Способ получения экспериментальной модели болезни накопления типа гоше

м ЭФ 4 Фсе к"ти т; кк М . О П И С А Н И Е 1 и 1 544988ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических Республик(22) Заявлено 17,11.75 (21) 2190057/13 51) М, Кл." С 09 В 23/О с присоединением заявки Л Государственныи комитет Совета Министров СССР ло делам изобретенийи открытий 23) ПриоритИМЕНТАЛЬНОЙ МОДЕЛЯ ТИПА ГОШЕ 2 Эмульсию перфтортрп животным внутривенно п по 5 мл/кг 4 раза в те 20 мл/кг) - 33 крысам; по 7,5 мл/кг 2 раза в те 15 мл/кг) - 6 крысам; по 5 мл/кг однократно -па 5 мл/кг однократно -утплампна вводя след.ющей схеме енцс месяца (всег облас е относится к ти к гематологии,ц патентной литературе одели болезни Гоше це ретения является получ изменений в ретикулог ах различных органов, а ям в этих органах прц медцццИзобретени пы, а именно В научной ментальной в Целью изоб тологических тарных клетк цых измепени Гоше.экспериописано. ение пастпоци- налогич- болезни ение недели (всего 6 крысах 8 кролц 1 ам 1 О(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭКСП БОЛЕЗНИ НАКОПЛЕДля этого по предлагаемому способу животным вьодят внутривенно или внутрпбрюппшно эмульсию перфтортрибутиламина в дозе не менее 5 мл/кг.Предварительно перфтортрцбутиламип эмульгируют прп помощи ультразвука в присутствии низкомолекулярных синтетических полимеров или других поверхностно-активных веществ. Содержание перфтортрибутцламина в эмульсии 20 об. %, размер частиц 0,5 мкм. Доза вводимой эмульсии перфтортриоутиламина должна быть не менее 5 мл/кг, Оптимальным вариантом является доза 15 мл/кг, которую вводят либо дробно в течение одной недели, либо однократно. Выраженные признаки болезни накопления появляются уже через месяц после введения эмульсии п сохраняются на протяжении всей жизни животного.Модель отработана в эксперименте на 50 крысах и 8 кроликах. Ту же эмульсио в дозе 20 мл/кг вводят внутрцбрюшцнно 5 крысам.)Кпвотцых забивают в различные сроки после первой инъе 1 цпп исследуемого вещества: через 10, 20 дней, 1, 3, 6 месяцев, 1 год и 1,5 года. У всех животных определяют весовые отнашечця печени и селезенки к весу тела, проводят гистологическое и гпстохимпческое исследование печени, селезенки, лцмфатически; узлов, костного мозга, почек, легкого.Кусочки органов фиксируют в формалице и готовят замороженные и парафцновые срезы, которые окрашивают гематоксилинзозинам, Суданом 111, сульфатом нильским голубым. Б:юхцмпчсскпй состаь отложений в 1 летках Гоше определяют методом 61 ег Р, Н 1.ее Я, Е.Гистологическое изучение органов крыс кроликов, которым вводили эмульсию псрфтортрибутиламцна, свидетельствует о зако544988 Формула изобретения Составитель С. Малютина Тскрсд Е. ПетроваКорректор Л. Брахнииа Редактор Н. Хубларова Заказ 215/19 Изд. М 143 Тираж 589 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, )К, Раушская иаб., д. 4/5Типография, ир. Сапунова, 2 номерном, стойком, системном поражении ретикулогистиоцитарного аппарата.В селезенке, печени, лимфатических узлах, костном мозге у всех животных было отмечено появление большого количества клеток со светлой, широкой цитоплазмой, имеющей ячеистослоцстый рисунок. Ядра удлиненной, круглой, иногда бугристой формы расположены чаще эксцентрично. Иногда клетки содержат цо два и более ядер. Наряду с отдельно лежащими патологическими клетками отмечают большое количество клеток, расположс 1 шых в виде синцития довольно обширных размеров.Морфологически клетки имеют сходство с патологическими клетками, характерными для керазинового ретикулеза - болезни Гоше.Биохимическое определение состава отложений в описанных клетках, выделенных цз селезенки подопытных крыс, показало, что содержание цереброзида в них почти в 2 раза больше, чем в селезенке здоровых крыс 1150 у в опыте против 84 у в контроле).Описанные морфологические изменения в органах наблюдались у всех подопытных животных независимо от способа введения эмульсии перфтортрибутцламцна. Различие в морфологической реакции па введенное вещество отмечалось только через 10 суток после введения крысам эмульсии перфтортрибутиламина в разных дозах - 5 мл/кг и 15 мл/кг. В указанный срок клетки типа Гоше наблюдались только в органах животных, которым была введена большая доза 115 мл/кг). Однако через 1 месяц клетки типа Гоше появлялись у всех животных независимо от дозы вводимой эмульсии. В более позднис сроки наблюдения 13 месяца, полгода, 1 год и 1,5 года) установлено прогрессирующее увеличение числа клеток типа Гоше, что указывает на непрерывность, динамичность патологического процесса.5 Разрастание измецеццьх ретикулогистиоцитарных клеток в печени и селезенке приводит к достоверному 1 Р(0,1 и Р(0,001) увеличению весовых индексов этих органов, особенно селезенки. Весовой индекс для печени в среднем равен 6,2 протцв 5,2 в норме, весовой ип 1 декс для селезенки - 1,4 в опыте против 0,5 в контроле.На основании гистологических, гистохимических ц биохимических исследований сделано 1 о заключение о воспроизведении экспериментальной модели болезни накопления типа Гоше,Предлагаемый способ получения экспериментальной модели болезни накопления типа 20 Гоше даст возможность прош 1 кцуть во внутриклеточные аномалии обмена веществ и в структуру и функции измененных клеток и будет способствовать разработке методов и средств лечения.25 Способ получения экспериментальной модели болезни накопления типа Гоше, отл и О ч а ю щи йся тем, что, с целью получения патологических изменений и ретикулог 11 стиоццтарных клетках различных органов, ацалоп 1 чцых изменениям в этих органах при болезн 1 Гоше, животным вводят внутривенно или 35 вцутрцбрюшинно эмульсию перфтортрибутиламина в дозе це менее 5 мл/кг.