Способ получения производных дипептидов или их фармацевтически приемлемых солей

СООЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 9) ( ) 07 К 5 06,А 61 К 37 0 ГОСУДАРСТВЕННОЕ ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР)(5) ТЕНТНОЕ ЕТЕНИЯ ПИСА 30 К ПАТЕ Н рый може С 4-ал кокс новый илирые могутна С Я или инодин,(21) 4743684/04(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ ДИПЕПТИДОВ ИЛИ ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМЫХ СОЛЕЙ(57) Назначение: в медицинской промышленности и медицине, Сущность изобретения;способ получения производных общей ф-лыЯг -Юl-А-В - МН-СН(Я 2)-СН(ОН)-СН(Яз) - Я 4.где Я 1-(С 4-Сб)-циклоалкил. замещенный Изобретение относится к способу получения производных дипептидов или их фармацевтически приемлемых солей - новых биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине.Цель изобретения - способ получения новых производных дипептидов малотоксичных и обладающих более высокой активностью в отношении способности ингибировать ренин.Поставленная цель достигается описываемым способом получения производных дипептидов общей формулыг О 1- РК 1-Ю - А-Н Н- СН - СН - СН- (,амико- или (С 1 - С 4)-алкоксикарбониламиногруппой, Ю " -СО-, Я 2=(С 4 С 7) циклоэлкил -(С 1-С 4)-алкил; Яз=Н, ОН; Я 4=остаток: СН 2 СН 2 - О, где О=2-, 3- или 4-пиридиновый или 2-, 4-имидазольный остаток, возможно замещенные (С 1-С 4)-алкилом; А и В независимо друг от друг означают связанный М- концом с Я, или А, и С-концом с В или с ИНСНЯ 2 СНОНСНЯзЯ 4 радикал аминокислоты из ряда: фенилаланин, гистидин, тирозин, триптофан, лейцин, изолейцин, валин, аланин, м(в)-метилгистидин, о-метилтирозин, о-трет-бутилтирозин, нбрвалин норлейцин или их фармацевтически приемлемых солей. Реагент 1: кислота Я М/АОН или ее реакционноспособное производное. Реагент г: 82 чВМНСН(Я 2)СН(ОН)СН(Яз)Я 4, при необходимости, с последующим отщеплением временно защитных групп. 1 табл. где Я 1 - (С 4-Сб)-циклоалкил, котобыть замещен амино- или С 1 -карбониламино;Ю -- СО - ;Я 2 (С 4 С 7)-циклодлкил-(С 1 С 4) длЯз - водород или гидрокси;Я 4 - остаток формулыСН 2 - СН 2 - О,где О - означает 2,3- или 4-пириди2-, 4-имидазольный остаток, котобыть замещены (С 1-С 4)-алкилом,А и В независимо друг от друга обчают связанный М-терминальноили А и С терминально с ВчН-СНЯ 2-СНОН-СНЯз-В 4 радикал акислоты из ряда: фенилаланин, гисттироэин,лейцин,изолейцин, валин,аланин, 1 в-метилгистидин, о-метилтирозин, о-третичный бутилтирозин, норвалин, норлейцин, или их фармацевтически приемлемых солей, отличающийся тем, что подвергают взаимодействию кислоту В 1-АРАОН или ее реакционно способное производное; с НгМ В - МН - СН(йг)-СН(ОН)СН(йз)В 4, при необходимости с последующим отщеплением временно введенных защитных групп и выделением целевого продукта в свободном виде или в виде фармацевтически приемлемых солей,Стереоизомерные смеси, в частности,диастероизомерные смеси, которые получаются при использовании рацемических аминокислот А или В, могут отделятьсяизвестным способом путем фракционированной кристаллизации или с помощью хроматографии, Перечень использованных сокращений АСС 4-аминоциклогексилкарбонил Вос третичный бутоксикарбонил Вои-бутил-литий ОСС дициклогексилкарбодиимид ОС десорбция химической ионизации ОМР 2,4-динитрофенил ОМЕ диметоксиэтан ОМЕ диметилформамид ЕЕ этиловый эфир уксусной кислоты Е электронное воздействие ЕАВ бомбардировка быстрыми атомамиЯчНОВ 1-гидроксибензотриазол М молекулярный пикМз масс-спектрМТЕЕ третичный метил-бутиловый эфирМЕМ М-этилморфолини-РгорРА и-ангидрид пропилфосфокислотыТНЕ тетрагидрофуранПрочие сокращения, использованные для аминокислот, соответствуют обычному в химии пептидов трехбуквенному коду, Если четно не указано другое, то речь идет всегда об аминокислотах 1.-конфигурации,Использованные растворители имеют следующие сокращения;1.М 1 СНг(Сг)СНзОН 20;11.Мг СНг(С 1 г)СНзОН 9;11.Мз СНг(С 1 г)СНзОН 12;11.М 4 СНг(С 1 г)СНзОН концентрированный МНз 10:1:0,11.М 5 циклогексан/эфир уксусной кислоты 9:1Приведенные ниже примеры предназначены для пояснения настоящего изобретения, не ограничивая его этимипримерами,5 П р и м е р 1, М-(М-Третичный-бутоксика рбонил-цис- аминациклогексилкарбонил)-1:фенилаланин:норвалин- (1-Я-циклогексилметил-Я-гидрокси(2-пиридил- пентиламид. смешивают с 98 мг НОВт, 130 мг ОСС и 0,08мл МЕМ. К этому раствору добавляют 230 мг 15 1:норвалин-(1-Я-циклогексилметил-3- ги.,40 45 50 ван катализатор и отогнан растворитель, После перекристаллиэации и и-гептан/эфира уксусной кислоты было получено .4,1 г бесцветного продукта.Точка плавления 160-161 С (разложение).МЯ (ОС 1) 391 (М+1)б) М-(М-третичны й-бутоксика рбонилцис-аминоциклогексилкарбонил) -1:фенилаланинбензиловый эфир6,0 г М-третичный-бутоксикарбонилцис,4- аминоциклогексанкарбоновой кислоты и 6,3 г 1-фенилэланинбензилового Эфира было растворено в 75 мл ОМЕ, смешано с 24 мл и-ангидридом пропилфосфокислоты и 15,7 мл МЕМ при 0 С и в течение ночи при комнатной температуре происходила реакция. Раствор был разбавлен СНгС 1 г и соответственно промыт полунасыщенным раствором МаНСОз, 107 ь-ной лимонной кислотой и водой, высушен с рокси-(2-пиридил-пентидамида, растворенного в 3 мл ОМЕ и перемешивают втечение ночи при комнатной температуре,ОМЕ отгоняется в глубоком вакууме, ос 20 тавшийся раствор растворяется в эфире уксусной кислоты, отфильтровывается отвыпавшей в осадок мочевины и дважды промывается насыщенным раствором МаНСОзи насыщенным раствором МаС 1, органиче 25 ская фаза высушивается с помощью М 9304и концентрируется в вакууме. После хроматографии на колонне(селикагель), М 1) былоизолировано 315 мг,Точка плавления 100-103 С.30 МЯ (ЕАВ) 748 (М+1)а) М-(М-третичный-бутоксикарбонилцис-аминоциклогексил/ карбонил)-1-фенилаланин5,5 г М-(М-третичный-бутоксикарбонил 35 цис- аминоциклогексилкарбонил)-1-фенилаланинбензилового эфира былогидрировано в 230 мл этанола с помощью.1г палладия/угле при нормальном давлении.После окончания реакции был отфильтро 1836382помощью М 9504 и концентрирован в вакууме, Хроматография дала 5,7 г чистого продукта.ао; -14,6 (с=1,1 в СКзОН)Пример 2. 5Н-(цис-аминоциклогексилкарбонил)- .-фенилаланин:норвалин-(1-Я- циклогексилметил-Я-гидрокси-(2-пиридил пентиламид77,7 мг описанного в примере 1 соеди нения было растворено в 2 мл СН 2 С 12 и смешано при температуре 0 С в присутствии й 2 с 2 мл СГзСООН, По истечении 30 минут раствор был концентрирован, остаток растворен в эфире уксусной кислоты и 15 соответственно дважды промыт насыщенным раствором МаНСОз МаС 1Колоночная хроматография (селикагель, 1.М 1) дала 24,7 мг продукта.МЯ (ГАВ) 648 (М+1) 20П р и м е р 3. й-(й-третичный-бутоксикарбонил-транс- аминоциклогексилкарбонил)-.-фенилаланин.-норвалин-( 1-Я- циклогексилметил-3-гидрокси-(2-пири-. дил-пентиламид. 25По аналогии с описанным в примере 1 соединением, указанное в заголовке соединение было получено из М-(й-третичный-бутоксикарбонил-транс-аминоциклогексилкарбонил)-1 - фенилаланина и .-норвалин (1-Я-циклогексилметил-Я- гидрокси-(2- пиридин-пентил амида.Выход составил 270 мг.Точка плавления 219-220 С.МЗ (ГАВ) 748 (М+1) 35а) И-(М-третичный-бутоксикарбонилтран- аминоциклогексилкарбонил)-1 -фенилаланин4,45 г й-(й-третичный-бутоксикарбонил-транс- аминоциклогексилкарбонил)- 40 1.-фенилаланинбензилового эфира было каталитически гидрировано в 200 мл этанола при комнатной температуре и нормальном давлении с помощью 900 мг палладия на угле. После окончания реакции смесь была отфильтрована от катализатора и был 45 отогнан растворитель в вакууме. После перекристаллизации было получено 2,67 г чистого продукта,Точка плавления: с температуры 160 С разложение, 50МЗ (ОС 1); 391 (М+1)б) М-(И-третичный-бутоксикарбонилтранс- аминоциклогексилкарбонил)-1-фенилаланинбензиловый эфир3 г М-третичный-бутоксикарбонил транс- аминоциклогексил ка рбоновой кислоты и 3,2 г 1-фенилаланинбенэилового эфира было растворено в 40 мл ОМЕ и смевано при температуре 0 с. 7,85 мл НЕМ, а затем с 12 мл и-РгорРА. Смесь через ночь при комнатной температуре вводилась в реакцию, После разбавления 200 мл уксусного эфира раствор соответственно промывался дважды водой, 10-ной лимонной кислотой, насыщенным ИаНСОз и насыщенным раствором 1 чаС. Оставшаяся органическая фаза была высушена в помощью М 9504 и освобождена в вакууме от растворителя, Исходный продукт был растерт с диэтиловым эфиром, выпавшие в осадок кристаллы были отсосаны и высушены, Было получено 4,45 г бесцветных кристаллов.Точка плавления.176-377 С.МЗ (ОО) 481 (У+1)П р и м е р 4. И-.(транс-аминоциклогексилкарбонил)-1: фенилаланин-.1:норвалин- (1-Я-циклогексилметил-Я-гидрокси- (2-пиридил-пентиламидУказанное в заголовке соединение было получено описанным в примере 2 способом из описанного в примере 3 соединения.Выход после хроматографии (селикагель,1 М 2) составил 27 мг.Мз (ЕАВ) 648 (М+1); ЙГ 0,17 (метиленхлорид/метанол 8:2).Г р и м е р 5. ЩМ-третичный-бутоксикарбонил-транс- аминоциклогексилкарбонил)- -фенилаланин-М(1 гп)-третил-гистидин-(1-Я- циклогексилметил-Я-гидрокси- (2-п и р иди л-пентилам ид,Указанное в заголовке соединение было получено из описанной в примере За) производной фенилаланина и ГМОС-гис(третичного)-(1-Я-циклогексилметил-5-гидрокси-(2-пиридил -пентиламида в соответствии с описанным с примере 1 способом,После хроматографии (селикагель,М 1) выход составил 0,4 г,МЯ (ГАВ) 1028 (М+1), 1034 (М+7), КГ 0,5 (толуол /этанол 8:2). П р и м е р 6. М-(И-третичный-бутоксикарбонил-транс- аминоциклогексилкарбонил)-1 -фенилаланин-гистидин-(1-Я-циклогексилметил -2-5-гидрокси-(2-пиридил- пентиламид.40 мг, полученного в примере 5 вещества, было растворено в 5 мл 90,-ной уксусной кислоты и в течение 2 ч смесь была нагрета до температуры 60 С, Водородный показатель рН раствора с помощью Иа 2 СОз был доведен до значения 8 и трижды экстрагирован с помощью эфира уксусной кислоты. Органическая фаза была соответственнодважды промыта насыщенным растворомйа 2 СОэ и насыщенным раствором ИаС 1, затем высушена с помощью М 9504 и концен 18363825055 трирована в вакууме. Хроматография (селикагель, 3 М 1) дэла 16 мг чистого продукта.МЯ (ЕАВ) 786 (М+1), Разложение, начиная с температуры 155 С.П р и м е р 7. И-(транс-аминоциклогексилкарбонил)- - фенилаланин- -гистидин(1-Я-циклогексилметил-Я-гидрокси(2-пиридил пентиламид.300 мг описанного в примере 5 вещества перемешивалось е 5 мл СЕзСООН и 0,25мл Н 20 в течение 15 минут при температуре0 С и в течение двух часов при комнатнойтемпературе. Раствор был концентрированв вакууме, подщелочен раствором йаНСОзи экстрагирован с помощью эфира уксуснойкислоты.Органическая фаза была концентрирована в вакууме и остаток хроматографирован (селикагель, 1 М 2),МЯ (ГАВ) 686 (М+1), Точка плавления114 - 116 С.П р и м е р 8. й-(й-третичный-бутоксикарбонил-цис- аминоциклогексилкарбонил)-1-фенилалани н-Й(п)-тритил-Е-гистидин(1-Я- циклогексилметил-Я-гидрокси(2-пи ридил-п е нтил амид,Указанное в заголовке соединение было получено из описанной в примере 1 а)производной фенилаланина и ГМОСгис(третичного)-(1-Я-циклогексилметил-3-гидрокси-(2-пиридил)- пентиламида в соответствии с описанным в примере 1 способом. Выход после хроматографии(1 М 1),П р и м е р 9. й-(И-третичный-бутоксикарбонил-цис- аминоциклогексилкарбонил)-:фенилаланин-:гистидин-(1-3-циклогексилметил -2-Я-гидрокси-(2-пиридил- пентиламид.Укаэанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным впримере 6 способом из описанного в примере 8 соединения. В ыход составил 61 мг, Точка плавления 127-130 С.МЯ (ГАВ) 786 (М+1); йг 0.21 (1 М 2).П р и м е р 10, И-(цис-аминоциклогексилкарбонил)-: фенилаланин- -гистидин(1-Я-цикл огексил метил-Я-гид рокси-(2 пиридил-пентиламид,Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описаннь 1 м впримере 7 способом из описанного в примере 8 соединения. Выход составил 180 мг,МЯ (ЕАВ) 686 М+1),Точка плавления 177 С. Разложение,П р и м е р 11. Н-(й-третичный-бутоксикарбонил-транс- аминоциклогексилкарбонил)-1.-тирозин(о-метил)-Н( в)-тритил-Егистидин- (1-Я-циклогексилметил-Я-гидрокси-(2-пиридил-пентиламид.Указанное в заголовке соединение былополучено из М-(й-третичного-бутоксикарбо 5 нил-транс-аминоциклогексилкарбонил)-1.- тирозин(метила) и 1-гис(тритил)-(1-Я-циклогексилметил-3- гидрокси-(2-пиридил- пентиламида в соответствии с описанным впримере 1 способом, Вр 0,54 (толуол/этанол10 8:2),МЯ (ГАВ) 1058 (М+1),П р и м е р 12. Н-(й-третичный-бутоксикарбонил-транс- аминоциклогексилкарбонил)тирозин(о-метил)-1:гистидин-(1-3 циклогексилметил -2-Я-гидрокси-(2-пиридил-пентиламид,Указанное в заготовке соединение былополучено в соответствии с описанным в примере 6 способом из описанного в примере20 11 соединения. Йр 0,2 (толуол/этанол 8:2).МЯ (ЕАВ) 816 (М+1), Разложение со180 С.П р и м е р 13, Й-(транс-аминоциклогексилкарбонил)-: тирозин(о-метил):гис 25 тидин(1-Я-циклогексилметил-3-гидрокси - 5-(2- пиридил-пентиламид,Указанное в заголовке соединение былополучено в соответствии с описанным в примере 7 способом из описанного в примере30 11 соединения.МЯ (ЕАВ) 716 (М+1),П р и м е р 14. й-(й-третичный-бутоксикарбонил-цис- аминоциклогексилкарбонил)-1:тирозин(о-метил)-Й-(1 гп)-тритил:гис 35 тидин- (1-Я-циклогексилметил-Я-гидрокси-(2-пиридил-пе нтиламид.Указанное в заголовке соединение былополучено из К-(М-третичного-бутоксикарбонил-цис-аминоциклогексилкарбонил)-40 тирозин(о-метил) и 3:гис(тритилн 1-Я-циклогексилметил-3 -гидрокси-.5-(2-пиридил- пентиламида в соответствии с описанным впримере 1 способом. Вг 0,75 (М 2).МЯ (ЕАВ) 1058 (М+1).45 П р и м е р 15. й-(й-третичный-бутоксикарбонил-цис- аминоциклогексилкарбонил)-1 -тирозин(о-метил)-1:гистидин-(1-3 цикл огексил метил-Я-гид рокси-(2-пиридил-пентиламид,Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 6 способом из описанного в примере 14 соединения, Вр 0,80 (Е.М 4).МЯ (ЕАВ) 816 (М+1).П р и м е р 16. й-(цис-аминоциклогексил карбо нил)-1.- тирозил(о-метил) :гистидин-(1-Я-циклогексилметил-Я-гидрокси-(2- пиридил-пентиламид. Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в при 183638210 15 20 25 30 35 40 50 55 мере 7 способом иэ описанного в примере14 соединения. Яр 0,50 ( М 4),МЯ (ЕАВ) 716 (М+1),П р и м е р 17, й-(И-М-(цис-третичныйбутоксикарбониламино- циклогексилкарбон ил-фен ил алан и н ил)-гистиди н ил)-2-(5-Яамино-циклогексил- ЗЯ,4 Я-дигидрокси-пгексил)-пиридин.60 мг соединения иэ примера 17 а смешиваются с 40 мг тиофенола в 2 мл ацетонитрила в течение 2 ч,После концентрации раствор хроматографируют (селикагель, .М 4) и получают 45мг продукта в виде аморфного порошка.МЯ (ЕАВ) 802 (М+1),а) Вос-цис-АСС-Рйе-гис-(ОНР)2(5-амина-циклогексил -ЗЯ,4 Я-дигидирокси-пгексил)-пиридин.60 мг Вос-гис(ОМ Р)-(ЗЯ,4 Я.5 Я)-2-(5-аминЬ-циклогексил,4-дигидрокси-гексил)пиридина перемешиваются в 5 мл ОМЕ-НСв течение 2 ч. После концентрации исходный продукт вместе.с 50 мг ч-(й-третичныйбутоксикарбонил-цис-аминоциклогексилкарбонил)-.-фенилаланина. 120 мг ОСС и 80мг НОВрастворяется в 3 мл ОМЕ. Водородный показатель рН раствора доводится спомощью МЕМ до значения 9 и раствор перемешивается 16 ч. Раствор фильтруется,разбавляется эфиром уксусной кислоты икаждый раз промывается Зо-ным раствором ИаНСОз, Н 20 и насыщенным раствором МаС, высушивается с помощью М 9 Я 04.концентрируется и хроматографируется населикагелеМЗ), Получают 60 мг указанногов заголовке соединения в вире желтой пены.МЯ (ЕАВ) 968 (М+1),б) Вос-гис(ОИР)-(ЗЯ,4 Я,5 Я-(5-амино 6-циклогексил,4-дигидрокси-гексил)-пиридин.0,5 ммоль (ЗЯ, 4 Я. 5 Я)-изомера из примера 17 с) перемешиваются с 5 мл НС в ОМЕ(насыщенном) в течение 2 ч. После концентрирования в вакууме остаток растворяетсяв 3 мл абсолютного ОМЕ. Добавляется по0,5 миллимолей Вос-гис(ОИР)-ОН, дициклогексилкарбодиимида и НОВ 1. Раствор с помощью ИНМ доводится до водородногопоказателя 9 и перемешивается в течение24 часов. После фильтрации разбавляетсяЕЕ и каждый раз промывается Зоь-ным раствором МаКСОз, высушивается с помощьюМ 9 ЯОа и концентрируется. Хроматографияна селикагеле ( М) дает указанное в заголовке соединение в виде желтой смолы.МЯ (ЕАВ) 696 (М+1).с) .2-ЗЯ,4 Я,5 Я)-5-третичный-бутоксикарбониламино -3,4-дигидрокси-циклогексил-п-гексил)-пиридин. 93 мг (1 миллимоль) 2-пиколина в 10 мл ТНЕ смешиваются при температуре 78 ОС с 1,4 мл (1 миллимоль) и-Во ,После нагревания до комнатной температуры смесь перемешивается в течение 30 мин, затем охлаждается до температуры 40 С. Добавляется 1 ммоль (2 ЯЯ,ЗЯ,4 Я)3 третич н ый-бутилдиметил-силилокси-третичн ый-бутоксикарбониламино-циклогексил,2-оксопентана (растворен в 5 мл ТНЕ), После выдержки в течение 10 ч при комнатной температуре смесь разбавляетея водой и экстрагируется с помощью МТВЕ, Исходный продукт(0,4 г) разбавляется в ТНЕ и смешивается с 5 мл одномольного раствора тетрабутиламмониевого фторангидрида в ТНЕ при 0 С в течение 1 ч, После разбавления водой и экстрагирования с помощью ЕЕ получают 0,15 г(ЗЯ,4 Я,5 Я)-изомера МЯ(ЕАВ): 391(М+1) и 0,12 г (ЗЯ,4 Я,5 Я)-изомера МЯ (ЕАВ);391(М+1).П р и м е р 18. Цис-аминоциклогексилкарбонил- -РЬе-Нз-(1-Я- циклогексилметилЯ,ЗЯ-дигидрокси(2-пиридил и-пентил- амидтристрифторацетат,25 мг описанного в примере 17 соединения перемешиваются в 1 мл ТгА/1 мл СН 2 О 2 в течение 2 ч. После концентрирования смесь растворяется в Н 20 и лиофилизируется. Получают 20 мг продукта в виде бесцветного порошка.МЯ (ЕА.В) 702 (М+1).П р и м е р 19. Вос-транс-АСС-.-Р 1 е: Н 3-(1 Я-циклогексилметил Я,ЗЯ-дигидрокси-(2-пиридил-п-пентиламид,Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 17 способом из описанного в примере 19 а соединения. Яр 0,19 ( М 2). Выход составил 79,5 мг,МЯ (ЕАВ) 802 (М+1),а) ВОС-.транс-АСС- РЬе- -Нз(ОчРН 1- Я-циклогексилметил Я,ЗЯ-дигидрокси(2-пиридил)-п-пентиламид. Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 17 а способом из описанных в примерах За и 19 б соединений., ЯЕ 0,40( М 2).МЯ (ЕАВ) 968 (М+1).б) Н-гис(ОИР)-(ЗЯ,4 Я,5 Я)2-(5-амино- циклогексил,4- дигидрокси - п-гексил)-пиридин-гидрохлорид.400 мг соединения из примера 17) перемешиваются в 10 мл насыщенного раствора ОМЕ/НС в течение 2 ч. После концентрирования раствор дважды растворяется в толуоле и каждый раз вновь концентрируется.Получают указанное в заголовке соединение в виде желтой пены.МЯ (ГАВ) 596 (М+1),П р и м е р 20. Транс-АСС:РЬе:Н 1 з(1 Я-циклогексилметил В,ЗЯ-дигидрокси- (2-пиридил-п-пентиламид.Укаэанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным в примере 18 способом из описанного в примере 19 соединения Выход составил 49 мг.Мз (ГАВ) 702 (М+1). П р и м е р 21. ВОС-транс-АСС:ТУКОметил)-1:Нз- (1 Я-циклогексилметилВ,ЗЯдигидрокси-(2-пиридил)-п-пентиламид.Указанное в заготовке соединение былополучено в соответствии с описанным в примере 17 способом из описанного в примере21 а) соединения.МЯ(ГАВ) 832 (М+1).а) ВОС-транс-АСС-Туг(0-метил)-1.-Н 1 зОИ Р)-(1 Я- циклогексилметилВ,ЗЯ-дигидрокси-(2-пиридил-п-пентил-амид.Указанное в заголовке соединение было получено в соответствии с описанным впримере 17 а) способом из описанных в примерах 21 б и 19 б соединений.МЯ (ЕАВ) 998 (М+1),б) ВОС-транс-АСС-тир(ОСНз)ОН.0,05 моль ВОС-транс-АСС-тир(ОСНз)ОСНз растворяют в 250 мл ОМЕ, перемешивают количеством в однонормальномрастворе йаОН в течение 5 ч. После этогораствор концентрируется, остаток растворяется водой, подкисляется с помощьюКНЯО 4 до получения водородного показателя рН 4 и экстрагируется с помощью ЕЕ.Исходный продукт перекристаллизовывается из и-гептан/ЕЕ и получается указанное взаголовке соединение в виде белого порошка. Температура плавления 181 "С, Разложение, Вр 0,20 (толуол/этанол 8;2),МЯ (ОС 1) 421 (М+1),с) ВОС-транс-АСС-ТУКОСНз)ОСНз0,1 моль ВОС-транс-АСС-ОН и 0,1 моль1:тирозин(ОСНз)метилового эфира растворяют в 500 мл ОМГ и смешивают при температуре 0 С в присутствии й 2 со 100 мли-РгорРА (50-процентный раствор в СН 2 С 12)и 0,5 моль триэтиламина. Раствор в течениеночи приводится в состояние реакции, После окончания реакции (ОС-контроль) растворитель отгоняется в глубоком вакууме иостаток растворяется в ЕЕ. Органическаяфаза соответственно дважды экстрагируется с помощью 1 О-процентной лимонной кислоты, воды, полунасыщенного раствораЙаНСОз и насыщенного раствора НаС 1, высушивается с помощью М 9 ЯО 4, концентрируется в вакууме и хроматаграфируется(селикагель,М 5). Температура плавления150-155 С.МЯ (ГАВ) 435 (М+1)П р и м е р 22. Транс-АСС:Туг(0-ме 5 тил)1:Нз-(1 Я- циклогексилметилВ: ЗЯ-дигидрокси-(2-пиридил)п-пентиламид.Указанное в заголовке соединение былополучено в соответствии с описанным в примере 18 способом из описанного в примере10 21 соединения,МЯ (ГАВ) 732 (М+1).П р и м е р 23, ВОС-цис-АСС.-ТуКО-метил)-1:Нз-(1 Я-циклогексилметилВ,ЗЯ- дигидрокси-(2-пиридил)-п-пентиламид.15 Указанное в заголовке соединение былополучено в соответствии с описанным в примере 17 способом из описанного в примере23 а) соединения. Вг 0,21 ( М 2).МЯ (РАВ) 832 (М+1).20 а) ВОС-цис-АСС-Туг(0-метил)-1 -Н 1 з(Ой Р)-(1 Я-циклогексиметил -2 В,ЗЯ-дигидрокси-(2-и и ридил-п-пентиламид.Указанное в заголовке соединение былополучено в соответствии с описанным в при 25 мере 17 а) способом из описанных в примерах 23 б) и 196) соединений.МЯ (ГАВ) 998 (М+1).б) ООС-цис-АСС-Туг(ОСНз).ОН.Указанное в заголовке соединение пол 30 учается по аналогии со способом примера21 б), а Р = +18,6 С (с" 1, метанол).МЯ (ОС) 421 (М+1),с) ВОС-цис-АСС-Туг(ОСНз)-метиловыйэфир.Укаэанное в заголовке соединение получается по аналогии со способом примера21 с),МЯ (ОС 1) 435 (М+1)П р и м е р 24. Цис-АСС:Туг (О-метил)- 1:Н з-(1 Я- циклогексилметилВ,ЗЯ-дигидрокси-(2-пиридил-п-пентиламид.Указанное в заголовке соединение былополучено в соответствии с описанным в примере 18 способом из описанного в примере45 23 соединения. ВГ 0,56(1.М 4).МЯ (ГАВ) 732 (М+1),П р и м е р 25. ВОС-цис-АСС-Р 1 е-Н 1 з(1 Я-циклогексилметилЯ -гидрокси-(йпропил-имидазолил-пентиламид.Указанное в заголовке соединение былополучено в соответствии с описанным в примере 17 способом из описанного в примере25 соединения.МЯ (ГАВ) 817 (М+1).а) ВОС-цис-АСС-Р 1 е-Н 1 з-(ОМРН 1 Я-циклогексилметилЯ- гидрокси-(й-пропилимидазолил-пентипамид.80 мг соединения из примера 8 перемешиваются с 4 мп НС в насыщенном ОМЕ втечение 2 часов. После концентрирования в вакууме остаток абсолютно растворяется в3 мл ОМЕ. Добавляется 44 мг ВОС-цис-АССРЬе-ОН и по 0,11 миллимоля ОСС и НОВт.Водородный показатель раствора с помощью НЕМ доводится до значения 9 и раствор перемешивается в течение 24 часов.После фильтрации раствор разбавляется спомощью ЕЕ и каждый раз дважды промывается 3%-ным раствором ИаСОз, Н 20 и насыщенным раствором Ма О, высушивается спомощью МдЯО и концентрируется. Хро 4матография на селикагеле дает указанное взаголовке соединение в виде желтой смолы,МЯ (ЕАВ) 983 (М+1). 15б) ВОС-Нз-(ОИР)-(1 Я-циклогексилметилЯ-гидрокси- (М-пропил-имидазолил-пентиламид.100 мг соединения из примера "с" перемешиваются с 5 мл Нсй в насыщенном ОМЕ 20в течение 2 ч, После концентрирования ввакууме остаток абсолютно растворяется в3 мл ОМЕ. Добавляется 105 мг ВОС-Нз(ОМР)-ОН и по 0,3 миллимоля ОСС и НОВ 1,Водородный показатель раствора с иомощью НЕМ доводится до значения 9 и раствор перемешивается в течение 24 ч. Послефильтрации раствор разбавляется с помощью ЕЕ и дважды промывается 3-процентным раствором ИаСОз, Н 20 и насыщенным 30раствором МаС 1, высушивается с помощьюМдЯ 04 и концентрируется, Хроматографияна селикагеле дает указанное в заголовкесоединение в виде желтой смолы.МЯ (ЕАВ) 711 (М+1). 35с) 500 мг соединения из примера "б"абсолютно растворяются в 5 мл ТНЕ в атмосфере аргона при температуре 60 С, добавляют 1,9 мл 1,5 молярного раствораи-бутил-лития в п-гексан. По истечении 15 40минут присоединяют 500 мг соединения изпримера "е", абсолютно растворенного в 5мл ТНЕ. По истечении 1 ч при 60 С добавляют 10 мл насыщенного раствора йаНСОз.После нагревания до комнатной температуры, раствор трижды экстрагируется с помощью ЕЕ, высушивается с помощьюйа 2 Я 04 и концентрируется, Путем хроматографии на селикагеле ( МЕЕ) получают указанное в заголовке соединение. 50ВЩ 0,3 (Е=); МЯ (ЕАВ) 408 (М+1).б) 2-метил-й-и-пропил-имидазол,10 г 2-метил-имидазола нагреваются в40 мл и-п ропилбромида в течение 2 часов докипения. Затем до 150 мл доливается 5-процентный раствор МаНЯОд, раствор триждыэкстрагируется с помощью ЕЕ, высушивается в помощью Ма 2 ЯОд и концентрируется.Остаток растворяется в эфире и путем фильтрации отделяется от нерастворимого исходного материала. Таким образом получается указанное в заголовке соединение ввиде бесцветного масла.ЯЩ 0,2 (ЕЕ/СНЗОН 10:1),д) З-Вос-циклогексилметил,2-диметил-(2-бромэтил)-оксазолидин,К 690 мг 3-ВосЯ-циклогексилметил 2,2-диметил-(2- гидроксиэтил)-оксазолидина,.2;6 г трифенилфосфина и 1,6 гпиридинбромида в 15 мл СН 2 С 2 каплямипри температуре 20 С в присутствии аргонадобавляется 1,6 мл диэтилового эфира азодикарбоновой кислоты, После выдержки втечение 16 ч при комнатной температуредобавляется вода и раствор разбавляется100 мл СН 2 С 2 Органическая фаза дваждыпромывается насыщенным растворомМаНСОз и один раз раствором йаС 1. Высушенная с помощью Ма 2 Я 04 органическаяфаза концентрируется, остаток растворяется в небольшом количестве ЕЕ и фильтруется для отделения РРЬз. Очищение населикагеле дает указанное в заголовке соединение (1 Мб).ЯЩ 0,3 (3 Мб); МЯ 404 (М+1).1) З-ВОСЯ-циклогексилметил,2-диметил-(2-гидроксиэтил) -оксазолидин.10 г В ОС-АСН РА-ОС 2 Н 5 в 500 мг р-толуолсульфокислоты и 7,2 мл диметоксипропана нагреваются в 160 мл толуола вприсутствии аргона в течение 2 ч 80 С. Затем раствор концентрируется, Остаток при0 С добавляется каплями к суспензии из 2 гОА 1 Н 4 в 200 мл ТНЕ. После выдержки втечение 2,5 ч при 0 С добавляется 100 мл5%-ного раствора МаНЯ 04 и раствор экстрагируется трижды с помощью ЕЕ. Очищенные .органические фазы промываютсянасыщеннь 1 м раствором йаНСОз. После высушивания с помощью Иа 204 раствор концентрируется и хроматографируется спомощью селикагеля (ОМ 6).ВЩ 0,1 (3 Мб); МЯ (ОС) 342 (М+1).П р и м е р 26. Цис-АСС-РЬе-Н з-(1 Я-циклогексилметил -2 Я-гидрокси(й-пропилимидазолил-пентиламид,Указанное в заголовке соединение былополучено в соответствии с описанным в п римере 18 способом из описанного в примере25 соединения.МЯ (ЕАВ) 717 (М+1).Приведены биологические испытаниясоединений по изобретению,1. Принцип испытания,Плазма человека, которая содержит какренин, так и ангиотензиноген, например,инкубируется при 37 С с помощью испытываемого соединения. При этом из ангиотензиногена под воздействием ренинавысвобождается внгиотензин 1. который за 1836382 16Концентрации испытываемых препаратов выбираются таким образом, что перекрыт примерно диапазон подавления фермента в 10-90 ф(по меньшей мере пять концентраций), В конце времени инкубации из каждой исходной смеси три пробы по 100 мкл в предварительно охлажденных сосудах Эппендорфа замораживаются на сухом 55 тем может быть измерен с помощью стандартного радиоиммуноанализа, Это высвобождение.ангистензина затормаживается с помощью ингибиторов ренина.2. Получение плазмы. 5 Кровь получается от добровольцев (около 0,5 л на каждое лицо, прибор для взятия крови фирмы "Азид Банц унд Зон", Унтершлайсгейм) и собирается при охлаждении на льду в бутылки, в кот 0 рых частично создано 10 разрежение. Свертывание предотвращается путем добавления этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЕОТА) (конечная . концентрация 10 миллимолей), После центрифугирования (ротор Н 34 (Сорвалл), 3500 15 об/мин, 0-4 С, 15 мин; при необходимости повторяется) плазма осторожно отбирается пипеткой и замораживается соответствующими порциями при температуре -300 С. Для испытания используются только плаз мы с достаточно высокой активностью ренина, Плазмы с низкой активностью ренина активизируются путем обработки холодом (температура -4 С в течение 3 дней) проренин превращается в ренин). 253, Проведение испытания.Ангиотензин 1 определяется с помощью ренин-маиа -кит(Яепопо Оа 9 позтсз З.А., Швеция), Инкубация плазмы проводится в соответствии с укаэанной там инструк цией:Инкубационный состав; 1000 мкл плазмы (разморожена при 0-4 С), 100 мкл фосфатного буфера (рН 7,4), добавка 10 4 моль рамиприлата), 10 мкл раствора РМ, 10 мкл 35 0,16 генапола РЯС, 10 мкм диметилсульфоксида или испытываемого препарата.Испытываемые препараты с концентрацией 10 моль в 100 диметилсульфоксида и соответственно разбавляются диметил сульфоксидом, инкубационная. исходная смесь содержит максимум 1 диметил сульфоксида.Исходные смеси смешиваются в присутствии льда и помещаются для инкубации на 1 ч в водяную ванну (37 С). Иэ дополни тельной исходной смеси без ингибитора отбирается без дальнейшей инкубации всего 6 проб (соответственно по 100 мкл) для определения исходного содержания ангиотензина 1 использованной плазмы, 50 льду и хранятся при температуре около С для определения ангиотензина 1 (среднее значение из трех отдельнцх проб).Торможение очищенного почечного ренина человека.Ангиотензин 1 применяется в следующей опытной смеси: 3,75 мкм ренин-субстрата, Азр-Аг 9-Ча-Туг-Зе-Нз-Рго-РЬе-Нз - ео-Чайе-Нз-Азп (Бахем АГ, Бубендорф, Швейцария), 0,24 мг альбумина бычьей сыворотки(сигма М А), 1,.6 мм ЭДТА,0,09 М фосфатного буфера, значение рН 7,5, 1 мм фенилметилсульфонилфторида, Генаполь (й) РР 10 (в качестве детергента; Кальбиохем ГмбХ, франкфурт, Германия) и почечный ренин человека, достаточный для получения около,3-5 нг ангиотензина 1 млч,Общий объем теста составляет 1,2 мл. Тест-соединения вводятся как растворы в диметилсульфоксиде (1конечная концентрация), Смешивание происходит при 0 С, детергент удаляется и 2 ч инкубируется при 37 С. После 40(80/120 мин берутся пробы 250 мкл и посредством нагрева выдерживаются при 96 С в течение 2 мин.Результаты испытания сведены в таблице.Проведенные испытания показали, что соединения, полученные описываемым способом малотоксичны и обладают более высокой ренин-ингибирующейактивностью.Ф о р мул а из об рете н и я Способ получения производных дипептидов общей формулыЙр Он йР.1-Ю-А-В-МН-СН-СН-СН-К где Й 1 - (С 4-Сз)-циклоалкил, причем циклоалкильнцй заместитель может быть аминоил и (С 1-С 4)-алкоксикарбониламинозамещенным;Ю - -СО-;В 2 (С 4 Ст)-циклоалкил (С 1 С 4)алкил;Яз - водород или гидрокси;84 - остаток общей формулыСН 2 СН 2 - Огде О - 2-, 3- или 4-пиридиновцй или 2-,4-имидазольнцй остаток, которые могутбыть замещены (С 1 - С 4)-ал килом,Аи В независимодруготдруга-связанный й-концом с 81 или А, или С-концом.с В,или с йН-СНВ 2-СНОН-СНйэрадикаламинокислоты из ряда: фенилаланин, гистидин, тирозин, лейцин, изолейцин, валин,аланин, (м)-метилгистидин; о-метилтирозин, о-третбутилтирозин, норвалин, норлейцин или фармацевтический приемнемцхсолей, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что1836382 17 Реннин-ингибирующая активность описываемых соединений ставитель О. Волковхред М.Моргентал ектор М,Мэксими шине ктор каз 3006 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 енно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 зв подвергают взаимодействию кислоту ВЮАОН или ее реакцонноспособное производное с Н 28 - В - ЙН СН(В 2) - СН(ОН) СН(йз)й, при необходимости, с последующим отщеплением временно введенных защитныхгрупп и выделением целевого продукта всвободном виде или в виде фармацевтически приемлемых солей,