Способ определения антител класса i м к корантигену вируса гепатита в

(51)5 0 9 2 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН К АВТОРСКОМУ ТЕПЬСТВ синтеза осева Сощраг зоп о 1 ес 1 гощ )цщап г 1 с 1)1 а со 1 апб дпоз 11 с аззауз о 1, Мей. 1983 В соге ап 1 деп Со 1 То безвест пт 1 Ьобез оп ап Ьепт аззау, - МЗ, р,30 - 34. ИЯ АНТИТЕЛ ГЕНУ ВИРУСА медицинской ной инженеицинской нои инжео для диагние спос На твердую ф 1 д М человека, э образцы сыворот содержащиеся в сорбированными бации и отмывки д который взаимод азу сорбируют антитела к атем вносят исследуемые ки или плазмы, при этом них 1 д М связываются с антителами. После инкуобавляют меченый антиген, ействует со связанными ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Институт органическогоАН ЛатвССР(57) Изобретение относитсябиотехнологии, связано с г1 Изобретение относится к ме биотехнологии, в частности к ге нерии, и может быть использован ностики вирусного гепатита В.Цель изобретения - упроще ба,рией и касается диагностики вирусного гепатита В, С целью упрощения способа на твердую фазу сорбируют антитела к д М человека, вносят исследуемые образцы сыворотки или плазмы, при этом содержащиеся в них 9 М связывают с сорбированными антителами, После инкубации и отмывки добавляют меченый антиген, который взаимодействует со связанными специфическими 19 М. Повышение сигнала по сравнению с отрицательным контролем свидетельствует о наличии в образце антител класса 19 М, Кар в антиг высокой степени чистоты получают из лизата рекомбинантного штамма клеток Е. со 1. Антиген метят радиоактивной меткой, ферментом, хелатным комплексом европия или другой меткой, используемой в высо качу ест вител ьн ы х иммунологических реакциях. Твердой фазой служат шарики, лунки или пробирки, изготавливаемые иэ полистирола, полихлорвинила или другого материала, используемого в иммунологических реакциях. специфическими 1 д М, Повышение сигнала по сравнению с отрицательным контролем свидетельствует о наличии в образце анти - НВС класса 19 М,Согласно предлагаемому способу в катве меченого компонента используют меченый кор - антиген, который взаимодействует с антителами класса 1 д М, предварительно связанными с сорбированными на твердой фазе антителами к 9 М человека.НВс Ад высокой степени чистоты получают из лизата рекомбинантного штамма клеток Е. со 1.1642399 Составитель И.ТарееваТехред М.Моргентал Корректор В.Гирняк Редактор А.Огар Заказ 1145 Тираж 425 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинатПатент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 НВс Ад метят радиоактивной меткой, ферментом, хелатным комплексом европия или любой другой меткой, используемой в высокочувствительных иммунологических реакциях.Твердой фазой служат шарики, лунки или пробирки, изготавливаемые из полистирола, полихлорвинила или другого материала, используемого. в иммунологических реакциях нэ стадии сорбции первого слоя.Изобретение позволяет упростить процесс определения антител класса 1 д М к кор-антигену вируса гепатита В, При этом чувствительность метода не снижается. Кроме того, исключается необходимость использования крови человека,П р и м е р. Определение анти-НВс классад М в радиоиммунологической реакции.На твердую фазу сорбируют антителэ против тяжелых цепей д М человека в концентрации 10 мкг/мл в объеме 0,1 мл в 0,05 М карбонат - бикарбонатном буфере, рН 9,5, в течение 16 - 18 ч при +4 С. После трехкратной отмывки дистиллированной водой в лунки вносят разведения испытуемых человеческих сывороток 1;10, 1:10 и т. д, до 1;10 по 0,1 мл в 0,4 М йа - фосфатном буфебре, рН 7,2-7,4, содержащем 0,15 М хлорида натрия, 0,1 тритона Х - 100 и 0,1 фбычьего сывороточного альбумина, После инкуба ции в течение 1 - 2 ч при +37 С лунки отмывают 5 - 6 раз дистиллированной водой и вносят раствор меченного 1 НВс Ад в том же фосфатном буфере. После инкубации с антигеном 1 - 2 ч при+37 С следует отмывка 10 5-6 раз. Затем лунки вырезают и определяютих радиоактивность ву-счетчике. Результаты, полученные по известному и предлагаемому способам, совпадают, т, е. чувствительность обоих методов не отличается.15 Формула изобретения Способ определения антител классадМ к кор-антигену вируса гепатита В, включающий проведение на твердой фазе имму нологической реакции между антителом иантигеном с использованием меченого компонента, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа, в качестве меченого компонента используют кор-антиген, а 25 антитела классад М из испытуемых образцов связывают с сорбированными на твердой фазе антителами кд М человека.