Способ определения содержания амилозы в полисахариде

4827 У Н ИОП ИСД Е. ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советскнк Социалистических Республик) М. Кл. б 01 п 33/ОС 13/ 1/08 заявкирисоединен Гасударственные комитет ф авета Министров СССР(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИВ ПОЛИСАХАРИДЕ ИЛО 2 - 10 мг кукурузного крах ножа вводят в пробирку, сус Изобретение относится к крахмало-паточной промышленности.Известен способ определения содержания амилозы в полисахариде по авт. св. 425105, включающий растворение полисахарида, смешивание полисахарида с йодйодидным раствором с получением раствора йодполисахаридного комплекса при нормированных концентрациях йода и йодида (например, содержащего 0,5 - 3 мг полисахарида в 100 мл 0,001 н. йода в 0,1 н. йодида калия), колориметрирование полученного раствора при длинах волн около 600 и около 500 нм и определение содержания амилозы по отношению оптической плотности при большей длине волны и оптической плотности при меньшей длине волны,При этом для каждого вида крахмала необходимо строить индивидуальную калибровочную кривую.Цель изобретения - повысить точность определения путем предотвращения влияния на результаты анализа природных свойств крахмалов.Это достигается тем, что анализируемый полисахарид перед смешиванием с йодом и йодидом подвергают кислотному гидролизу при рН менее 2, температуре 20 - 50 С в течение 15 - 60 минут.Пример 1,мала на кончике пензируют примерно в 3 мл дистиллированной воды, добавляют при перемешивании около 3 мл 2 н, гидроокиси натрия, выдерживают раствор в течение 1 час при комнатной температуре для крейстерпзацип н нейтрализуют 1 н. соляной кислотой.Затем осуществляют гидролиз пробы. Вводят необходимый избыток 1 н НС 1 до децинормальной концентрации ее в растворе, Раствор термостатируют 20 мин при температуре 50 С и охлаждают, выливая в два объема дистиллированной воды,В мерную колбу на 50 мл вводят 5 мл 0,01 н. йода в 1 н. йодиде калия, 5 мл 1 н. соляной кислоты, примерно 20 мл воды и при перемешивании приливают раствор крахмала до достижения плотной сине-зеленой окраски. Колбу доводят до метки, и полученный измеряемый раствор перед колориметрированием 10 мин выдерживают при комнатной темпеСтандартный раствор готовят разбавлением до 100 мл смеси 10 мл 0,01 н. йода в 1 н.5 йодиде калия с 10 мл 1 н, соляной кислоты,В прямоугольную кювету длиной 20 мм фотоэлектроколориметра (ФЭК) заливают измеряемый раствор и по отношению к воде определяют его оптическую плотность Д, со О светофильтром5 (максимум пропускания455277 0,92 0,73 0,59 0,5 0,43 0,405 0,31 0,38 Д 7 0,98 0,715 0,54 0,245 На миллиметровой бумаге строят график,откладывая по оси ординат значения Д 7, апо оси абсцисс значения Д.Через нанесенные на графике точки проводят прямую и определяют усредненное значеСодержаниеаъшлозы, % 0 10 20 30 0,8 1,035 1,27 1,41 1,51 1,6 1,68 1,76 2,0 4045 Редактор А, Купрякова Корректор Н. Лебедева Техред Г. Дворина Подписное Заказ 182/19 Изд.1996 Тираж 651 Сапунова, 2 Типография, пр. 3при 490 нм), затем оптическую плотность Д 7 со светофильтром7 (максимум пропускания при 582 нм),Из кюветы отбира.от 2 - 3 мл измеряемого раствора, возмещают отобранну 1 о часть примерно таким же объемом стандартного растПолученное значение Ид = 1,37 соответствует содержанию 26,5% амилозы в анализируемом образце кукурузного крахмала, При идентичных анализах высокоамилозного кукурузного, пшеничного, картофельного и рисового крахмалов получают значения Ид соответственно 1,63; 1,35; 1,31 и 1,25 соответствующие содержанию амилозы, в полисахаридах 54; 25; 22 и 19%, что согласуется с данными, полученными другими методами, основанными на индивидуальной калибровке.П р и м е р 2. Около 10 мг кукурузного крахмала заливают, примерно, 5 мл 0,5 н НС 1 и термостатируют 30 мин при температуре 50 С (гидролиз), разбавляют суспензию водой, примерно, до 25 мл, определяют осадок центрифугированием, суспензируют осадок, примерно, в 3 мл воды, растворяют (клейстеризуют) добавлением, примерно, 3 мл 2 н ЮаОН, выдерживают в течение 1 часа при комнатной температуре, нейтрализуют 1 н НС и разбавляют, примерно, до 20 мл.Далее полученный раствор анализируют, как в примере 1, получая И= 1,36, соответствующее содержанию амилозы 26%.При идентичных анализах высокоамилозного кукурузного, пшеничного, картофельного и рисового крахмалов получают соответственно значения Ид 1,62; 1,38; 1,31 и 1,26, соответствующие содержанию амилозы 52,5; 27;22 и 19,5%П р и м е р 3. 5 - 10 мг крахмала высокоамилозной кукурузы на кончике ножа вводят в пробирку и подвергают гидролизу и клейстеризации. Для этого добавляют 4 мл соляной кислоты (НС) с уд, вес. 1,11 при комнатной температуре в течение 15 мин, Раствор 15 20 25 30 35 вора, перемешивают содержимое стеклянной палочкой и колориметрируют, получая очередную пару значении Дз и Дт,Значения оптических плотностей для последовательных разбавлений измеряемого раствора: ние оптических плотностей Ид как тангенс угла наклона прямой к оси абсцисс (И= 1,3).Анализируя полисахариды известного состава получают универсальную калибровочную кривую 40 50 60 70 100 разбавляют примерно, 30 мл дистиллированной воды и анализируют, как в примере 1, но без добавления 1 н НС в измеряемый раствор, получая значение Ид = 1,64, соответствующее содержанию амилозы 55%. При идентичных анализах кукурузного, пшеничного, картофельного, рисового, а также смеси: 3 части высокоамилозного и 7 частей амилопектинового крахмала получают значения Ид соответственно 1,37; 1,36; 1,30; 1,26 и 1,18, соответствующие содержанию амилозы 26,5; 26;21,5; 19,5 и 16%.Пр и м ер 4. Приблизительно 10 мг эндосперма, высверленного из одного зерна высокоамилозной кукурузы, подвергают гидролизу и клейстеризации, примерно, в 3 мл соляной кислоты с уд, вес, 1,11 при комнатной температуре в течение 15 минут, разбавляют водой, примерно, до 25 мл, осаждают белок добавлением 5 мл 0,1%-ной фосфорно-вольфрамовой кислоты, отделяют примеси центрифугированием и анализируют раствор, как в примере 3, получая Ид = 1,62, что соответствует содержанию амилозы 52,5%. Предмет изобретения Способ определения содержания амилозы в полисахариде по авт. св. 425105, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности определения путем предотвращения влияния на результаты анализа природных свойств крахмалов, анализируемый полисахарид перед смешиванием с йодом и йодидом подвергают кислотному гидролизу при рН ме нее 2, температуре 20 - 50 С в течение 15 - 60 мин.