Способ получения гемпептидных фрагментов цитохрома с

(22) Заивлено 26,03.75 (21) 2 с присоединением заявки И асударатвенный намиттОвета Министров СССРна делам нзабретнийн тирани, Сидорова осковский ордена Трудового Красного Знамени институт тонкимической технологии им. М, Б. Ломоносова 71) Заивител и Изобретение относится к новому спосо-" Способ получения гемпептидных фрагбу получения новых гемпептидов - Фрагмен- ментов цитохрома С заключается в том,тов природного белка цитохрома С корый,что гемгексапептид, отвечающий участкуиграет важную роль в процессах окислител 13-18 белковой цепи гемопротеида, лодного фосфорилирования в организме и может Ь вергатот взаимодействию с метиловым эфибыть использован для профилактики и леч. ром треонина в присутствиипивалоилхпори.ния некоторых заболеваний сердечно-сосуфц да,с последующей обработкой полученного,той системы. гемпептида 13-19 гидраэингидратом и конденсацией с соответствующими эащищенныГемпептидные фрагменты цитохрома С 1 О ми пептидамн в присутствии иода в шепоч,могут быть получены при реакции гемина сной среде в органическом растворителе,эамещенными пептидами в среде жидкого П р и м е р 1. Метиловый эфир гемгепаммиака в 1 присутствииметаллического нат- тапептида, отвечающего,участку 13-19 белр я. ковой цепи цитохрома С,Известный способ не позволяет получать 15 88,3 мг 2,4-,4 Й-О -нитрофенилсульгемпептидные комплексы с аминокислотной . фенил Мт -грифторацетил- Ь лиэил-Ь -цицепьюэ содержащей более десяти аминокислот стеинил- ). -аланил-.Ь -глутаминил- Б Ь -циси целевые продукты с выходом более 40%И. теинил- Ь-гистидин) мезогематина В раотвоПредлагаемый принципиально новый метод, ряют в смеси 3 мл ДМФА и 0,5 мл пириднна.;основан на удлинении амннокислотной це При -;10 С добавляют 0,008 мл триэтилРти гемпептида-фрагмента 14-18 белковой: амина и О 006 мл пивалоилхлорида. Спустяцепи цитохрома С с С-конца, что позволя минут приС прибавляют 10,25 мгет получать новые гемпептидные комплексы метплового эфира .-треонина и Змл ДХфАс различной длиной пептидной цепи с высо- Перемешивают 1 час при -10 С и 96 ч приким выходом (75-90%)26 , 20 С. Прибавляют 60 мл воды, подкисля521280,3 фоют до рН 4,0 (с помощью 6 нНС 1), экстра 3 ч при 20 С. Добавляют тиосульфвт натрия,пируют этилвцетатом упвривают, Остаток выпавший осадок отделяют центрифугиропромывают этанолом. Выход 78,8 мг ванием, Промывают этанолом, Растворяют+хромогена с, пиридином, восстановитешобрабатывают амберлитом ИЕдв 96 в НЯа 60, Лмдкс. 520, 551 нм 3, + форме. Рвстворижль отгойяют, Выход195,7 (С 0,6, 4% ИНОН). Соотношение 53 мг (76,5%). Электронный спектр,ао оаминокислот в гидролиэвте гемгептапептида: А. 515, 550 нм 53 +107 ( 0,4,А 1 а 1,0,%д Ь 1,0, 1 Ъ 3,1,4, 4 Ь.1,2, 12% ЙН ОН). Соотношение аминокислотМ 1%0,32 (АВ 0,9 - продукт разложения 11 в гидролиэвте гемдекапептидв: Зв 2,0,ИИ в условиях кислотного гидродиза),СЭ. Ъ 31,4,Им 2,3,7 в 10,8, ИВ 1;2,йа% 02 еопределен в виде Сма 0 Н, АВр 1, 1 (продукт разложенияЖв условияхП р и м е р 2, Гемдекапептид, соотг- кислотного гидродиза),СуФнайден в видеветствующий участку 13-22 белковой цепи Сме Н,цитохрома С. Юа) 70,4 мг метилового эфира гемгептвпептида, полученного по примеру 1 суспен- Ф о р м у л а н з о б р е т е н и япируют в 2,5 мл ДМФА и добавляют0,025 мл гидрвзиягидрата. Перемешива-;. Способ получения гемпентидных фрвгмецоют 48 ч при 20 С, разбавляют водой в ф ов цитох мв С, о т л и ч а ю щ и й10 раз, подкисляют 6 н. НС 1 до рн с я тем, что гемгексапептид, отвечающий,6,0, Осадок отделяют центрифугированием, участку 13-18 белковой цепи гемопротеитщательно примыввют этанолом. Выход да,подвергают вэаимодействиюс метидовым ,65,5 мг (93"В). Электронный спектр ( в эфиром треонина в присутствии пяввлоилтех же условиях), А. ,522, 551 нм. фй хдорида с последующей обработкой подуб) растворяют 50 мг гидразидв гемге чеиного гемпептида 13-19 гидраэингидптанептида в 5 мл ДМфА с несколькими ратом и конденсацией с соответствующимикаплями 25% ной 8 ИОН. Избыток вм эвщищеннймйпептидами в присутствиимиакв упаривают, добавляют 20 мг трипе .Кода в щелочной среде в органическомптидвхлоргидрата бензилового эфира 3 -ва Зф растворителе,дилбензил-глутамил- й -трифтора- Источники информации, принятые воопетиН-лизина. При 0 С добавляют 2 мдраст, внямание при экспертизе:вора Х М вДМфЛ (0,1 млИМв 10 мВМФА) 1, Васильева Г. А. и др. Синтез гем:и 5 мл раствора йода в пиридиие ( 73 мг йодав. пептидов фрагментов цитохрома С, ЖОХ,10 мл пиридина). Перемешивают 1 ч при О Сиф 42,1402, 1972.о,Составитель В, Волкова Редактор Л, ЕмельяноваТехред А, Богдан Корректор Йе МельничейкоПодписноео. комитета Совета Министровзобротений и открытийЖ, Раушская ивб., д.4/ Тираж 575 1 И Государственног по делам и 113035, Москва