Способ получения ксантозина

(я) С 12 Р дАРстВенньй нОмитет сссРЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИйПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУ АВ 966.966,30 брб 05ЛУЧЕНИЯ КСАНТОвания продуцизмов видаловиях аэра(21) 3387048/28-13(54)(57) 1 . СПОСОБ ПОЗИНА путем культивирорующих его микроорганиВас 111 ца ьцЬф 111 ь в ус ций на питательной среде, содержащей углеводы в качестве источника углерода, источник азота,минеральные соли и ростовые вещества, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью увеличения выхода целевого продукта и удешевления процесса, иэ вида Вас 1 1 ц ьцЬ 111 ь используют штамм Вас 11- 1 ць ьцЬй 111 ь ВНИИгенетика, а в качестве источника ростовых веществ белково-витаминный концентрат.2. Способ по и. 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что кулвтивирование ведут при 28-34 фС и скорости растворения кислорода в среде 2,4-3,8 г О/л в час.Рвысокого выхода ксантозина; .ак а( спользуемый штав Вас 11 ц 5 5 ОВс 15 3-35 обладает Яедсстатскчно высокой активностью, кроме того, в известном способе используются среды, содержащие дефицитное сырье в виде з(- ( ТРаКта СОЕВОЙ МУИк КаК ИСтОЧНИКа РйстОвого фактора Н,ГИмОЯЯО кислого НаТРвЯ: Изобретение относится к микробиоло- точника ростовых веществ - белкогической промьваленности в частности во-витаминный концентрат.к получению производных нуклеиновыхШтамм Вас 11 цэ 5 цЬ(115 ВНИИгекислот, и касается способа получения нетикаполучают иэ штамма Вас,ксантоэина, применяемого в фармаколо 5 цЬс 15 ЦМПМ Вв результатегии в качестве исходного соединения пРименения генетико-селекционных медля синтеза антимикробных метаболи- тодов, в частности путем введениятов, а также ксантиловой кислоты в геном исходного штамма трех мутаи может бьть использовано в различнь 1 х ций: устойчивости к 8-аэаксантину,Областях экспериментальной биолОгии ауксотрофнОсти и Реверсии по урацилу1 ОИзвестен способ получения ксанто- Штамм депонирован во ВНИИгенетиказина с использованием микробиологи- и имеет номер БИЛИ В.ческого синтеза, основанный на ис- Штамм ВНИИгенетикаобладаетпользовании ауксотрофных штаммов более вьсоким уровнем накопленияВкС 111 ц 5 5 Ь:15 И Тд ксантоэина, чем известйые И хранитсяМа.ксимальный уровень накопления 1 в центральном музее культур промышксантоэина находится в пределах 5,7 ленных микроорганизмов Всесоюзного8,9 г/л при использовании штаммов научно-исследовательского институтаВас 111 ц 5 5 и Ь 15, культивируемых генетики и селекции промышленныхна средах,. содержащих дорогостоящее микроорганизмов и имеет регистра-сырье, мало доступное для промпален ционный номер БМПМ В.ности рибонуклеиновые кислоты, гид- Применение в способе штамма ВНИИролиэат каэеина пуриновые основа- генетикана специально подобранния, экстракт соевой муки. Дру- ных средах, содержаших в качестве,гие применяемые микроорганизмы про- ростового фактора БВК и условиях фердуцируют ксантоэин в количестве 25 ментации позволяет получать до 13,2 г/лдо 5 г/л,ксантоэина.Наиболее близким по техническойсущности и достигаемому результату Штамм ВИИгенетика характеризуетявляется способ получения ксантоэина ся следующими морфологическими и кульпу тем культивирОвания штамма Вв с( 1 " 33 туральными признаками,1 ц 5 5 цЬс 15 3-35 на Ферментацион- Морфология. Штамм представляетной среде содержащей глюкозу в ка- собой грдммположительнуюпалочку, разчестве истосвник(д УглеРОДа в зкстрак мероч 4-5 0,7-0,8 1 , в отличие отОбезжиревной СОевОй муки цитрдт исходного тамма ЦМПМ Вявляетнатрия, в качестве ростовых веществ - ся аспорогенным.минеральные соли. Культурально-морФологические призЯВКИ,Выход ксантозина в культураль- Мясо-пегтонный агар. Ппии в течение 24 ч при 37 фС образует1.Я ч феРментацин 12 в бело-желтые колонии, КРУглые, ДиаметНедостдток даннОго способа закл 4 О Оом 3-4 мм. Поверхность слизистая счается в том, что Он не обеспечивает умеренно извилистым краем, срастается с субстратом Поверхность колонииисходного штамма ЦМПМ Вморщинистая) .45 Мйсо-пептонный бульон, При инкубации в течение 24 ч при 37 С безвстряхивания наблюдают помутнениесреды, на поверхности образуется морщинис;тая пленка, При стоянии образуется осадок,Агаэрованная среда Хоттингера.Цель изобретения - увеличение При инкубации в течение 24 ч, привыхода ксантоэина и удешевление про С обрао разует бело-желтые колонии,цо:са. Слизистые, диаметром 34 ьв с умеПостдвленная цель достигается ым краем срастаетсяРенно извилистымтем, что согласно способу получе- г субстратомяня ксантозиндутем культивиООва- л. к . т . те Син-етическт и.еская среда с минеральЯЯ ПРОДУ 1 ИРУЮ. ИХ ЕГО кЯвв 1 ООРГкНИЗ - ным азотом. РОст Отсутствует.,Штамммов виДд. Вас 1105 5 цЬ:5 в ввсл- нуждается в добавке аденина, гистидивиях аэрации на питательной с еде на тиоозинв 1 . ве признаки.СОДЕРжащен Углеводы в кдЧЕСтВеФизиолого-биохимически гисточника углерода,. и то-ник азота. ны , аэробный, ростГрамполо кительный,миаеральные соли и Ростовые вещест- : поверхностный,ва,. Иэ вида Васц 5 5 цЬ:15 ис- Телатину разжижает.ПОЛЬЗУст 1."ТавМ Вдсц 5 5 ц15 Крахмал гидроли. еолизует.В.ИИГЕНЕТИа Зв д В КНЧЕСТВЕ Нс - О 5 МОЛОКО ПЕПТОНИЭи ирует.Заказ 4337/25 Тираж 523 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4 Отношение к источникам углерода.Усваивает глюкозу, галактоэу, фруктозу, мальтозу, маннозу, рамнозу,рибоэу, сахароэу, арабиноэу, глицерин, маннит,Во всех случаях роста на полноценных средах присутствует запах,характерный для культур вида Вас 111 й ОЬ 1111.Способ осуществляется следующимобразом. 10Культуру штамма Вас 111 ц ь в ц Ь й 111 вВНИИгенетикавыращивают на агаризованной среде Хоттингера или МПЪв течение 20-24 ч при 37 С, переноосят в олбы с посевной средой и выращив,аот при постоянном перемешивании и аэрации в течение 18-24 чпри 28-ЗООС. Затем посевной материалпереносят в Ферментационную среду вколичестве 4-6 об Процесс биосинтеза осуществляют в колбах на качалке (240-260.об/мин) при аэрации иперемешивании,обеспечивающих скоростьрастворения кислорода 2,4-3,8 гО/л.Оптимальная температура процесса Ферментации 32-34 ОС.1 Посевные и Ферментационные среды содержат в качестве источника углерода техническую глюкозу, источника азота - азотнокислый аммоний, источника ростовых Факторов - БВК, пептон, минеральные соли (ИдСили М 9504, йас 1), мел. Все компоненты питательных сред смешивают и стерилизуют,Накопление ксантозина в культуральЗ 5 ной жидкости достигает 13,2 г(л за 144 ч ферментации, помимо ксантоэина штамм накапливает до 5 г/л иноэина.П р и м е р 1. Культуру со ско шенного агара Хоттилгера переносят на жидкую посевную среду следующего 1 состава, В:ГлюкозаБВКПептон.Иас 1 Посевной материал выращивают вколбах емкостью 750 мл, содержащих100 мл среды, на качалке, делающей220-240 об/мин в течение 24 ч,при 28-30 С. Инокулят передают в Ферементационную среду в количестве4 с 0 об%Состав Ферментационной среды, Ф:Глюкоза техническая12,0БВК 2,5НН 4 иоСаС 0 2,0МС 1 0,5Вода водопроводная, рН среды достерилизации устанавливают на уровне 7,0 с помощью едкого кали, Глюкозу стерилизуют совместно со средой.Процесс Ферментации проводят вколбах Эрленмейера емкостью 750 мл,содержащих 30 мл среды, соответствующей скорости растворения кислорода2,4-3,8 тО 2/л в час при 28-30 С накачалке, делающей 220-240 об/мин,После 144 ч Ферментации в культуральной жидкости накапливается9,6 г/л ксантозина, а также 3,1 г/линозина.П р и м е р 2. Штамм, составпосевной и Ферментационной сред, условия выращивания посевного материа"ла и условия Ферментации аналогичныпримеру 1. Отличие заключается в томчто Ферментацию проводят при подвышенной температуре, т.е. 32-34 С,Через 144 ч культивирования в культуральной жидкости накапливается13,2 г/л ксантозина, а также 4,8 г/линозина.Выделение ксантозина осуществляется известными способами.Таким образом, предлагаемый способ и использование штамма ВНИИгенетикапозволяет получать выход целевого продукта до 13,2 г/л за 144 чФерментации на Ферментационной питательной среде, содержащей доступное сырье в виде технической глюко, зы и БВК, при повышенной температуре и достаточной аэрации.