Способ получения белковой основы микробиологических питательных сред

ОГОЭ СОВЕТСКИХОЦИАЛИСТИЧЕСКИЕСПУБЛИК 7480 2 й 1/20, С 12 В 1:ОЯ ТЕНИ ОПИСАНК АВТОРСКОМ ИЕ ИЗО ЛЬСТВ нологитехниваний,ОЙ ОС ПИТА обиолоелковой ельных ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТПРИ ГКНТ СССР(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БЕЛКОВНОВЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХТЕЛЬНЫХ СРЕД(57) Изобретение относится к микргии и касается способа получения босновы микробиологических питат Изобретение относится к микробиологии и касается способа получения белковойосновы питательных сред для культивирования бактерий, в частности флавобактерий, биомасса которых может быть.использована в качестве корма для инфузорий, которые используются для кормленияличинок рыб на ранних стадиях развития.Известны микробиологические питательные среды на мясной основе: мяснаявода, мясопептонный бульон, триптическийперевар Хоттингера и другие,Для приготовления мясной воды парную говядину или конину освобождают откостей, жира, сухожилий, пропускают черезмясорубку, полученный мясной фарш заливают водой и кипятят, После кипячения мясную воду остуживают для застывания жира,фильтруют до полной прозрачности, разлисред, в частности флавобактерий, биомасса которых может быть использована в качестве корма для инфузорий, которые используются для кормления личинок рыб на ранних стадиях развития. Цель изобретения - упрощение процесса и удешевление продукта, В качестве исходного сырья используют обварочный бульон мясокомбинатов, полученный из субпродуктов второй категории (легких, хвостов, рубцов, желудков, сычуга, трахеи, ушей, губ,мелкой мясной обрези и др.), Обварочный бульон охлаждают до 5 С, освобождают его От твердых частиц жира, затем подщелачиваютдо рН 12,0-13,0, кипятят в течение 15-120 мин, охлаждают предпочтительно до 40-60 С, вводят сульфат алюминия предпочтительно в количестве 2,5-8,5 г/л, отделяют осадок, э бульон нейтрализуют. 2 з,п. ф-лы, 1 табл. вают в бутылки, и стерилизируют. На основе мясной воды готовят. мясопептонный бульон, добавляя к 1 л мясной воды 10, сухого пептона и 0.5 хлорида натрия, устанавливают необходимую реакцию, кипятят, фильтруют, устанавливают гидрокарбонатом или гидроксидом натрия требуемую реакцию и стерилизуют,Для приготовления триптического перевода Хоттингера так же, как и при приготовлении мясной воды, используют высококачественное говяжье мясо. Для этого его освобождают от костей, жира и сухожилий, нарезают мелкими кусочками, получают мясной фарш. Отдельно получают мясной бульон, который смешивают с фаршем. Смесь сливают в бутыль, доводят до рН 7,8-8,0, прибавляют обработанную на мясорубке поджелудочную железу в количестве10;, тщательно перемешивают, добавляютхлороформ из расчета 10-30 мл на каждыйлитр и ставят в термастат при 37 С на 7-10сут. По истечении этого времени переварфильтруют, стерилизуют.Недостатками таких сред является ихвысокая стоимость, поскольку белковой основой для их приготовления является остродефицитный пищевой продукт - мясосельскохозяйственных животных,Наиболее близким к предлагаемому является способ получения белковой основымикробиологических питательных сред путем автолиза внутренних органов домашних птиц при рН 8,6-9,0, в котором послеочистки целевого продукта устанавливаютрН 6,8-7,2. Для осуществления способа квнутренним органам домашних птиц, измельченным на мясорубке, добавляют воду,раствор гидроксида натрия, хлороформ,Баллоны с содержимым устанавливают втермостатированной комнате, периодически перемешивают, коррегируют рН 8,6-9,0.После семидневного выстаивания надосадочную жидкость декантируют, кипятят, добавляют раствор сульфата алюминия,суспензию гидроксида кальция, фильтруюти устанавливают рН 6,8-7,2,Недостатком данного способа являетсясложность процесса, так как предусматривается многоступенчатое проведение автолиза сырья, требуется соблюдениеасептических условий с применением токсического вещества - хлороформа, включе, ние многих последовательных операций(декантации, кипячения, фильтрования, подогрева, нейтрализации ионов кальция), атакже высокая стоимость целевого продукта,Цель изобретения - упрощение процесса и удешевление продукта,Поставленная цель достигается тем, чтов способе получения белковой основы питательных сред, включающем подщелачивание белкового бульона, его кипячение споследующим охлаждением, добавлениесульфата алюминия, отделение осадка инейтрализацию бульона, в качестве белкового бульона используют обварочный бульон мясокомбинатов, полученный изсубпродуктов второй категории, которыйперед подщелачиванием охлаждают до 5 Си освобождают от твердых частиц жира,подщелачивание проводят до рН 12,0-13,0,а кипячение - в течение 15-120 мин,В качестве субпродуктов второй категории используют легкие, рубец, хвосты, сычуг, трахеи, уши, губы, желудки свиней и др,Состав полученных бульонов зависит отсортамента закладываемых субпродуктов, В них содержится; белка от 2,0 до 6,54 г/л;жира до 150 г/л; содержание сухого остаткадо 30 г/л. Обварочные бульоны мясокомбинатов(БУ) представляют собой мутную жидкость с коэффициентом светопропускания, определенном по нефелометру, составляющим 1,6-2,0; цвета от молочно-белого до интенсивно желтого с характерным мясным запахом, Выдерживание в бытовом холодильнике (при 5 С в течение 18-20 ч) вызывает затвердевание основного количества .киров (до 98 ), содержащихся в таких 10 бульонах, который всплывает на поверхность бульонов, Фильтрование охлажденного БМ приводит к извлечению до 98 жиров, но существенно не уменьшает их мутности дисперсной коллоидной системы, образованной мельчайшими капельками эмульгированных жиров вместе с компонентами, входившими в состав животных тканей субпродуктов и перешедших в коллоидное состояние при их варке и после охлаждения. Подщелачивание до рН 12,0-13,0 с последующим кипячением в течение 15-120 30 мин разрушает коллоидную систему, так как при этом происходит омыление жиров с образованием нерастворимых в воде натриевых и кальциевых солей жирных кислот. Более полное осветление бульона имеет место при обработке сульфатом алюминия, при этом последний предпочтительно вводить в бульон, охлажденный до 40-60 С, Ко 35 личество сульфата алюминия в бульонедолжно составлять 2,5-8,5 г/л. П р и м е р 1, 500 мл бульона, полученного в процессе варки субпродуктов второй категории (хвосты, легкие, мясная обрезь), с содержанием белка по Лаури 1 г/л и мутностью 1,16 (по нефелометру) охлаждают до 5 С, удаляют избыток жира декантацией жидкой фазы (содержание остаточных жиров 0,3 по бутирометру), добавляют сухой гидроксид натрия до рН 12,0 и кипятят при перемешивании 15 мин. Полученный раствор охлаждают до 40 С, прибавляют раствор сульфата алюминия до конечной концентрации 2,5 г/л, Смесь фильтруют через бумажный фильтр "красная лента", не 50 допуская охлаждения, устанавливают рН 6,8 (при выпадении осадка его удаляют фильтрованием), разливают в емкости и стерилизуют при 1,0 ати в течение 30 мин. В дальнейшем используют в качестве белковой основы для приготовления жидких и плотных питательных сред. Белковая осноМикроскопические исследования ука 20. зывают на наличие в БМ стойкой фазовова представляет собой прбзрачную жид- кость светло-желтого цвета следующего состава:Аминный азот, мг% 508 Остаточные пептиды, % 040 5 Сухие вещества, % 4,00 Фосфаты, мг% 0,30 Цветность 0,10 Прозрачность 0,04 Индол Не обнаружен П р и м е р 2, Способ осуществляют 10 аналогично примеру 1, но щелочную обработку бульона (содержание белка по Лоури 3 г/л, остаточных жиров 0,4%, мутность 1,18) проводят при добавлении сухого гидроксида натрия до рН 12,5, кипятят при перемешивании 60 мин, охлаждают до 50 С, прибавляют раствор сульфата алюминия до 50 Аминокислотный состав бульона из субпродуктов второй категории до и после его кипячения при рН 12,0-13,0 и температуре 100 О.С в течение 15-120 мин и добавлением сульфата алюминия 2,5-8;5 г/л приведен в таблице,Испытание ростовых свойств бульона в сравнении с контролем (мясопептонный бульон - МПБ) проводят на бактериях ЯтарЬуососсцз ацгецз 209 и Р 1 ачоЬассег 1 цв ас 1 цайе ДХТИпутем посева по 0,1 мл 55 конечной концентрации 5,0 г/л и устанавливают рН 7,0, осадок удаляют фильтровани ем, Получают белковую основу питательных сред следующего состава:Аминный азот, мг% 700 Остаточные пептиды, % 0,45 Сухие вещества, % 450 25 Фосфаты, мг% 0,32 Цветность 0,15 Прозрачность 0,08 Индол Не обнаружен П р и м е р 3. Способ осуществляют 30 аналогично примеру 1, но щелочную обработку бульона (содержание белка по Лоури 6 г/л, остаточных липидов 0,5%, мутность 1,20) проводят при добавлении сухого гидроксида натрия до рН 13;О, кипятят при пе ремешивании в течение 120 мин, охлаждают до 60 С, прибавляют раствор сульфата алюминия до конечной концентрации 8,5 г/л и устанавливают рН 7,2, осадок удаляют фильтрованием, Получают белко вую основу питательных сред следующего состава:Аминный азот, мг% 820 Остаточные пептиды, % 0,50, Сухие вещества, % 5,00 45 Фосфаты, мг% 0,35 Цветность 0,17 Прозрачность 0,10Индол Не обнаружен исходной суспенэии бактерий с содержанием последних 10 клеток/мл (по стандартубмутности с проверкой по методу Коха) в 9,9мл контрольных и опытных сред. Для испытания роста ВачоЬастег 1 цгп ас 1 цаО 1 е ДХТИ 84 в контрольные и опытные среды вводят2% глюкозы, Инкубацию проводят в термостате в течение трех суток при 37 С длястафилококков и при 24 С для флавобактерий, По истечении времени инкубациипроводят количественный учет жизнеспособных бактерий по методу Коха,Рост культур стафилококков и флавобактерий на испытуемом бульоне составляет соответственно: для стафилококков1,0-1,410 кл/мл; для флавобактерий 4,0-4,5810 кл/мл; на контрольной среде: для стафилококков 1,0-1,1 10 кл/мл; для флавобакте 9рий 4,2-4,6 10 кл/мл.Таким образом, результаты испытанийбульона показывают, что он может служитьбелковой основой для приготовления питательных сред для бактерий.Осуществление предлагаемого способав укаэанном режиме за небольшой промежуток времени (15-120 мин) позволяет получить бульон, удовлетворяющийпотребность культивируемых бактерий в источнике аминного азота. Выход за нижнийпредел укаэанных параметров (15-120 мин,рН 12,0-13,0) приводит к уменьшению содержания аминного азота в бульоне. Верхний предел указанных параметровдиктуется необходимостью за короткийпромежуток времени получить полноценную по аминному азотупитательную среду,Формула изобретения 1, Способ получения белковой основы микробиологических питательных сред, включающий подщелачивание белкового бульона, его кипячение с последующим охлаждением, добавление сульфата алюминия, отделение осадка и нейтрализацию бульона, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения процесса и удешевления продукта, в качестве белкового бульона используют обварочный бульон мясокомбинатов, полученный из субпродуктов второй категории, перед подщелачиванием его охлаждают до 5 С и освобождают от твердых частиц жира, подщелачивание проводят до рН 12,0-13,0, а кипячение - в течение 15-120 мин,2. Способ по и 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что сульфат алюминия вводят в бульон с температурой 40-60 С.3, Способ по пп.1 и 2, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что сульфат алюминия вводят в бульон в количестве 2,5-8,5 г/л,1747480 Аминокислотный состав бульена до и после обработки Составитель Г.Голевактор Е.Копча " Техред М.Моргентал Корректор М,Демч