гепарина в примере 1Активность апирогенного кальципарина, полученного,по описанной выше технологии, составляет 150 ед/мг, а выход 27000 ед на 1 кг легких крупного рогатого скота.Предложенное изобретение позволяет увеличить расход гепарина из животного сырья меньше, чем в 2,5 ра" за и наряду с сокращением затрат на производство гепарина получить с каждого килограмма биомассы дополнительно 300 мг. апирогенного гепарина. Таким образом, при потребнос- ти страны в гепарине 8,010 ю ед.в год зкономический эффект от внед- рения предложенного способа состав- ляет 3,8 млн.руб,