Способ определения мочевой кислоты

(22) Заявлено 28.09.72 (21) 1831974/30-15 м заявки Ло рисоеднцен Государственный комитеСовета Министров СССРоо делам иэооретениФи открытий 32) Приоритетпубликовано 25.07.74. Бюллстсш, Ъо 2ата опубликования описания 30,12.74(71) Заявитель Всесоюзный научно-исследовательский институт физиологии, биохимиии питания сельскохозяйственных животных 54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МОЧЕВОЙ КИСЛОТЫ Изобретение относится к технике анализа азотистых веществ в экскретах животных.Известен способ определения мочевой кислоты в крови и моче млекопитающих, включа 1 ощий осаждение мочевой кислоты и ее слой в горячем растворе уксусно-кислой ртути, центрифугирование смеси, промывку осадка уратов ртути путем ресуспендирования в растворе уксусно-кислой ртути, повторное цснтрифугирование, растворение осадка уратов ртути в растворе хлористого натрия в хлорной кислоте и собственно определение мочевой кислоты путем измерения оптической плотности полученного раствора.Предложенный способ отличается тем, что, с целью определения мочевой кислоты в помете птиц, ее извлекают из помета литиевым щелочно-солевым реагентом, отделяют нерастворимые вещества помета путем центрифугирования перед осаждением мочевой кислоты и ее солей в горячем растворе уксусцо-кислоц ртути. Собственно определение мочевой кислоты производят путем определения азота мочевой кислоты цо методу Кьельдаля.Высокая плотность щелочно-солевого реаента (1,11 г/ему) не мешает отделению нера- :творимых веществ помета путем центрифугирования перед осаждением мочевой кислоты и ее солей в горячем растворе уксусно-кислой ртути, однако оца одновременно уменьшает возможность осаждения конгломератов мочевой .кислоты, суспендированных в недос Гаточноц жидкости, т. е. отделение нерастворимых веществ центрифугированием произ водится в градиенте плотности литиевого щелочно-солевого рсагента. Это позволяет полностью извлечь мочевую кислоту из помета, сократить время и снизить температуру тепловоц обработки при растворении мочевой 10 кислоты в литиевом щелочно-солевом реагснте и, тем самым, уменьшить вероятность ее разрушения или образования цз различцы; цуринов помета.Метод обеспечивает высокцц выход мочсвой 15 кислоты, добавленной к помету цыплят, дажепрц трехкратном цревьппении обычного ес содержания в помете птиц.Для проведения анализа необходимы следующие реактивы: литиевый щелочно-солевой 20 рсагспт - раствор 1,5 и. сернокислого литияь 1,5 н. натрисвой щелочи (60 г цатриевой щелочи и 82,5 ссрцокислого лития растворяют в 1000 мл дистиллированной воды); 0,1 М раствор уксусно-кислой ртути (двухвалсцтцой) 25 в 5%-ной уксусной кислоте; 0,01 М растворуксусно-кислой ртути в 1 %-цой уксусцой кислоте; концентрированная серная кислота.В 10-мл стеклянные центрифужцые пробирки помещают по 3 г тщательно псремешанцо го помета и добавляют 6 мл литиевого щелочК промытому осадку уратов ртути добавляют 1 мл копя нгрированной серной кислоты и осадок количественно переносят в колбу Кьсльдаля, для чего проби 1)ки дважды про мывают, каждый раз вливая в них по 1 млконцентрированной серной кислоты.Использовать большее количество сернойкислоты нежелательно вследствие возникающих неудобств при последующей нейтрализа ции ес в аппарате Кьельдаля,Дальнейшие операции по определению азота мочевой кислоты производят по методу полмикрокьельдаля, используя для отгонки половину или весь минерализат. Расчеты азо а мочевой кислоты в помете производят общепринятым способом с учетом взятой навсски, внесенного консерванта при сборе помета и дрч их показателей.Для вычисления содержания мочевой кис лоты в помете количественные показателиазота учножают на коэффициент 3. Способ определения мочевой кислоты,включающий се осаждение в горячем растворе уксусно-кислой ртути, центрифугирование раствора, ресуспендирование осадка в раство ре уксусно-кислой ртути, повторное центрифугировапис и собственно определение мочевой кислоты, например по методу получикрокъельдаля, отличающийся тем, что, с целью определения мочевой кислоты в помете 35 птиц, сс извлекают из помета литиевым щелочно-солевым реагентом, имеющим плотность 1,10 - 1,12 г/смз, и отделяют нерастворимые вещества цептрифугированисм при ускорении не менее 2000 р, после чего проводят собствен но определение мочевой кислоты. Составители Л. ЛеоновТехред 3. Тараненко Корректор В. Кочкарева Редактор Л. Народиаи Заказ 845514 Изд. Ло 87 1.11 ИИПИ Госулдр( гпсипого комитета по аслаки изобретений и 1 осквдК.85, РачискааГииогрдфии, ир Сдиуиоид. 2 но-соленого реагента. Пробирки выдерживают в течение 40 мин в водяной бане прн 66 С, содержимое периодически помешиваю г с:склянной палочкой. Затсч пробирки охлаждают под струей холодной воды и цснтрифугируют 20 мнн при 3000 об/мин (2000 ст). Полученный надосадок проз 1 эачнып, слегка жсл-,оватого цвета,Использование литиевого щелочно-солсвого реагента большей концентрации приводит к недостаточному осаждению белков и других азотсодержащих сопутствующих веществ изза высокой плотности счеси, а применение литиевого щелочно-солевого реагснта меньшей концентрации ухудшает растворимость мочевой кислоты и ее солей.В 10-мл стсклянныс цеигрифужныс пробирки с 8 мл 0,1 Ч уксусно-кислой ртути в 5%-ной уксусной кислоте, находящиеся в слабо кипящей водяной баис, дооавляют медленно по каплям 1 мл полученного надосадка и продолжают нагревать на кипящей водяной бане сщс 1 О мин, растирая стеклянной палочкой выпавшие в осадок хлопья уратов ртути. Это позволяет перевести в раствор сопутствующие вещеса. Затем п 1 зобирки охлаждают под струей холодной воды и центрифугируют О мин при 1500 об/мин (1000 д). Надосадок осторожно декаптируют, пробирки ставят вверх дном на фильтровальную бумагу. Полученный осадок дважды промывают раствоРом 0,01 М УксУсно-кислой РтУти в 1 с/о-ной уксусной кислоте, каждый раз ресуспендируя его и растирая стеклянной палочкой перед центрифугированисм при 1500 об/мип в течение 10 мин и удаляя надосадочную гжидкость описанным способом.При большом количестве оборотов и времени центр ифугирования частично могут осаждаться и сопутствующие вещества. Прсдмст изобретения Тираж 482 ПодписпоеСовета Министров СССРоткрвггийиаб., д. 4 5