Ингибитор бактериофага n=69-6

О П И С А Н И Е,бв 71 дИЗОБРЕТЕНИЯ СОюз Советских Социалистицеских Республнк(22) Заявлено 03.05.78,(21) 2610282/30 - 1с присоединением заявки1)М, К. С 12 В 1/2 Гесудерстеенньй комет СССР ее делам мзебретеей н еткрытхй) Заявитель ИНГИБИТОР БАКТЕРИОФАГА 6 7 ВАС 1108 НОВ 1 И 61 ЕМ 818 ЧАВ 6 А 1 ЕВ 1 АЕ йо 69-6 2). Его включа ды в начале фер. Изобретение относится к микробиологической промышленности, точнее к способам ограничения бактериофаговой инфекции, оно можетбыть использовано при производстве продуктазащиты растений - знтеробактерина,Известны средства, ингибирующие бактериофаговую инфекцию в ферментационных средах 1. Недостатком известных средств является снижение или исчезновение эффективностичерез некоторое время их использования, Этообусловлено изменчивостью и приспособляемостью бактериофагов,Целью изобретения является изыскание новых средств, ингибнрующих бактериофаг д 7Вас 1 па тЬуг 1 пдепав чаг, да 11 егав 1 О 69 - 6,доступных для использования в промышленноммасштабе и обладающих лучшими биологическими свойствами.Для достижения указанной цели в качестве ннгибитора бактериофага д 7 Вас 1 ов тЬп -гпдепав чаг. да 11 егае У 69 - 6 применяют20й 1- (о-нитрофенилсульфенил+фенил-а-алании(НФСФА) в виде дицикпогексиламмониевойсоли. Это соединение применяется в качестве идов еактнва в хи ют в состав питательнои ср ментацнн, Оно селективно в данного бактернофага, не о тельного влияния на рост н туры. яет на развнтн азывая отрицаразмножение кульП фага1, Ингнбирование бактериоой питательной среде в чаш н на ящую из 15 г куых дрожжей, 000 мл), хорошо о 7,0 - 7,4 и сте. Стерильную среливают по чашкам Питательную среду, состо курузной муки, 30 г кормо О г агар-агара и воды (до перемешнвают, доводят рН д рилизуют 40 мин прн 129 чС ду охлаждают до 50 С и .ра Петри. После застывания ни него слоя ло его есь, состояшую изодносуточной сус.ыз чаг. даепае ага д 7 (10 клераствора днцнклоФА в зтаноле ого н охлажденного ра После часты поверхности разливают см0,2 мл:смытой с косячкапензии Вас 11 Цз ФогпдепЯо 69-6, 0,2 мл бактериофток/мл), 0,2 мл 0,2%-ногогекснламмонневой соли НХ687114 1 ОП р и м е р 2. Ингибирование бактериофа.га д 7 в жидкои среде.Питательную среду, состоящую из 30 г кор.мовых дрожжей, 15 г кукурузной муки иводы (до 1000 мл), хорошо перемешивжот, 15рН доводят до 6,8-7,2, разливают в колбыпо 80 мл и стерилизуют 45 мин при 129 С.После охлаждения до 40 С среду эаеевают по0,2 мл смытой с косячка односуточной куль.туры Я 69 - 6 (10 клеток/мл) и соответст. 20 Культура Иф 69-6 Рост культуры спустя 48 ч спустя 24 ч количество количествоклеток в1 мл 7200 Ж 400 Чистая культураКультура + фаг ц 7Культура + НФСФА 70000+300 55000+190 Культура ь фаг ц 7 НФСФА Применение й. (о.нитрофенилсульфеннл)- -1.-13-фенил.а-аланина в качестве ингибитора45бактериофага д 7 Вас 110 в тЬцг 1 пд 1 енв 1 в чаг,да 11 ег 1 ае У 69-6,Источники информации, принягые во внима.ние при экспертизе1. Авторское свидетельство СТСР 9417466,кл. С 12 В 1/24, 1974,2. 1 еччав . ет а 1. 1. Апег. сает, Зов.,1963, 85, 3660. Тираж 526 Подписное ЦНИИПИ Заказ 567426 Филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 3ния верхнего слоя среды чашки инкубируют в термостате при 37 С. Контролем служат чашка Петри, содержащие те же компоненты, кроме инпибитора НФСФА. Результаты опыпгов оценивают по количеству негативных колоний, образующихся через 24 ч, Проводят 12 опытов. , Количество негативных клеток без ингибитора 181+21,0; с ингибитором 15+0,5. Эффек. тивность 92%. При производстве энтеробактерина более 50% ферментаций вир 1, ентны бактериофагом д 7 вследствие чего значительная часть ферментаций сливается в канализацию. Приведен. ные опыты показывают,что НФСФА является эффективным ингибитором бактериофага д 7, Рост зараженной бактериофагом культуры в присутствии ингибитора достигает более 80% от нормального.Согласно предварительной оценке годовой экономический эффект от реализации изобретения составит более 1,3 млн. рублей. 4вующим количеством бактернофага ц 7 иэ расчета 1 фаговая частила на 1 бактериальную клетку. После этого вносят спиртовой раствор НФСФЛ в таком количестве, чтобы его конечная концентрация в колбах составляла 20 мг/л. Контрольные колбы готовят так же, но в них не вносят НФСФА. Опытные и контрольные колбы ставят на круглые качалки (180 об/мин) и инкубируют 48 ч при 37 С. Эффективность действия НФСФА на бактериофаг ц 7 оценивают путем подсчета количества живых клеток в 1 мл питательной среды че. реэ 24 и 48 ч роста культуры, Подсчет осу. ществляется методом разведения, высевая на агариэованную среду 1 мясопептонный агар) выросцие колонии. Процесс образования спор и кристаллов контролируют с помощью микро. скопа, Полученные результаты ингибирующе. го действия НФСФА и бактериофаг ц 7 приве. дены в таблице,100 460001200 1000 0 0 97 42000+2100 91 76 400002200 87 Формула изобретения