423304

(и) 423304 ОПИСАНИЕИЗОБР ЕТЕ Н ИЯК ПАТЕНТУ Союз Советсва Социалистицесюа Республик(61) Зависимый от патент М, Кл, С 07 д 15/00 А 61 К 17/00(33) ЯпонияОпубликовано 05.04.74. Бюллетень1 осударственный квинтетСоватв Министров СССРоо делаи изобретенийи открытий 615.45; 612,43(53) У а опубликования описания 29.11.74 Авторыизобретен Иностра Дзинносук атанабе и(Япония ностранная зозо Комп(Япония нцы е Абе, Масар о Хигас Сусуми уо Такетани И Тойо Д(54) СПОСОБ ЙОЛУЧЕНТЯПОЛИПЕПТТДОВ, ОБЛАДАЮЩИХ СВОЙСТВПОНИЖАТЬ СОДЕРЖАНИЕ КАЛЬЦИЯ В КРО Изобретение относится к медицине и касается способа получения полипептидов, обладающих свойством понижать содержание кальция в крови.Известны способы получения полипептидов, обладающих свойством понижать содержание кальция в крови, из животного сырья, например щитовидной и паращитовиднойжелез млекопитающих, путем обработки смесью гидрофильного органического растворителя и воды, экстракции смесью соляной кислоты, мочевины и цисгина, добавления водного раствора хлористого натрия и ацетона с последующей очисткой и высушиванием.Целью изобретения является расширение сырьевой базы для получения полипептидов, обладающих свойством понижать содержание кальция в крови.По предлагаемому способу в качестве исходного сырья используют перикардиальную мембрану и(или) ткань, включающую полую вену, примыкающую к пищеводу угрей.П р и м е р 1. 120 г перикардиальной мембраны, полученной удалением миокардных тканей из сердца примерно 1000 угрей, обезвоживают трехкратной обработкой (по 5 час при 5 С порциями по 1 л ацетона, содержащего 20 мг этилендиаминтетрауксусной кислоты.Обезвоженный продукт обезжиривают двукратной обработкой (по 2 час при 5 С) порциями по 0,8 л хлороформа. Затем 5 еще 3 раза повторяют операцию обезвоживания и после высушивания получают 36 г препарата.36 г получаемого таким способом препаратаэкстрагируют обработкой в течение 3 час при 10 комнатной температуре 1 л 0,2 н. солянойкислоты, содержащей 500 г мочевины и 18 г цисгина, Выпавший осадок отделяют центрифугированием (15 мин при 9000 об/мин), промывают 0,5 л экстрагента, присоединяя по следний к основному экстракту, Полученныйраствор вновь центрифугируют и вливают в 250 мл 45 Ъ-ной трихлоруксусной кислоты.Выделившийся осадок отделяют центрифугированием, Очищенный раствор лиофильно вы "ушивают и получают 450 мг (1,8 ед/мг) неочищенного гор моноподоб ного вещества.400 мг неочищенного препарата обрабатывают при перемешивании в течение 2 час 80 мл смеси бутанола, уксусной кислоты и воды 25 (12: 3: 5). Верхнии слой жидкости отделяют,очищают центрифугированием и добавляют 24 мл бутанола, 28 мл воды и 3 мл пиридина,Заказ 2451/14 Изд, Мз 708 Тираж 506 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж-З 5, Раушская наб., д, 45Типография, и р. Сапунова, 2 Смесь перемешивают, отделяют верхний слой бутанольный, а нижний еще 4 раза экстрагируют смесью бутанола, уксусной кислоты, воды и пиридина (6: 1: 9: 0,25), Объединенный экстракт упаривают под вакуумом, остаток обрабатывают эфиром и растворяют в 4 мл 0,2 М раствором ацетата аммония (рН 4,7), Раствор пропускают через колонку (2 р, К 80 см), заполненную сефадексом, и элюируют 0,2 М раствором ацетата аммония со скоростью 12 мл/час, Элюат собирают фракциями по 4 мл, причем активный препарат содержится во фракциях с 63 по 82. Эти фракции собирают, концентрируют под вакуумом и лиофильно высушивают. Получают 2,1 мг активного препарата (24 ед/мг).П р и м е р 2, Ткани, включающие полую вену, прилегающую к пищеводу, и перикардиальную мембрану, собранные примерно у 3000 угрей, подвергают обезвоживанию и обезжириванию, как это описано в примере 1, и получают 255 г, сухого вещества. 225 г этого вещества экстрагируют,при перемешивании в течение 2 час при комнатной температуре 2 л 0,2 н. соляной кислоты, содержащей 960 г мочевины и 35 г цистина, Экстракт вливают в 4 л смеси ацетона и уксусной кислоты (1: 1), а затем в смесь, содержащую 56 мл 1 М раствора хлористого натрия и 6 л ацетона, и центрифугируют 15 мин, при 9000 об/мин. Освобожденный от примесей раствор вливают в 1 О л эфира, не содержащего перекисных сое динений, перемешивают, отделяют выпавшийпрепарат центрифугированием. После лиофильного высушивания получают 17,8 г препарата (1 ед/мг), который подвергают очистке, как в примере 1,10 Угорь, используемый в качестве исходногосырья, предварительно выращивался в течение 10 - 17 суток в морской или аналогичной соленой воде. 15Предмет изобретенияСпособ получения полипептидов, обладающих свойством понижать содержание кальция в крови, из животного сырья путем обработки смесью гидрофильного органического 20 растворителя и воды, экстракции смесью соляной кислоты, мочевины и цистина, добавления водного раствора хлористого натрия и ацетона с последующей очисткой и высушиванием, отличающийся тем, что, с целью 25 расширения сырьевой базы, обработке подвергают перекардиальную мембрану и(или) ткань, включающую полую вену, примыкающу к пищеводу угрей.