Способ получения аденозин-5-монофосфата

(19 (11) СОЮЭ СООЕТСНИХОСЦЕарюесзеиРЕСПУБЛИН РЕТТВУ нидетельство СССРР 19/321 1967детельство СССР 28-13, 25,08.80. Анторское сявке В 321227 о а ющвст(54) (57 ЗИН. - включаю фильтро с после той, ос ного пр ю щ и й щения с целевог мышц рыб,ья водой,анионитеяной кислонием целет л и ч аелью упрочистотыарительно о т дки ной о и сол и1,что охС. о МГОСУДАРСТ 8 ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЭОБРЕТЕНИЙ И.ОТНРЫТИЙОПИСАНИЕ ИЗОБК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬС(71) Ордена Трудового КрасногоЭнамени институт биохимииим. А.В.Палладина и Тихоокеанскийнаучно-исследовательский институтрыбного хозяйства и,океанограФии(56) 1. Авторское с9. 207348, кл. С 12 1.СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АДЕИОНОФОСФАТА изщий экстракцию сырание, сорбцию наующей элюцией солаждением и промынадукта спиртом, ос я тем, что, с цособа и повышенияпродукта, предн М 5061 К 35 60 С 07 Н 19 20 проводят экстракцию сырья уксусной кислотой, а после элюции соляной кислотой Фракцию, содержащую аденозин -монофосФат, дополнительно пропускают через активиронанный уголь, из которого элюируют целевой продукт раствором подщелоченного спирта, полученный раствор упаривают, подкисляют и осаждают целевой продукт охлаждением раствора и после промывания спйртом осадок нысушинают,2, Способ по п.1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что элюцию раствором подщелоченного спирта проводят при соотношении спирт вода: аммиак 25:(22-24) г(1:3)3Способ по п.1, о т л и ч е щ и й с я тем,что упариванне осу вляют до 15-20-ного содержания целевого продукта,4. Способ по п.1, личающ и й с я тем, чт о сление проводят 10-15-ной я кислотой Я до рН 1,751,85,5Способ по отличаю щ и й с я тем, лажление прводят при 1-4 01052235 55 65 Изобретение относится. к биохимии,в частности к способу получения соединений из природных источников,и может быть использовано в медицинеи биохимии,Известен способ получения аденоэин-монофосфата (АМР) из мышц кроликов, в котором после охлаждениямышц. осуществляют экстракцию трихлор"уксусной кислотой .и фильтрованиеэкстракта, при рН 8 осаждают аденоэин-З-фосфат,(АТР) с помощью хлористого кальция. Монокальциевую сольАТР растворяют и гидролизуют до АМРс помощью предварительно полученногоФермента картофельной апиразы.Из гид-, "15ролизата АМР осаждают в виде ацетатартути, которыйв последующих операциях растворяют в серной кислоте,пропускают сероводород, Осадоксульфида ртути отфильтровывают, аиэ фильтрата после очистки осаждаютАМР с помощью ацетона Я .Недостатками данного способаявляются использование ферментакартофельной апиразы, получение кото" 25рого требует осуществления дополнительной технологии, многостадийность процесса получения АМР, применение ядовитых веществ: трихлоруксусной кислоты, солей ртути и се-,роводорода использование дефицитных источнйков сырья: мышцы кроликовили говяжьего мяса.Известен также способ полученияаденозин-монофосфата из мьэдц .рыб,включающий двухкратную водную экст- З 5ракцию, отделение балластных белков,фильтрование, сорбцию на смоле,БАК с последующей сорбциейаденозиндифосфата и аденозинмонофосфатана смоле АРО с элюцией соляной кислотой, осаждением и промыванием целевого продукта спиртом 21 ..Однако известный способ не обеспечивает выделения целевого продукта достаточной чистоты, поскольку непозволяет получить целевой продуктв чистом виде, а технологическийпроцесс является продолжительным.. Цель изобретения - упрощение способа и повышение чистоты целевогопродукта,Поставленная цель достигается тем,что согласно способу полученияаденозин-монофосфата из мышц рыб,включающему экстракцию сырья водой,фильтрование, сорбцию на анионите споследующей элюцией соляной кислотой, осаждением и промыванием целевого продукта спиртом, предварительно проводят экстракцию сырья уксусной кислотой, а"после элюции соляной кислотой фракцию, содержащуюаденозин"монофосфат, дополнительно пропускают через активированныйуголь, из которого элюируют целевойпродукт раствором подщелоченного Фспйрта, полученный раствор упаривают,подкисляют и осаждают целевой продукт охлаждением раствора и послепромывания спиртом осадок высушивают.При этом, элюцию раствором подщелоченного спирта проводят при соотношении спирт: вода: аммиак25 г( 22 й 24) 3(13) .Упаривание осуществляют до 15-20 ного содержания целевого продукта.Подкисление проводят 10-15-нойсоляной кислотой до рН 1,75-1,85.Охлаждение .проводят при 1-4 С.П р и м е р 1. 1 кг мышц рыбыминтай измельчают, обрабатывают 1 л8-ной СНСООН на протяжении часапри помешивании. Отжимают через ткань.Осадок повторно обрабатывают 1 лдистиллированной воды на протяжениичаса, Фильтраты объединяют, фильтруют через бумажную пульпу до прозрачного состояния и пропускают черезколонку с анионитом ЭДЭП сзернением 0,25-0,5 мм со скоростью0,7 мл/мин/см сечения колонки.гзатем промывают водой и элюируют фаденозин-монофосфат (51-АМР) с(помощью 0,01 н НС 8. Кислые фракции,содержащие 5 -АМР, объединяют ипропускают через колонку, заполненную дополнительно активированнымуглем АГ( размер зерен 0,25--0,5 мм) из расчета, что 1 г углясорбирует 80 мг 5 -АМР, После промывки колонки водой проводят десорбцию 5 -АМР с помощью подщелоченногораствора спирта в соотношенииспирт:вода:аммиак 25:2 4:1. Фракции,содержащие 5 -АМР, объединяют, упаривают под вакуумом при 45 С до15 содержания основного продукта.Раствор подкисляют 10-ной НСРдо РН 1,75, и при охлаждении до.+4". С 5 -АМР выпадает в осадок, Осадок дважды промывают этиловым спиртом, высушивают в эксикаторе надпрокаленным хлористым кальцием. Выход 100 мг препарата 5 -АМР,П р и м е р 2. 1 кг мышц рыбы.минтай обрабатывают, как и в примере 1, и экстракт пропускают со скоростью 0,8 мл/мин/см через анионитЭДЭП, который предварительно переводят в ацетатную форму пропусканием 5-ной СНзСООН. Элюируют 5 -АМР0,05 н НС 8, Кислые фракции, содержащие 5-АМРГ объединяют и пропускаютчерез колонку с дополнительно активированным углем АГиз расчета чтоР1 г угля сорбирует 75 мг 5 -АМР.После промывки колонки. водой проводят десорбцию 5 -АМР с помощью подщелоченного раствора спирта в соотношении спирт;вода:аммиак 25:23: 2,Фракции, содержащие 5 -АМР объединяют, упаривают под вакуумом при48 С до 18 содержания основногоопродукта, Раствор подкисляют 12-ной1052235 Составйтель В. БрусиловскаяРедактор К.Волощук Техред А.Бабинец Корректор О.Тигорат аваевжжЭаказ 8720/4 Тираж 713 ПодписноеВНИИПИ. Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий"113035, МоскваЖ, Раушская наб., д. 4/5 Ш ЕВМюшеюш Ш Филиал ПППфПатент ф, г.ужгород, ул.Проектная, 4НС 3 до 18, и при охлаждении до +2 С АМР выпадает в осадок, котьрый дважды промывают этиловым спиртом, высушивают над прокаленным хлористым кальцием, Выход 110 мг препарата;5 ф-АМР, 5П р и м е.р 3. 1 кг рыбы навага обрабатывают, как в примере 1, и экстракт пропускают через аниони ЭДЭП со скоростью 1 ил/мин/см сечения колонки, элюируют 5 -АМР с О помощью 0,1 н НСР . Кислые фракции, .содержащие 5-АМР объединяют, определяют содержание 51- АМР и пропускают через колонку с дополнительно активированным углем АГиз расче та, что 1 г угля сорбирует 70 мг5 -АМР.После промывки колонки водой проводят десорбцию 5 -АМР раст; вором подщелоченного спирта в соот,-ношении спирт:вода:аммиак 25:22:3. Фракции, содержащие 5- -АМР, упаривают под вакуумом при 49 ф С до 20 содержания основного продукта, Раствор подкисляют 15-ной НС 1 до рН,1,8, и при охлаждении до +1 С АМР выпадает в осадок, который после двойной промывки этиловым спиртом высушивают в эксикаторе над прокален-ным хлористым кальцием, Выход 120 мг препарата 5 -АМР.П р и м е р 4, 1 кг мышц рыбы . ЗО ыавага обрабатывают, как в приме" . ре 1, и экстракт пропускают со скоростью 0,8 мл/мин/см пбперечного сечения колонки через анионит ЭДЭП, который предварительно пер- водят в ацетатную форму пропусканием 5-ной СНЭСООН. Элюируют 5-АМР 0,05.н НО . Кислые фракции содержащие 5 Ф-АМРР Объединяют и пропускают через колонку с"дополнительно активированным углем АГиз.ра 1 счета, что 1 г угля сорбирует .75 мг 5 -АМР. После промывки оЛонки водой проводят десорбцию 5 -АМР с помощью подщелоченного раствора этилового ; спирта в соотношении 96-ный этиловый спирт:вода:25-ный аммиак2523: 2.ФФракции, содержащие 5 -АМР объеди"няют, упаривают под вакуумом при48 ф С до 18 содержания основногопродуктаРаствор подкисляют 12-нойНС 0 до рН 1,8, и при охлаждениидо +2 ф С АМР выпадает.в осадок,который дважды промывают 96. этиловым спиртом, высушивают над прокаленным хлористым кальцием, Выход110 мг препарата АМР,Предложенный способ обеспечиваетупрощение технологического процессаза счет исключения дефицитных реагентов ферментов и смол, а такжесокращения времени проведения технологического процесса, получениевысокоочищенного препарата 5 -АМР,который может применяться при лечении хронической коронарной недостаточности, атеросклеротическом кардиосклерозе и других заболеваниях.