Способ получения салициловой кислоты

р 1 572494 ОП ИСАЙ И ИЗОБР ЕТЕ Н И Союз СоветскихСоциалистически еспубли ВТОР СКОМУ ЕТЕЛЬСТВУ(22) Заявлено 13,04.76 (21) 23484 с присоединением (23) Приоритет (43) Опубликовано 15 (45) Дата опубликова ки Государственный комитет Совета Министров СССР,77. Бюллетень3 по делам изобретен и открытий ния 26.12.7 пи Авторыизобретен. К, Скрябин, А. М. Бо 1) Заявитель титут биохимии и ф(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕН Изобрстение относится к микробиологической промышленности, а именно к получению салициловой кислоты с помощью микроорганизмов.Известен способ получения салициловой кислоты путем микробиологического окисления нафталина бактериями Рзецдотпопаз Пцогезсепз 345-Е. Недостатком этого способа является низкая скорость накопления салициловой кислоты в культуральной жидкости, не превышающая 0,5 мг/мл/ч, в результате чего высокая концентрация салициловой кислоты в культу- ральной жидкости достигается через 90 ч ферментации, Кроме того, образующаяся салициловая кислота подвергается дальнейшему окислению микроорганизмами, что также приводит к снижению выхода салициловой кислоты.С целью повышения выхода препарата по предлагаемому способу трансформацию нафталина ведут штаммом Рзецдотпопаз рцИа 41 на среде, содержащей в качестве источника углерода сахара или органические кислоты или их соли, а нафталин вводят в культуральную жидкость в стационарной фазе роста культуры, Штамм Рзецдогпопаз рц 1 Ыа 41 экисляет нафталин до салициловой кислоты без ее дальнейшего окисления. И, И. Старовойтов и А. Н. Борисоглебс зиологии микрборганизмов АН СС САЛИЦИЛОВОЙ КИСЛОТ Для того, чтобы избежать торможения реакции трансформации салицилатом, накапливающимся в культуральной жидкости, для адсорбции используют анионообменную смолу5 Амберлит 1 К.Характеристика эксконъюгантного штаммаРзецдотпопаз рШЫа 41. Получен методомконъюгации в результате переноса плазмидыИ Р 1 - 1 от донорного штамма РзецдогпопазО рц 1 Ыа 12-А (2) к реципиентному штамму Рзецдогпопаз рц 1 Ыа 4, не обладающему способностью окислять нафталин досалициловой кислоты.Обладает способностью окислять нафталин5 до салициловой кислоты без ее дальнейшегоокисления.Морфологические и культуральные признаки. Клетки прямые, палочковидные, размеры (2 - 6) 0,5 - 0,7) мк, Подвижные персО трихи, грамотрицательные, неспороносные.Мясо-пептонный агар (МПА), Колонии бесцветные, гладкие, край ровный.Мясо-пептонный бульон. Образуются муть,пленка и флуоресцирующий пигмент.5 Физиологические признаки, Аэроб, даетположительную оксидазную реакцию и не накапливает в клетках поли+оксимаслянуюкислоту. Растет при 4 - 37 С, не растет при41 С. Оптимальная температура для ростаО 28 - 30 С,572494 Формула изобретения Составитель С. МалютинаТехред М. Семенов Корректор Л, Денискина Редактор В. Блохина Заказ 222420 Изд.737 Тираж 563 . Подписное 1-1 ПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д, 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 Отношение к сахарам, Использует Р-глюкозу, Р.маннозу, Р-фруктозу, Р-галактозу,1.-арабинозу, сахарозу, мальтозу, лактозу.Не использует Р-ксилозу и трегалозу.Отношение к органическим кислотам. Использует ацетат, пропионат, бутират, сукцинат, пируват, фумарат, бензоат. Не использует салицилат.Отношение к углеводородам. Не использует и не окисляет н-алканы (Сгз - Сг)Отношение к источникам азота. Ассимилирует аммонийный и нитратный азот.Желатину не разжижает,Крахмал не гидролизует.Мезо-инозит не ассимилирует,Использует глицин, бензиламин и гиппуровую кислоту.Пример 1, Культуру Рзецдогпопаз рц 11 да штамм 41 поддерживают на косяках сМПА, выращивают в течение суток на средеМПА, и суспензию выросшей культуры высевают в медицинские колбы на 750 мл с жидкой средой, разлитой по 100 мл.Состав среды следующий, /о.КгНР 04 1,0КНгР 04 0,1ИН 4 ИОз 0,4Мд 304 7 НгО 0,0051. е 504 7 НгО 0,001СаС 1 г бНгО 0,001СцЯ 04 5 НгО 0,0002Бензоат натрия 1,0Вода дистиллированная,Плотность суспензии клеток, используемойв качестве инокулята, составляет 5 К 10 клеток/мл, 10 мл такого инокулята используютв качестве посевного материала на одну кол 4бу. Культуру выращивают в колбах на кру.говой качалке (180 об/мин) при 30 С.После достижения культурой стационарнойфазы роста (12 ч инкубации) в культураль ную жидкость добавляют нафталин 1 г на100 мл среды и анионообменнную смолу Амберлит 1 К30 мл на 100 мл среды, упакованную в целлофановый мешочек, Окисление нафталина ведут в колбах на качалке в 10 течение 10 ч при 30 С. Салициловую кислотуэлюируют со смолы смесью этилового спирта и 2 н. соляной кислоты в соотношении 3;2.Концентрацию салициловой кислоты в элюате определяют спектрофотометрически с ис пользованием калибровочной кривой. Выходсалициловой кислоты - 90/о, т, е. 9 г/л.П р и м е р 2. Процесс осуществляют согласно примеру 1, но исходная концентрация на фталина 2%. Время ферментации 20 ч.20 Выход салициловой кислоты - 92,5/ т, е,18,5 г/л. 25 Способ получения салициловой кислоть,путем трансформации нафталина культурой Рзецс 1 оптопаз на питательной среде, содержащей источники азота и минеральные соли с последующей сорбцией целевого продукта, 30 отличающийся тем, что, с целью повышения выхода препарата, трансформацию ве.дут штаммом Рзецс 1 отопаз рц 1 Ыа 41 на сре де, содержащей в качестве источника углеро.да сахара или органические кислоты или их 35 соли, а нафталин вводят в культуральнуюжидкость в стационарной фазе роста культуры.