Способ получения молокосвертывающего ферментного препарата

(Ы М. КлР С 1201 ч/10 НИИМ приао ИадарстаайьЙ камататОоввта Маактраа СССРпа доь иаааратае 1н атаианй(53) УДК 57 б,15,08(088,8) 0227 оллетеньанин 23 12.7 г 1 г 1 изковская Л, Н. Фетопова А. 11, 111 цврица и А, 11, 11 еотт эцсц Бота 1 п 1 ческий институт им, В. Л, Ильярова Заявитег(54) СПОСОБ ИОНУЧЕНЯ МО 11 ОКОСВЕРП:,1 ВА 101 т ЕРШ ФЕРМЕИТ 11 ОГО 11 РЕ 11 АРА 1 А 4ение относится к производствуратов. е н способ получения молокосверты ентного препарата путем культиви центов на жидкой питательной сред Очники углерода, азота и минераль ду 1 ощим выделением фермента из к дкости.гаемый способ позволяет получить а овани, содернь."е со- ульту а оле активный фермент.го в качествеиальные грибГого вида целе52 ЭСО ВВСтве источника эт продуцента фермента и видаяцазОЕО. Т 1 еса сообразно исцользова аботать 2углерода целесообра эрозу мальтозу и цел т базид указа 1 п т.зля амм В кач зно ис лобио. пользовать глюкозу; с В качестве источника азотапептон, аспарагин К И: ,11чсвину.В качестве минеральных совать КН рО 4 Мт 504 7 Н 21 Е ЬО 7 Н .,К 1 т О,Б качестве стимуляторов рв 2 ть экстракт цз солодовых р 1 ожно использовать еи следует испольО,ъ Ьо, 7 НО использо. та можнтков. ных ирена Известе гоЦ ферм его гтроду жащей ист ли с после ральной жоЧШТЭМЬ 1 - Продуцс 1 Г баэццЭЛЬИОГО Гриба ЙО ЗаЙГТЙ.СоО"0 ГЬ 2. В 1 ДЕЛСЦ 1 З ПИОЦОВОГО Тел.1 Ы.О,д асот ОГЙ 12 р(с 11 оежк 2 серсощЯ)11 э коьтптет сцоисппептческой среде этот штамм образует колонииИЗ бЕЛОСПЕжцОГО ЬлиЛиц."И 1 Ь; 1 тоЧттчц,ОГО И Суб.СтраНОГО МИИЕЛИя ТОИКИЕ, .7 - 3,0 т,КМ и ЦИЭМСТ.рЕ, ИЗОГцуг 11 Е, С рсдС 1. ГИ ПЕРСГОродкатц; Срсдн 1 Ифсуостратногд минелия встречэ 10 тся крупи 12 111 аро.-втпцьте клетки цо 10 - 17 мкм п,диэ,1 етрс,т те югпеВСЕГО РЭЗВИТ 11 Я Го 16 ОСТЭЕ ТСЯ:,12 НСГЕТЭТИГИИ 1 СТЭЦ:Ии не Обрэзтет ииъ.,эких Оргэиотт спороО.цети 11,Мэксиьтальая экТИВГОС , ,:Г Л 0101 СПЕОт 1 ГЭЮИСт - э,оЛ,ЯЯЬЮРСО ОГПТТ 3, ЦЭСТУПЭЕТ ПРИ 1 ОПЕРХИО-тст 1 кттт выра 1 тпваци 1 на 20 3 71 ецт )Остз, при Глбитцом - ца 8 - 9 дсць 1)оста при рИ среды в ттределэх3,5-4,5.Нацбольшач активность фарста получается цэ ЧО Среда С МЭЛЬТОЗОй И ГПСКОЗО 1, ВИСМИ СТВОрЮОПТЭтцямолока иа этих средах составляет соответственно522230 Составитель В ОсиповТехред Н, Андрейчук Корректор Д. Мельниченко Тираж 575 Подписное Редактор А. БерЗаказ 4559/314 ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4 биологических матрасах, содержащих соответствен.но 100, 200 и 150 мл питательной среды состава,г/л:Глюкоза 10Пелтон 3кк рО О,бК,йРц,о,ЕМРО, тй О., 0,05ХттЗО, 7 йай 0,001ИЬОтН,О, 0,0005Среду готовят на водопроводной воде,Исходный рН до стерилизации 1 среды 5,6. Стерили;зацию проводят при давлейии" 1,2 атм в течение 45 мин,Посевной мицелий выращивают на сусле - агаре.7 ейпературинкубации поддерживают в нределах25 - 2 боС.По,достижении максимальной активности культу.ральную жидкость отделяют от мицелия, фильтратохлащают до 4 оС, осаждение белков проводят охлаж.депим до - 15 оС 96%-ным зтиловым спиртом в соотношении 1:3,Смесь выдерживают в течение суток при - 15 оС,после чего декантируют недостаточную жидкость,Осадок от оставшейся; жидкости отделяют центри.фугированием нри 4500 - 5000 об/мин нри 0 С в те.чение 5 - 8 ьпщ. Для удаления остаточной влап и спир.та стаканы с осадком помещают в морозильную камеру при - 5 оС на 24-48 час, после чего. осадок зкстрагируют бидиетиллированной водой при ОоС на центрифуге,Водный зкстрнкт высуиивают лиофильно, а нерастворимьй осадок откидьнзают,После лиофильной сушки препарат имеет вид порошка кремового цветахорошо растворимого в воде,Активность препарата в среднем составляет500000 ед.Определяют ее по следующей методике.В 10 О мй молока вносят 1 мл 15% - ного раствораСа.С берут 10 мл в пробирку, нагревают до 35 оСи вноси 1 мл нативной культуральной жидкости. 8момент внесения куяьтуральной жидкости включают секундомер и активность фермента определяется повремени образования плотного сгусткаТаким же способом определяют активность препа.рата, при зтом к 10 мл молока добавляют 1 мл 0,1% -ного водного раствора препарата,Пересчет активности молокосвертывающего фер.мента в условные единицы проводят по методикеД, Я. Типографа и Т. А, Петиной И .За одну условную единицу активности принимают1 О количество фермента, необходимое для свертывания100 мл молока 1 мл культуральной жидкости или 1 мл0,1% - ного водного раствора препарата при 35 оС ирйб,О за 40 мин,Препарат сохраняет активность в замороженном15 состоянии около года при 4 оС - более четырех месяцев, При нагревании до 50 оС активность падает в 10раз,11 редлагаемый штамм базнднального гриба ВаааоХйЙеса 1 огагть 2 может быть использован для получе.дО ния молокосвертывающего препарата "Руссулин", который может заменить ферментный препарат аналогичного действия "Репнин" животного происхождения,Формула изобретения 1, Способ получения молокосвертывающего ферментного препарата путем культивирования его продуцентов на жидктй питательной среде, содержащей"О источ 1 щки утлерода, азота и минеральные соли, споследующим вьщеленнем фермента из куЛьтуральнойжидкости, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с цельюполучении более активного фермента из продуцен.тов используют базидкальные грибы вида Я тз ь ь о й о86 .36 СОсОРОт 15,2. Способ по и. 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, чтоИЗ ВИдайоввЦФО дВСО 8 О 1 От В"ИСНОЛЬЗу.ют штамм 2.Источники информации, принятые во вниманиепри экспертизе:1. Прикладная биохимия и микробиология, 1966,т,2,Р 4,с,417,