Способ определения антигена или антител е вируса гепатита в

И С А Н И Е щ 2 О 91 О ПИЗОЫ ЕТЕНИЯ Союз Советских Социалистических Республик(088.8) Дата опубли ния описания 30.01.8 2) Авторы изобретен и ф, Блюгер и Е. К. Яворковск ижский медицинский ииститу(71) Заявитель 54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНА ИЛИ АНТИТЕ ВИРУСА ГЕПАТИТА В 2 Реакцию проводят в 1%-ном аг геле на предметных стеклах, На предметное стекло заливают по 3,5 розного геля, после застывания ко 5 нем металлическим пробойником в одну центральную лунку (диаметро и круговую траншею (наружный 15 мм, внутренний - 10 мм); емкос ральной лунки 12 мкл, а круговой 0 бО мкл (соотношение антиген -арозном каждое мл агаорого в ырезают м Змм) диаметр ть цент- траншеи нтитело 1 . 13),Гель из центральной лунки и круговойтраншеи отсасывают.При заполнении центральной лунки сы вороткой, содержащей антиген Е вирусагепатита В (НВ,Аг), а круговой траншеи сывороткой с антителами Е вируса гепатита В (НВ,Ат) через 3 - 4 ч появляется круговая линия преципптации вокруг централь ной лунки. Реакцию проводят при 33 - 37 С. Имея к щую НВ,исследуем 5 для чего н ку с НВ,А исследуем шею. Прт мых жидк 30 лунку, а щую НВ,АИзобретение относится к области медицины, а именно иммунологии,Известен способ определения антигенаили антител Е вируса гепатита В путемсведения антигена и антител в реакциииммунодиффузии в геле в присутствии поддерживающей среды с последующим учетомполученных результатов 1.Однако известный способ обладает низкой чувствительностью, процент выявленияантигена Е вируса гепатита В у больныхравен 5 - 10, кроме того, результат получают через 24 - 48 ч, а в отдельных случаяхдаже через 7 суток.Целью изобретения является повышениечувствительности и ускорение определения.Эта цель достигается тем, что реакциюосуществляют при соотношении антиген -антитело 1:13, при этом в качестве поддерживающей среды используют агарозныйгель, приготовленный на буфере рН 7,1 -7,5, и реакцию ведут при ЗЗ - 37 С.Способ осуществляют следующим образом,Реакцию начинают с приготовления буферного раствора. Состав буферного раствора (на 0,5 л дистиллированной воды):протамин сульфат 1 г; ЭДТА (этилен-дионин-тетра-ацетик) или трилон Б 0,372 г;веронал 0,491 г; поваренная соль 2,34 г; рНбуферного р а створ а 7,3. нтрольную сыворотку, содержаАг, можно определять НВ,Ат в х жидкостях (сыворотке крови), еобходимо контрольную сыворотг залить в центральную лунку, а ую сыворотку в круговую транопределении НВеАг в исследуестях ее помещают в центральную онтрольную сыворотку, содержат, заливают в круговую траншею,712091 Формула изобретения Составитель С. МалютинаТехред А. Камышникова Корректор О, Данишева Редактор 3, Ходакова Заказ 2792/6 Изд. Мз 120 Тираж 673ПодписноеНПО Поиск Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская паб., д. 4/5 Типография, пр, Сапунова, 2 Появление круговой линии преципитации между центральной лункой и круговой траншеей указывает на положительный результат, т. е. на наличие НВАг или НВ,Лт в исследуемой сыворотке крови,5При низком содержании антигена Е вируса гепатита В (НВ,Аг) в исследуемой сыворотке крови ее вносят в центральную лунку три раза с интервалом времени в 1 - 2 ч или по кругу вводят соответствую щие антитела с более низкой концентрацией, используя разведенные в физиологическом растворе антитела (1: 2 - 1: 8 и т, д.).При низком содержании антител Е вируса гепатита В в исследуемом материале - 15 сыворотке крови - ее вводят дважды в круговую траншею с интервалом времени в 2 - Зч.Предлагаемый способ позволяет повысить чувствительность в 3 - 4 раза и ускорить 20 регистрацию результата реакции в 12 - 14 раз при достаточной простоте постановки. Способ определения антигена или антител Е вируса гепатита В путем сведения антигена и антител в реакции иммунодиффузии в геле в присутствии поддерживающей среды с последующим учетом полученных результатов, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и ускорения определения, реакцию осуществляют при соотношении антиген - антитело 1: 13, при этом в качестве поддерживающей среды используют агарозный гель, приготовленный на буфере рН 7,1 - 7,5, и реакцию ведут при 33 - 37 С,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1, 1 О. Мадп 1 цз, Я. А. ЕзртагЕ, Месч зресйс 111 ез о 1 Ацз 1 га 11 а ап 11 деп розг 11 че зета йз 11 пс 1 1 гогп йе 1.е Воцч 1 ег де 1 еггп 1- пап 1 з,). о 1 1 пнпцпо 1 ор, 1972, ч. 109,5, рр. 1017 - 1021.