Способ получения алкалоидов спорыньи

.044 по делам изобретений и открытий(ГДР) ваБ ерне е,ль, Крист е Хене, Э Рудольф 2) Авто да Код:КоиручКГт 14 т 1 4 т тГГфл г,7 ЕХцттяз( )й"щ обрете Инос ФЕБ Арц(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛКАЛОИДОВ СПОРЫН ира илер ксакт Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касаетсямикробиологического получения алкалоидовспорыньи, которые могут быть использованы в медицине, неврологии и гинекологии.Известен способ получения алкалоидовспорыньи путем выращивания продуценташтамма С 1 ач(серз рцгрцгеа на питательнойсреде с последующей экстракцией целевогопродукта органическим растворителем 11.Однако данный способ обеспечивает недостаточно высокий выход целевого продукта. Выход алкалоидов 2,2 - 3,8 мгл.ср.Цель изобретения - повышение выходацелевого продукта,Цель достигается тем, что в качествепродуцеята используют штамм У МЕТ РА130 Сач 1 серз рцгрцгеа (Гг) Тц, подвергают 15экстракции культуральную жидкость илимицелий и фильтрат культуральной жидкости, экстракцию ведут низшим эфиром алкилкарбоновой кислоты при рН 8 - 9, экстрактконцентрируют, осаждают из него хлороформом кристаллический аддукт эргометрин-хло- Ороформ и переводят его в соль, а алкалоидный фильтрат после выделения эргометринаподвергают хроматографической очистке,элюируют, выделяют из элюата эрготодалее переводят его в жгдукт эрготокароматический углеводород и гидрируюКроме того, в качестве низшего эалкилкарбоновой кислоты используют эацетат.При этом к культуральной жидкостиред экстракцией низшим эфиром алкилбоновой кислоты предварительно добав10 вес.% сульфата аммония, экстрагиэтилацетатом при рН 8 - 9 и отделяютракт. Культуральную жидкость перед экс акцией низшим эфиром алкилкарбоновой кислоты разбавляют водой, отфильтровы ают мицелий, фильтрат экстрагируют эти цетатом или хлористым метиленом при рН - 9 и, отделяют экстракт.Кроме того, мицелий предварительно э трагируют ацетоном, полученный экст подкисляют до рН 2 - 3, очищают петр ейным эфиром и отделяют водную фазу кстракта.Для получения алкилоидов спорынь используют штамм У МЕТ РА 130 С 1 ач Черз рцгрцгеа (Гг) Тц 1, который выращива т в питательной среде, содержащей неор ани 845827Б 1 О 5 20 25 30 35 4 О 45 5055 ческие соединения азота, сахар, органические кислоты, неорганические соли в погруженном виде, образуя при этом алкалоиды группы эрготоксина, а также эргометрин. Далее с помощью твердых или жидких сред можно достигнуть большее число спор. Образовавшийся эрготоксин и эргометрин содержится в окружающей мицелий ферментационной среде. Полученный фильтрат культуральной жидкости экстрагируют назшим эфиром алкилкарбоновых кислот предпочтительно этилацетатом при рН 8 - 9. Выделяющуюся после фильтрации биомассу в зависимости от остаточного содержания алкалоидов экстрагируют ацетоном, Полученный путем фильтрации прозрачный экстракт после установления рН 2 - 3 помощью водных кислот, предпочтительно фосфорной кислоты, очищают петролейным эфиром или петролейным эфир-ксилолом, отделяют водную фазу с помощью водного раствора аммиака, устанавливают рН 8 - 9, экстрагируют низшими алкиловыми эфирами карбоновых кислот, предпочтительно этилацетатом, и полученные экстракты промывают водой.Алкалоиды спорыньи экстрагируют из подщелоченной аммиаком культуральной жидкости без предварительного отделения биомассы при добавлении сульфата аммония с помощью низших алкиловых эфиров карбоновых кислот, предпочтительно этилацетата, и путем экстракции с помощью разбавленных водных кислот, предпочтительно фосфорной кислоты, а также проводят экстракцию при рН 8 - 9 этилацетатом, освобождая от примесей. Очищенные экстракты алкалоидов выпаривают при температуре не менее 30 С и полученные концентраты после конечной очистки переводят в алкалоиды. Для получения чистых алкалоидов концентраты неочищенных алкалоидов растворяют в 1 - 3 об.ч. хлороформа, хранят растворы при 10 С, отделяют выкристаллизовывающийся, обедненный пигментом аддукт эргометрин-хлороформ и переводят в соли, предпочтительно в гидромалоинат. Полученный госле отделения эргометрина фильтрат при 30 С концентрируют путем адсорбции и последующей десорбции по Ва(сй-способу или по способу колоночной хроматографии при использовании окиси алюминия в предпочтительном соотношении 1:20 или в соотношении 1:5, в расчете на общее количество алкалоида в концентрате алкалоидов при добавке активированного угля (соотношение адсорбирующих средств окись алюминия: активированный уголь 5:1) и низших алкиловых эфиров карбоновых кислот, предпочтительно этилацетата или хлорированных углеводородов, предпочтительно хлороформа или двухкомпонентных смесей растворителей друг с другом или с ароматическими углеводородами, предпочтительно бензолом, после выпаривания экстрактов или элюатов при 1(30 С переводят в эрготоксин -эрготоксининовые смеси, последние путем кристаллизации из ароматических углеводородов, как бензол, толуол или ксилол, переводят в несодержащие эпимеров высокой чистоты кристаллические аддукты эрготоксин - ароматические углеводороды и последние при известных условиях превращают в соли присоединения кислот эрготоксина, предпочтительно этансульфонат.Полученный эрготоксин гидрируют в присутствии менее активного никеля Ренея при 20 - 70 С, предпочтительно 60 С и давлении водорода 30 - 70 атм, предпочтительно 50 атм, в диоксане или при нормальном давлении и при 20 - 30 С, предпочтительно 25 С, в присутствии 5 - 10/,-ного катализатора палладий на угле в водном диоксане по способу рециркуляции с образованием не содержащего пигменты 9,10-дигидроэрготоксина. Гидрированные основания переводят в терапевтически приемлемые соли присоединения кислот, предпочтительно гидромалеинат и этансульфонат.П р и м е р 1, Для культивирования спор каждый из консервантов, которые в обезжиренном молоке содержат лиофильно высушенные споры, приготовляют суспензию, которую переносят на 3/о-ную агаровую среду (рН 6,0) с 15 О/О пивного сусла, 0,5 /О дрожжевого экстракта, 0,5 О/о (ХН)гРО, и 0,1 О/о цитрата аммония, и в виде культуры косого агара выдерживают 14 дней при 19 С. В качестве затравочного материала для погруженных культур по этому способу получают в широкогорлых колбах (склянках) емкостью 1000 мл 1101 О спор/сосуд для культивирования, с помощью которых можно инфицировать при надобности до 120.л питательного раствора,П р и м е р 2. Получение инокулята осуществляют с помощью суспензии спор, полученной аналогично примеру 1, которую в концентрации10 спор/мл переносят в жидкую среду, содержащую 15 пивного сусла и 2% дрожжевого экстракта, Культивирование проводят при 22 С в круглодонной колбе емкостью 500 мл с 120 мл жидкой среды на качающейся машине для встряхивания. Культура спустя 14 дней содержит 6 10 спор/колбу, которые применяются в качестве затравочного материала для ферментации алкалоидов. П р и м е р 3, Получение инокулята для культивирования спор осуществляют согласно примеру 1. В качестве питательной среды применяют 3/О-ную агаровую среду (рН 6,8 - 6,9), которая содержит 3/о сахарозы, О,ЗО/о 1 МаЯОз, 0 1 о/о КгРОд, 0,005 О/о МдЬОа НгО;0,05 О/о КС 1, 0,001 О/о Ге 507 НгО и 1 /о воды набухания кукурузы. В стеклянных узкогорлых емкостях объемом 500 мл в культуре косого агара после культивирования в течение 14 дней при 24 С получают 3 10 спор/сосуд для культивирования, которые могут применяться для погруженных культур при синтезе алкалоидов.П р и м е р 4. Споры культуры затравочного материала, полученные согласно примеру 1, суспензируют и часть их в качестве инокулята распределяют в одинаковых количествах в вертикально стоящие круглодонные колбы (емкостью 500 мл), каждая из которых содержит по 120 мл среды предварительной культуры (10% сахарозы, 1,5% цитрата аммония, 0,1% Са(МО,) л, 0,025% КН 2 РО, 0,01% КС 1, 0,03% Мд)0 , 0,001% Ге 804, 0,0004% ХпЪО, дистиллированная вода, рН 5,5, .стерилизация 30 мин Ге 800,0004%, 0,0004% ХпЯО дистиллированная вода, рН 5,5, стерилизация 30 мин при 0,5 атм), Колбы встряхивают при 24 С на (круглой) качающейся машине для встряхивания (175 об/мин). Спустя 7 дней содержимое колбы в соотношении 1:10 пересевают в колбы Эрленмейера (емкостью 500 мл), из которых каждая содержит по 120 мл основной культуральной среды (20% сахарозы, 1% цитрата аммония, 0,1% Са(ЯО) , 0,025% КН 2 РО 4, 0,01% КС 1, 0,03% МдЮ, 0,001% ГеЯО 0,0004% Хп 0 дистиллированная вода, рН 5,5, стерилизация 30 мин при 0,5 атм). Эти колбы встряхивают, как указано ранее, при одинаковых условиях. Спустя 14 дней с помощью реакции Урка определяют 2470 мг алкалоидов/л культу- ральной жидкости, в расчете на бималеинат эрготоксина. Аналоиды экстрагируют хлористым метиленом, разделяют с помощью тонкослойной хроматографии на пропитанном формамидином кизельгура и определяют УФ- спектрофотометрически, Находят 1280 мг эрготоксина и 340 мг эргометрина/л, из остатка выделяют два неизвестных нативных нептидных алкалоида и простые производные эрголина, как агроклавин, ханоклавин и т.д.Проведенное параллельно этому определение выделенного путем вакуумной фильтрации мицелия и фильтрата показывает, что эргометрин полностью и сверх того 90% образовавшегося эрготокси на содержатся в фильтрате.П р и м е р 5. 10 стеклянных ферментеров (емкостью по 2 л) засевают приготовленный согласно примеру 2 культурой погруженных спор. Ферментеры содержат по 1,3 л питательного раствора А с 10% сахарозы, 1,5% цитрата аммония, 0,05% КНаРО, 0,03% МАЗО 0,001% ГеЯО, и 0,0004% Хп 80, в водопроводной воде (рН 5,5; стерилизация 30 мин при 0,5 атм). Ферментацию осуществляют при 24 С и при перемешивании со скоростью 400 об/мин, соответственно при аэрации 0,3 л воздуха/мин. Спустя 7 дней содержимое ферментора переносят в ферментор из высококачественной стали емкостью 18 л с 10 л питательного раствора В, содержащего 10% сахарозы, 1,4% лимонной кис-, лоты, 1,0% гидроокиси аммония (25%-ной), 0 05% Са (1 МОз) х 0,025%, КНа РОа 0 01%ур ю С КС 1, 0,03% МдЗОе,0,001% ГеЬО и 0,000 2 пЯО в водопроводной воде, рН 5,5. По культивирования при 24 С, 360 об/ми 2,5 л воздуха/мин на пятый день полов содержимого ферментора применяют в ь честве инокулята для ферментора из вы ококачественной стали емкостью 63 л с 4 питательного раствора С, содержащего 2 сахарозы 1,75% лимонной кислоты, 0,07 КНаРО 4 0 02% КС 1, 0,03% Мд 50 ф, 0,00 Ге 504, 0,0012 ХпЮ 4 в водопроводной в добавляют гидроокись аммония до рН стерилизуют 60 мин при 110 С. Культ перемешивают в течение 7 дней при 2 со скоростью 300 об/мин и аэрируют 2 воздуха/мин, при необходимости осущест 5 ют добавку антивспенивателя. Культураная жидкость содержит при культивиро а нии 2640 мг всех алкалоидов/л. Провед ный согласно примеру 4 анализ показыва что в ней содержатся 1300 мг эрготокси и 550 мг эргометрина.П р и м е р 6. Количество спор, получных согласно примеру 3, культуры затрав ч ного материала в качестве инокулята р в номерно распределяют в два ферментора высококачественной стали (емкостью 18, 2 з каждый из которых содержит по 1 О лтательного раствора А согласно примеру Содержимое ферменторов перемешивают дней при 24 С со скоростью 360 об/мин и аэрируют 2,5 л воздуха/мин. Затем сод р жимое двух ферменторов переносят в ф р-ментор из высококачественной стали емк стью 250 л, который содержит 180 л питате, ьного раствора В согласно примеру 5, и ку. ьтивируют при 24 С, 160 об/мин и 0,5 воз ха/л питательного раствора в минуту, Спустя 5 дней культуру переносят в фермент из высококачественной стали емкост 2000 л с 1400 л питательного раствора согласно примеру 5, однако питательн йраствор содержит дополнительно 0,0005 / %50,. Культивирование осуществляют п и 4 о 24 С, 160 об/мин и 0,6 л воздуха/л питателного раствора в минуту. При необходимоти во все ферменторы добавляют антивспниватель. На седьмой день культура содежит 2430 мг всех алкалоидов/л культуралной жидкости. При аналитическом опредлении согласно примеру 4 найдено 1150, г эрготоксина и 490 мг эргометрина/л культ- ральной жидкости.П р и м е р 7, 200 л культурально офильтрата из соответствующего количест а в культуральной жидкости (по примеру 6,которую перед отделением мицелия разбаляют при перемешивании путем добавки вды в объемном соотношении 1:1, подщел чивают с помощью 25%-ного водного расвора аммиака до рН 8,5 и аналоиды эрг-токсина и эргометрина экстрагируют 50 иэтилацетата при использовании двухстпенчатого устройства для экстракции, рботающего противотоком. Этилацетатнь йэкстракт коццентрирук)т в вакууме при с. .=.,+30 сС до 20 исходного объема, смешивяк)т Остаток послс Выцарив 11 циц ( двум 51 обьсмными частями х,(ороформд, оставляют на 1,) ч цри 4(. лл 5 Выкристдллизовывдци 51 РдлктР 1 эрГОмстрица с хлороф 01)мом, отсасывают и получя(от 35,4 г желтоватого яллукта эргометрина с хлороформом с 75 О/оным выходом. 35,4 1 аллуктя эргометрина с хлороформом в присутствии актив(нго угля цри цдгревании растворяют В 3,1 л ацетона, добавляют к фильтряту рассчитанное количество раствора малеицовой кислоты в ацетоне, полученный кристаллический бималеинат эргометрина отсасывают и вещество высушивают при ОС. Получают соль алкялоида в виде с 1-чР(стого. окрашенного от белого ло желтоватого, кристаллического порошк; с 90%-цым выходом со стспсньк) чРстотыс 98- 100/,. Удельное вращение с(, =502(с:= 1 в воле ) . После,альцейшего концентрированияц пох чецРОго содержацего эрго- токсин фильтрата ло 0,297 л хроматографируют при применении, в расчете ца обшсс ко,цСств( ялкдлонлов В алкдлоилцом концентрате, двадцатикратного количества окиси длюминия нейтральной стялии активности через колонну с помощью .этцлацетата и эл(ОРруки 3,8 л такого же растворителя. Полученный после выпаривания досуха эл(аата В ьякууме при 1.30 С остаток после выпаривания (74,2) путем растворения В 0,22 л бецзола и стояния раствора в течение 5 и цри 4 С превря 1 цают в аллут эрготоксица с бсцзолом, выкристаллизовавшийся продукт отсасывают, промывают бсцзолом и ВысмшиВяк)т В вакхмцом эксикаторе. 11 олучяют 55,2 г 4-сРСтого, белого кРисталлРССИОГО а,1,.Уктя ЭРГОтоксицс с Оецзолом со степенью чистоты 95"/. Удельное вращение 4 == - -183 (С.=.1,8 В СНСз),Эили перемен(иваОт с двадцатикратным количеством окиси алк)минин нейтральной стадии активности, в расчете ця общее количество алкалоилов В алкалоилном коццепратс, Ло тех цор, пока смесь нс становится Г";могеццого цвета. После стояния в течение 15 миц экстрягируют трц раза по 3,82 л этила цетатя, сгущакт об ьелицсццый экстракт при 30 С досуха, нодвергак)т дальнейшей обработкс ацалогцчцым образом и получают 52,5 г (1 чисгого белого кристалли- (есР(оО длл) ктд эрготоксиця с бецзолом со степенью чистоты 95 ч(. Удельное Вращение сЦ. 83 (с, 1 8 в ( НС)з)ХромятографируОт при применении, ьрасчетс на общее кол(Иество алкалоидов в алкалоидцом концентрате, пятикратного количества окиси я,юмнция, нейтральной стадии активности при Лобавке актпвировяццого угля (адсорбционное соотношение окись алюминия: активированный угол 5:1) через колонну с помощью этилацетата и эл(оируют 4 л того же растворителя, при дальнейц(сй обработке поступают аналогичным о5 О 5 20 25 ЗО 35 4 О 45 50 55 разом и получают 55 г ,-чистого, белого кристалли (еского аддукта, эрготоксРна с бензолом со степенью чистоты 96%. Удельцос вращение с 1 а = - -183 (с=1,8 в СНС)з),РПсремсшивают при использовании, в расчете нд общее количество алкалоидов в алкалоидном концентрате, пятикратного количества окиси алюминия, нейтральной стадии активности цри добавке активированного угля (алсорбциоцное соотношение окись алюминия: активированный уголь 5;1) в фильтрационном устройстве с перемешиванием с помощью 3 л этилацетата, экстрагируют еше два раза по 2,5 л этилацетата, концентрируют объединенный экстракт при 30 С досуха, цри лальцейшей обработке поступают аналогичным ооразом и получают 55 г с 1 С-чистого, белого, кристаллического адлакта эрго- токсина с бензолом со степенью чистоты 96%. Удельное вращение ( ) = - 183 (с = = 1,8 СНСз),55,2 г аддукта эрготоксина с бензолом цри легком нагревании растворяют в 830 мл аосолютцого этанола, добавляют рассчитанное количество 0,5 молярного этанольного раствора (абсолютный этанол) этанолсульфокислоты и затем 4,2 л абсолютного эфира, полученный кристаллизат отсасывают, вецество высушивают при 70 С и получают с 95%-цым выходом с 1(,-чистый, белый, кристаллический эрготоксинэтансульфонат со степенью чистоты 98 в 10П р и м е р 8. 12 кг полученного путем фильтрации соответствующего количества культуральной жидкости мицелия в течение 3 ч при 20 С экстрагируют 18 л ацетона, отделенный путем фильтрации волноацетоцовый экстракт доводят до рН 2 - -3 с помощью фосфорной кислоты и обезжиривают и очищают двукратный экстракцией 17 л щтролейного эфира и 11 л петролейный эфир/ксилол (объемное соотношение 1:1). Полученную алкалоидсодержашую тяжелую фазу экстрагирук)т при рН=8 - 9 (аммиачцая вода) до истощения в целом 7 л этилацетдта, промывают водой в объемном соотношении 1:1 верхнюю фазу выпаривают цри 30 сС до 0,7 л, смешивают с 1,40 л хлороформа и после стояния в течение ночи при 4"С отделяют от выпавшего грязеподобцого осадка. Фильтрат концентрируют при указащых условиях до объема 0,180 л, хроматографируют ца 1,100 кг окиси алюминия (активная стадия 1) с помощью 2 л этилацетата, (полученные элюаты выпаривают в вакууме досуха и остатки после высушивания растворяют в 1000 мл толуола (бензола или ксилола). После стояния в течение ночи при 4 С отлеляют выделившееся вещество, высушивяот в вакуумном эксикаторе и получают 14,0 г белого, кристаллического аддукта эрготоксина с толуолом со степенью чистоты 98 - 100/о,П р и м е р 9. 10,0 л полученной согласно примеру 5 культуральной жидкости при пера- нанем лба 4 ч ают вы- еле ток ватенда- ого ргоают шином теоого нью тва 130 сле ашКу/ ний (не- няя сти- ска ичняя вый пд) иткта, рма азчадна асетние ар- ,О).с м), дна см, се- -ко 3,3 рислумеенфы ит. ремешивании и добавке 10 вес./о сульфата аммония при рН 9 и 20 С экстрагируют 25,0 л этилацетата, отбрасывают тяжелую биофазу, органическую фазу экстрагируют дважды по 5,0 л 2 ц/с-ной фосфорной кислоты, экстрагируют собранные водные фазы, в которых установлено рН 8 9 с помощью аммиачной воды, дважды по 5,0 л этилацетата, собранные органические фазы выпаривают до объема 200 мл при 30 С, смешивают с 400 мл хлороформом остаток после выпаривания, отсасывают выкристаллизовавшееся после стояния на холоду при 4 С в течение ночи вещество, высушивают в вакуумном эксикаторе и получают 4,20 г (71,2/с от теории) аддукта эргометрина с хлороформом со степенью чистоты 90,7/,. Содержащий эрготоксин фильтрат, сконцентрированный при указанных условиях до 120 мл, хроматографируют на 300 г окиси алюминия) с помощью этилацетата, элюат выпаривают в вакууме досуха, остаток после высушивания растворяют в 30 мл бензола, оставляют на ночь при 1(ОС, выпавшее вещество отсасывают, высушивают в вакуумном эксикаторе и получают 7,95 г (73,6/с от теории) белого, кристаллического аддукта эрготоксина с бензолом со степенью чистоты 91,6 й.П р и м е р 10. 50,0 г полученного согласно примеру 7 аддукта эрготоксина с бензолом гидрируют в 0,7 л диоксана при 60 С под давлением водорода 50 атм, в обогреваемом вращающемся автоклаве с перемешиванием или при встряхивании, в присутствии никеля Ренея в течение 2 ч для получения 9,10-дигидроэрготоксина, отфильтровывают от катализатора, прозрачный фильтрат выпаривают в вакууме досуха, гидрированное основание оставляют выкристаллизовываться при 4 С в этилацетате, кристаллизат отсасывают и высушивают при 60 С. Получают 47,5 г (90"/с от теории) й-чистого, кристаллического продукта эрготоксинового основания со степенью чистоты 90/. Удельное вращение аф = - 45,6 (с=2 в пири- дине). Полученное кристаллическое дигидроэрготоксиновое основание вносят в 200 мл метанола и рассчитанное количество 1 М метанольного раствора этансульфокислоты при перемешивании, причем спустя непро.- должительное время выделяется кристаллическая соль алкалоида. После отсасывания и высушиваняя продукта получают 48,5 г (95 й от теории) д -чистого, белого, кристаллического дигидроэрготоксин-этансульфоната со степенью чистоты 98 в 1 й.П р и м е р 11. Гидрируют 7,20 г полученного согласно примеру 9 аддукта эрготоксина с бензолом в 250 мл 90/ц-ного водного диоксана при 20 - 25 С при отсутствии света на 2,9 г 5/-ного палладия на угле в специальной циркуляционной аппаратуре, состоящей из емкости для гидрирования с трубопроводами питания и циркуляции, термометром, эжектором, резервуаром длянения газа и лабораторного шланговогсоса, при числе оборотов 138,5 ч-, нидавлении эжектора 120 мм НЬО, сти с диаметром жиклера 2 мм, в течени5 в 9,10-дигидроэрготоксин, отфильтровыот катализатора, прозрачный фильтратпаривают досуха на роторном испарипод вакуумом при 1 = 30 С, сухой острастворяют в 35 мл хлороформа, смешют с 35 мл диэтилового эфира и при иосивном перемешивании полностью осают с помощью 30 мл насыщенного эфирраствора малеиновой кислоты дигидротоксинбималеинат. Отсасывают, промы30 мл диэтилового эфира и тотчас высвают над пятиокисью фосфора в вакууэксикаторе. Получают 6,55 г (93,5/с отрии) д -чистого, белого, кристалличесдигидроэрготоксинбималеината со степчистоты 97,9/с.Приведены морфологические сво"Саиарз рцгрцгеа штамм У МЕТ РАна различных агаровых средах 1 - 3культивирования в течение 14 дней вках Петри при 24 С.Среда 1 (3"/о сахарозы, 0,001/ Ге2 ь 7 НаО, 0,3 ЯаХОз, 1/о воды набуханиякурузы, 0,1 КНРО, 3/ агара, О,МоЬО 7 НгО, рН 6,8 - 6,9). Форма колвыпуклая, компактная, беспорядочнаяправильная) и сильно складчатая, нисторона гладкая, не отстает от дна плзо .ны. Диаметр колонии 1,0 - 1,5 см. Окрцколоний: верхняя сторона от светло-коневого до фиолетового, край белый, нисторона коричневая, край светло-коричнСреднее спорообразование (Чегз рогз 46,3 10 конидий/колония.Среда 2 (15"/с пивного сусла, 0,1/рата аммония, 0,5/с дрожжевого экстр3/, агара, 0,5(ХН 4) РО, рН 6,0). Фколонии: середина выпуклая с кратерообным опусканием, край радиально скла4 в тый, агар пророс, колония отстает отпластины. Диаметр колонии 2 - 3 см. Окка колонии: верхняя и нижняя стороныло-коричневые, Среднее спорообразов34,1 10 конидий/колония.4 Среда 3 (2/с глюкозы, 50 /с водноготофельного экстракта, 3/о агара, рНФорма колонии: середина выпуклакратерообразным спуском (опусканиагар пророс, колония отстает отпластины, Диаметр колонии1,5 - 2,ьо Окраска колонии: верхняя сторонаро-фиолетовая, нижняя сторона серричневая Среднее спорообразование10 конидий/колония.Приведена микроскопическая характтика конидий и гиф, Конидии во всехчаях имеют эллипсоидную форму с рарами 6 - 1 О ит (большая ось), соответсно 4 - 8 ит (малая ось). Субстратныеимеют длину до 200 ит и диаметр 4 -845827 12 Формула изобретения Составитель С. Малютина Редактор Л, Тюрина Техред А. Бойкас Корректор С. Корниенко Заказ 5421/48 Тираж 687 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4В случае пузырчатых вздутий диаметр составляет 8 - 16 ит. Образуются воздушные гифы, их длина выше 200 ит и их диаметр составляет только 2 - 4 ит.Предлагаемый способ позволяет увеличить выход целевого продукта. 1. Способ получения алкалоидов спорыньи путем выращивания продуцента штамма С 1 аисерз рцгрцгеа на питательной среде с последующей экстракцией целевого продукта органическим растворителем, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, в качестве продуцента используют штаммУ МЕТ РА 130 С 1 аисерз рцгрцгеа (Гг) Тц 1, экстракции подвергают культуральную жидкость или мицелий и фильтрат культуральной жидкости, экстракцию ведут низшим эфиром алкилкарбоновой кислоты при рН 8 - 9, экстракт концентрируют, осаждают из него хлороформом кристаллический аддукт эргометрин-хлороформ и переводят его в соль, а алкалоидный фильтрат после выделения эргометрина подвергают хроматогвафической очистке, элюируют,выделяют из элюата эрготоксин, далее переводят его в аддукт эрготоксин-ароматический углеводород и гидрируют.2. Способ по п. 1, отличающийся тем,что в качестве низшего эфира алкилкарбоновой кислоты используют этилацетат,3, Способ по п. 1, отличающийся тем,что к культуральной жидкости перед экстракцией низшим эфиром алкилкарбоновойкислоты предварительно добавляют 10 вес.о/осульфата аммония, экстрагируют этилацета"О том при рН 8 - 9 и отделяют экстракт.4. Способ по п. 1, отличающийся тем,что культуральную жидкость перед экстракцией низшим эфиром алкилкарбоновой кислоты разбавляют водой, отфильтровываютмицелий, фильтрат экстрагируют этилацетатом или хлористым метиленом при рН 8 - 9и отделяют экстракт.5, Способ по п. 1, отличающийся тем,что мпцелий предварительно экстрагируютацетоном, полученный экстракт подкисляют20 до р 1 2 - 3, очищают петролейным эфиром иотделяют водную фазу экстракта.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Патент Великобритании1158380,кл. С 02 С, опублик. 1969.