Штамм 50311а-продуцент о-дифенолоксидазы

Реслублик К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ависимое от видетельстс присо 1 нснием явкисударственный комитет вета Министров СССР(088,) ллетень Ъ 3 15,09.74. о делам изоорет и открытий Дата опубликования описания 02.06.7(54) ШТАММ РЕХ 1 С 11.1.11.1 М АРАМЕТХ 1 1.А 1. 50311 ПРОДУЦЕНТ о-ДИФ ЕНОЛОКСИДАЗЪ 25 5,0 2,5 1,5 0,5 0,01 СульфатныйМН 4 КОзКНзРО 4Мд 804 7 Н,Ге 504 7 Н,О игпи шь 30 Изобретение относится к микробиологической промьннлецности и касается получения нового штамма Реп 1 с 1111 цгп аг 1 агпс 1 кп 1 а 1 50311 а, используемого для получения ферментаа о-дифеннлоксндазы.Предлагаемый штамм может быть использован при очистке сточных вод от лигнина и его производных, для получения мономеров лигнина, например ванилиновой, п-оксибензойной, сиреневой и других ароматических 1 кислот и мономеров.Известен штамм Реп 1 с 111 цгп айатпе 1 гй 1.а 1 50311.Предлагаемый штамм получен из штамма Реп 1 с 1111 цгп адагпеЫ 1 1.а 1 50311 многоэтап ной адаптацией к трудноусвояемому сульфат- ному лигнину осицы и имеет следующую характеристику.Морфология. Органическая среда. Сусло- агар. Мицелий бесцветный, дерновинки зеле ные, колонии снизу сине-зеленые с белыми краями шириной 1 - 2 мм. Для выращивания используется следующая жидкая лигнинсодержащая среда, г/л; Конидиеносцы бесцветные, одномутовчатые, размером 40 - :100 К 2,5 - :3,0 мкм, стеригмы размером 82,5 - 2,7 мкм, сближенные но 5 - 7 в мутовке. Конидии шиповндные, круглые, в диаметре 2,5 - 3,0 мкм. Оболочка н ши. цы темно-коричневого цвета.Биохиличесние свойства. Штамм гндролизует до 100% сульфатный лигннн осины на 60 сутки роста до ароматических кислот, спиртов, фенолов (например, ванцлнновый, и-оксибензойцый, сиреневьш, ванилицового спирта и фенола в зависимости от суток роста). Распад липшна осуществляется на 3 - 5 сутки.Отношение к источнику углерода, При росте на среде Чапека, содержащей в качестве псточшгка углерода сульфатную целлюлозу осины, целлюлоза це разлагалась,В дальнейшем изобретение поясняется примером получения лигнинразрушаюшего фермента о-дцфенолокспдазы при поверхностном способе культивирования продуцента-микромицета Реп 1 с 1111 цгп ас 1 атпс 1 гй 1.а 1 50311 а. С 5-ти суточной культуры Решс 111 штп ас 1 агпе 1- к 11 1.а 1 50311 а, выращенной на сусло-агаре, производят смыв спор стерильной, водопроводной водой. Полученной споровой суспензией производят засев матрацов, содержащих по 200 - 250 мл липцнсодержащей среды. Матрацы термостатиручот прн 27-+2 С в тсСоставитель М, ЛаринаТехред Н. Куклина Корректор Л. Денисова Редактор 8. Блохина Заказ 1428/18 Изд.1271 Тираж 506 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, )К, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 чение 8 - 10 суток. Ферментный препарат получают отделением мицелия гриба от культу- ральной жидкости на фильтре. Концентрируют фильтрат на вакуум-выпарной установке или (вакуум-сушильном шкафу) до 1/10 пер воночального объема. В концентрированной культуральной жидкости определяют активность о-дифенолоксидазы по окислению и-крезола колориметрическим методом на ФЭКМ, 10Активность определяют следующим образом. К 1 мл культуральной жидкости прибавляют 0,5 мл 0,1 М раствора п-крезола, 2,5 мл 15 фосфатноцитратного буфера при рН 6,0. Через 1 час производят колориметрирование. Расчет содержания фермента производят по формуле где с, - искомая концентрация окисленногофенола и соответственно активность, мг/мл;Е., - оптическая плотность исследуемогораствора;Е, - оптическая плотность используемого фенола; 30с, - концентрация используемого субстрата, мг/мл,Активность о-дифенолоксидазы, продуцируемой Репс 111 шгп ас 1 агпе 1 г 11 1.а 1 50311 а - 0,05 - 0,1 мг/мл,Предмет изобретенияШтамм Реп 1 с 111 шгп ас 1 агпе 1 г 11 1.а 1 50311 а - продуцент о-дифенолоксидазы.Морфология. Органическая среда. Сусло- агар. Мицелий бесцветный, дерновинки зеленые. Колонии снизу сине-зеленые с белыми краями шириною 1 - 2 мм. На жидкой среде, содержащей, г/л:Сульфатный лигнин осины 5,0 14 Н 4 ИОЗ 2,5 КН 2 РО 4 1,5 Мд 804 7 НО 0,5 РеЯО 4 7 НзО 0,01 конидиеносцы одномутовчатые размером 40 - :100)(2,5 - 3,0 мкм, стеригмы размером 8)(2,5 - 2,7 мкм, сближенные по 5 - 7 в мутовке. Конидии шиповидные, круглые, в диаметре 2,5 - 3,0 мкм. Оболочка и шипы темно-коричневого цвета.Биохимические свойства. Штамм гидролизует до 100% сульфатный лигнин осины на 60 сутки роста до ароматических кислот, спиртов и фенолов.Распад лигнина осуществляет с 3 - 5 суток.Отношение к источнику углерода. При росте на среде Чапека, содержащей в качестве источника углерода сульфатную целлюлозу осипы, целлюлозу не усваивает.