Спосод получения диагностикума для серологических реакций

О П И С А Н И Е и 1 544431ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Сова Советских Социалистических Республик) Приоритетубликовано 30.01.77, Бюллетеньта опубликования описания 17.02.77 Совета Министров СССпо делам изобретенийи открытий, ф, Алимова, Ю А Жданов но-исследовател арственный уни В, Н, Милютин, А.С, М, Рассудов, В.Ростовский-на-Дону госуда противочумный институт и Р Н. Наркевич,В, Дервоед ирственный иаустовский госу 71) 3 аявител киирситет 54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИКУ ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ 2 оси повышение беспечения ата с носиИзобре 1 ение отн тся к медицинской микробиологии,Известен способ получения диагностикума для серологических реакций путем соединения активного компонента с инертным носителем в виде различных природных соединений неорганических веществ.Однако известный способ не обеспечивает высокой стабильности препарата.Целью изобретения являетсястабильности препарата путем опрочной ковалентной связи субстртелем.Для этого по предлагаемому способу используют носитель со свободной сульфохлориднои группои - ЯОС 1.Способ осуществляют следующим образом.Берут 1 вес. ч. высушенного и суспендированного в 16 вес. ч. диметилформамида сульфированного полистирола (диаметр частиц 1,5 - 8,0 мк) и добавляют к ней 2,8 вес. ч, тионилхлорида при охлаждении льдом и перемешивании. Реакционную смесь выдерживают 24 час при комнатной температуре (20 С). Избыток реагентов отмывают сухим диоксаном. Полистиролсульфохлорид высушивают в вакууме при 80 С.Коньюгацию иммуноглобулинов или антигенов с полистиролсульфохлоридом проводят в буферном растворе (рН 7,2 - 8,5) в течение 3 - 4 час при 20 С и 12 час при +4 С, Диагностикум отмывают от несвязавшегося биологического субстрата. Количество привитого биологического субстрата: 20 мг И на 1 г носителя, Связь носителя и биологического субстрата устоичива к действию 0,1 н. НС и 0,1 н. МаОН. Рабочее разведение диагностикума - 1%-ный раствор в буфере для реакции агломерации на стекле и 0,50-ный раствор для объемной серологической реакции. Лиофилизпрованный плп находящийся в виде суспензип в буфере дигностикум можно сохранять при +4"С неограннченно долго.П р и м е р 1, К 10 мг гаммаглобулина, выделенного из чумной агглютинирующей сыворотки, в физиологическом растворе (рН 7,8) в присутствии пирпдина (0,2 мл) добавляют 500 мг полимерного носителя (сополимер стирола и дивинилбензола), содержащего свободные сульфохлоридные группы. Выдерживают в течение 3 час при +20 С при перемешивании и в течение 12 час - при +4 С.Полученныц диагностикум 7 - 8 раз промывают буферным реактивом (фосфатным, рН 7,2) при 2000 об/мин в течение 15 мин, каждый раз меняя буфер. В смывах и в конечном супернатанте определяют количество несвязавшегося белка. В осадек определяют количество связанного азота. Химически связывается 9,96 мг белка. Для постановки сероло544431 Формула изобретения Составитель С. Малютина Редактор Н. Хубларова Техред Е. Петрова Корректор Л. КотоваЗаказ 201/4 Изд,169 Тираж 654 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 гических реакций диагностикум разводят буферным реактивом (рН 7,2) до 1 - 0,5%-ного раствора.Пример 2. В целях индикации и идентификации возбудителей особо опасных инфекций (чума, холера) на стекле используют антительные варианты суспензионного диагностикума. Методика постановки реакции обычная, Количество микробных клеток для возбудителя чумы не менее 1(10 в - 1;10 м.т. в мл, холеры - 2 - ЗМ 10 м.т, в мл, Учет реакции через 30 - 60 сек. Степень агломерации не менее .П р и м е р 3, Для развернутых серологических реакций на полистироловых пластинах или в пробирках в каждую опытную и контрольную лунку или пробирку добавляют по 1 капле суспензионного диагностнкума. Учет реакции через 35 - 50 мин. Чувствительность реакции 0,03 у/мл для + фракции чумного микроба, 1 - 10(104 м.т, в мл для чумного микроба; 0,03 у/мл для 111 фракции холерного вибриона; 5 р(10 а м,т, в мл для холерного вибриона.Суспензионный диагностикум на основе полистиролсульфохлорида обеспечивает стандартизацию серологических реакций, сокращает время учета реакций (в 2 - 20 раз), повышает чувствительность реакций на 2 - 3 порядка, Приготовленный диагностикум может храниться в жидком виде с добавлением консервантов нли в лиофилизированном состоянии неограниченно долго при +4 С. Способ получения диагностикума для серо- логических реакций путем соединения активного компонента с носителем, отл и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения стабильности препарата путем обеспечения прочной ковалентной связи субстрата с носителем, используют носитель со свободной сульфохлориднои группои - ЯОС 1.