Способ получения фракций, содержащих гидроперекиси фосфатидилэтаноламина

//С 07 Г 9/10 с присоединением заявки ИВГосударственный комитет СССР но делам изобретений и открытий, .Научно-исследовательский институт по бйологическ миспытаниям химических соедрнбйий.,-,с аявите(54) ОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФРАКЦИЙ ДРОПЕРЕКИСИ ФОСФАТИДИЛ ДЕ РЖИЦОЛАМИ ч бесхода15 ч Изобретение относится к биологи еской химии, а именно к способам получения биологически активных веществ, принимающих участие в мембранных изменениях различных физиологических процессов.Известен способ получения Фракций, содержащих гидроперекиси фосфатидилэтаноламина, включающий окисление суспензии фосфатидилэтаноламина в буферном растворе с помощью прооксидантов 1.Однако известный способ не о печивает достаточно высокого вы целевого продукта.Целью изобретения является увели- ение выхода целевого продукта.Поставленная цель достигается тем, что согЛасно способу получения Фракций, содержащих гидроперекиси фосфатидилзтаноламина, включающему окисление суспензии фосфатидилзтаноламина в буферном растворе, окисление суспензии фосфатидилзтаноламина проводят в присутствии липоксигеназы в концентрации 3 16 -510 мг/мл-Я. при 0-4 еС и рН 7,8-8,0 при постоянной продувке кислородом с последующей экстракцией липидов смесью растворителей хлороформ-метанол, растворением липидов в хлороформе и выделением целевого продукта тонкослойной хроматографией. П р и м е р 1. 100 мг ФЭА суспендируют в 100 мл буФера трис-НС 1-йаС 1 (рН 7,8), охлажденного до 4 С. В суспензию липидов добавляют 3 мг Фермента липоксигеназы, окисляют в течение 30 мин прн постоянной продувке кислородом на водяной бане с температурой 4 С, После окисления липиды зкстрагируют пятикратным объемом смеси растворителей хлороФорм-метанол (2:1) в делительной воронке. После расслаивания хлороформную фракцию, содержащую липиды, отбирают и растворители отгоняют на роторном испарителе. Выход липидов, представляющих собой смесь неокислившегося ФЭА и его гидроперекисей равен 70 мг. После растворения липидов в 3,5 мл хло-, роформа пастеровской пипеткой наносят липиды на нижний край хроматографической пластинки, покрытой тонким слоем силикагеля, пластинки помещают ,в хроматоГрафическую банку, содержащую 63 мя смеси растворителей хлороформ:метанол: 28 НН 40 Н (объемное соотношение 13:7:1). После хроматографнческого разделения и последующей996412 1 типом предла-фракций, со- Фосфатиднлэта 1 ественно повы 1 ение гидроперетативномукроме того, степень очист.ов. По сравнению с прот гаемый способ получени держащих гидроперекиси ноламина, позволяет су сить (до 30-35%) накоп кисей, благодаря Ферме окислению фосфолипида получить более высокую ки от примесных продук Формула изобрет .ния Составитель В. БрусиловскаяРедактор И.Митровка Техред М.Гергель Корректор 1,ференц Заказ 836/36 Тираж 416 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д.4/5Подписное Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4 трехкратной экстракции гидроперекисей смесью хлороформ: метанол (2:1) выход липида, обогащенного гидроперекисямн . на 30, равен 5 мгП р и м е р 2. Осуществляют аналогично примеру 1, но окисление про водят при рН буфера 8,0, температура буфера и водяной бани при окислении ОфС. К суспензии липидов добавляют 5 мг липоксигеназы и окисляют в течение 20 мин. В этих условиях выход липида, обогащенного гидроперекися-., ми на 35 равен 8 мг.Контроль за частотой фракции гидроперекисей ФЭА проводят с помощью Уф-спектрофотометрии.15Экспериментальные исследования по изучению биологическОй активности гидроперекисей Фосфатидилэтаноламина .показывают., что данное вещество .оказывает влияние на мембраны саркопг;азматического ретикулума клетки путем Ю встраивания в мембраны и формирования каналов, через которые происходит утечка ионов Са, протоновТаким образом, предлагаемый способ позволяет получать фракцию, содержа щую гидроперекиси Фоефатидилэтаноламина, которые могут быть использованы при исследовании действия первичных продуктов перекисного окисления Фосфатидилэтаноламина на различные ЗО мембраны клеток и роли перекисного окисления мембранных фосфолипидов в осуществлении ряда мембранных Функций. Способ получения фр акций, содержащихгидроперекиси фо:фатидилэтаноламина, включающий скис 1 ение суспензии Фосфатидилэтаноламинабуферном растворе, о т л и ч а ) щ и й с я тем, что, с целью увел учения выхода целевого продукта, оки ление сусгензии фосфатидилэтанолам на проводят в прйсутствии липоксиген зы в концентрации 3 105 10-мг- л при 0-4 С и рН 7,8-8,0 при постоян ой продувке кислородом с последующ 1 й экстракцией липидов смесью раствор-телей хлороФорм-метанол, растворе ием липидов в хлороформе и выделение 1 целевого продукта тонкослойной хро атографией. Источники инфор иции,принятые во внимание и и экспертизе1. Владимиров Ю.А.Арчаков А.И.Перекисное окисление л пидов в биологических мембранах, .1 "Наукаф,