Способ получения лизогенных клоновмикроорганизмов

(23) ПриоритетОпубликовано 23,04,81, Бюллет осудорстоенный коинт СССР оо делам изобретений и открытийата опубликован яясдння 2(72) Автор изобретен кевки ЧжмисследоВОЪшскнй Заявнтел Ростовский-на-Лону государственнь противочумный институт 4 а( 54) СПОСОИзобретение относитсяческой промышленности и кния лизогенных клонов при ощение способа.ется тем, чтоором антифагоческом раствоьтуры осущестмикробиологиается получеепетических Цель изобретения - уп Указанная цель достиг биомассу промывают раств вой сыворотки в физиолог ре, а повторный посев кул влятот методом репликСпособ поясняется следу исследованиях.Известен способ получения л клонов микроорганизмов путем го выращивания микробов и фаг тельной среде с. последующим о биомассы, промыванием и посев изогенных овместно на питаделениемом на м ю посев пластинки с агаром, повторнымкультуры на пластинки с агаромрованием в присутствии гомологфага и отбором лизогенных клон инкуби го о обхо-ы ипро.я линыйтифаода,ьоной о Однако при известном способе не димо вычисление количества культур фага при первичном посеве, большая должительность во времени получени зогенных клонов (154 ч), значитель расход питательных сред, посуды, ан говой сыворотки, трудоемкость мет предусматривающего фильтрацито бул ных культур, посев и изучение кажд дельной колонии,ПОЛУЧЕНИЯ ЛИЗОГЕННЫХ КЛОНОВМИКРООРГАНИЗМОВ ром,П р и м е р. В пробирку с 2 мл бульона Мартена вносят 2 мл фага и 0,1 млтрехчасовой бульонной культуры микроба,который хотят лизогенизировать Инкулируют 18 ч при 37 С, центрифугируют при3000 об/мин 20 мин, осадок трижды промывают (центрифугированием) растворомантифаговой сыворотки (на 5 мл физраствора добавляют 0,1 мл антифаговой сыворотки). После чего разведенный осадокзасевают на две агаровые пластинки, такчтобы получать рост изолированных колоний, После 18 ч инкубации при 37 Совыросшие колонии (основная чашка) переносят по методу реплик на пластинкидвухслойного агара, в мягком слое кото23427 3Ь рого содержится 0,2 мл трехчасовой бульонной культуры индикаторного штампа.о После 18 ч инкубации при 37 С по зонам лиэиса вокруг колоний определяют наличие или отсутствие спонтанной фагопродукции.Параллельно и одновременно колонии микробов с основной чашки изучают на чувствительность к гомологичному фагу. Для этого в 4 мл полужидкого (0,7%/ /агара) расплавленного и остуженного до 45 ", вносят 0,1 мл цельного гомологич/ ного фага, тщательно перемешивают и выливают вторым слоем в чашку Петри на слой плотного (1-1/2%) агара. На приготовленные таким способом и подсушенные агаровые пластинки репликами переносят изолированные колонии с осново ной чашки. Выращивают 18 ч при 37 С. На таком посеве вырастают колонии только реэистентных к фагу микробов, При этом способе посева одновременно на одной агаровой .пластинке изучают сто и более колоний.Для работы отбирают лизогенные колонии спонтанно продуцирующие фаг и резистентные к гомологичному фагу.Предлагаемый способ позволяет получить лизогенные клоны в два с половиной раза быстрее, объединение процесса нромывания осадка с обработкой микробовантифаговой сывороткой для освобожденияот свободного фага, использование методареплик и селективных сред, при отборелизогенных клонов, упрощает работу, сокращает время исследования и расхода материалов,формула изобретен ия Способ получения лизогенных клоновмикроорганизмов путем совместного выращивания микробов и фага на питатель ной среде с последующим отделением биомассы, промыванием и посевом на пластинки с агаром, повторным посевом культуры .на пластинки с агаром, инкубированием в присутствии гомологичного фага и отбором лизогенных клонов, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа, биомассу промывают раствором антифаговой сыворотки в физиологическом растворе, а повторный посев культуры осуществляют методом реплик,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1.3. Зи 1 е,сЛлоис 21 1969, 114,4, рр, 217-225,Составитель С. МалютинаРедактор А. Шандор Техред,А.Бабинец Корректор М, ШарошиЗаказ 2004/33 Тираж 528 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская набд. 4/5 филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4