Способ получения антибиотика

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК ПАТЕНТУ Союз Советских Социалистических РеспубликЗаявлено 06,Ч 1.1970 ( 1469116/31-16)Приоритет 06.ЧП 1,1969, 847923, СШАОпубликовано 07.1,1972, Бюллетень9 М. Кл. С 120 9/14 Комитет па делам изобретений и открытий ври Совете МинистровУДК 615.779.931(088.8 ия 28.1 Ч.1972 Авторыизобретени Иностранцы рвин Мартин Хоен диненные Штаты А Иностранная фир ли Лилли энд Ком диненные Штаты берт Л, Хамилл, Ми Калвин Юджин Хиггерики) Заявитель ма паниАмерики) 3Со СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА ОСН,Н.сн -о-с-с3О соон нг о 11 н (Снг 13- с 5 со Зависимый от патентаДата опубликования опис Изобретение относится к медицине, точнепроизводству антибиотиков В изобретении предлагается способ получения антибиотика из штамма ККК 1. 3584, ко О торый выращивают в питательной среде, содержащей источники азота, углерода и минеральные соли в аэробных условиях при 25 - 37"С в течение 36 - 72 час, и выделяют целевой продукт из культуральной жидкости из вестными приемами.Предлагаемый антибиотик проявляет антибактериальную активность против грамм - положительных и грамм - отрицательных организмов, а также против патогенных орга О низмов растений. Антибиотик обладает и антигельминтовой активностью.П р и м е р 1. Спорулированную культуру ККК 1 3584 выращивают на среде, содержащей (в %): декстрина 1, хлопковой муки 1, 25 экстракта дрожжей 0,1, агар-агара 2,6 при рН 7 в течение 7 дней при 30 С. Затем со среды снимают споры и прибавляют к ним 2 лл стерильной бычьей сыворотки, По 0,1 мл. полученной суспензии переносят в пробирки и лиофилизируют, Готовые таблетки используют для инокулирования растительной среды, содержащей (в %): глюкозы 0,5, декстрина 1, лакто-триптона 0,5, экстракта дрожжей 0,5, кристаллического сульфата магния д,2.П р и м е р 2, В ферментер емкостью 40 л помещают 24 л среды, содержащей 0,2 г антипепообразователя, 5 г глюкозы, 50 г декстрина, 25 г соевых обрезков, 3 г паточной мелассы, 0,25 г двузамещенного фосфорнокислого калия и 2,5 г карбоната кальция. Среду стерилпзуют Зо,ции при 120 С, охлаждают и инокулпруют 5% -ным привпвочным материалом, полученным, как в примере 1. Фермептацшо ведут 66 час прп 60 С и аэрации стерильным воздухом (0,35 об/лшн). Перемешиванпе осуществляется механической мешалкой, 60 л культуральной жидкости, полученной описанным методом, фильтруют через диатомитовую землю и пропускают через колонку с активированным углем (высота 150 с,п, диаметр 9,6 см). Колонку промывают водой до получения на выходе бесцветной жидкости и элюируют антибиотик 50%-ным ацетоном. Фракции, содержащие активное вещество, объединяют, упаривают в вакууме и331565 Составитель В. ТаратутаТс; рсд Л, богданова Редактор Д. Пинчук Корректор 3, Тарасова Заказ 15733 Изд. М 355 Тираж 448 ПодписноеЦИИИПИ Комитета по дслаги изобретений и открытии при Совете Мииисгров СССР Москва, Ж, Раушская иаб., д. 4,5 Типография, пр. Сапунова, 2 переносят на колонку с анионитом 1 КА - 68 в формиатной форме. После промывания водой элюируют антибиотик 0,1 моль раствора формиата аммония, Активные фракции объединяют, упаривают в вакууме и лиофилизируют, Получают 25 - 30 г твердого препарата.А. Высушенный препарат растворяют в минимальном количестве воды и вносят в колонку с микрокристаллической целлюлозой (7,2 К 60 см), суспендированной в 70%-ном водном ацетонитриле, После внесения пробы колонку промывают ацетонитрилом, а затем элюируют метанолом, Активные фракции объединяют, упаривают до 200 мл и осаждают антибиотик добавлением 2 л ацетона. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном и сушат в вакууме. Получают 9 - 12 г препарата,Б. 20 г вещества, получение которого описано выше, растворяют в минимальном количестве воды и вносят в колонку с силикагелем (7,2 Х 60 см). Силикагель предварительно промывают водой, метанолом и суспендируют в 70%-ном ацетонитриле. После внесения вещества в колонку ее промывают однократным количеством ацетонитрила и элюируют антибиотик 70% -пым ацетонитрилом. Активные фракции объединяют, упаривают досуха в вакууме, растворяют остаток в метаноле и осаждают антибиотик 10 объемами ацетона, Выпавший осадок отфильтровывают, промывают ацетоном и сушат в вакууме. Выход 8 г препарата, из менее активных фракций дополнительно выделяют еще 6 г,5 В, Для очистки моноаммониевой соли антибиотика 1 г высушенного вымораживанием препарата, получение которого описано выше, растворяют в 4 мл воды и вносят в колонку (2 Х 60 см) со 175 мл взвеси силика геляв 80% -ном водном ацетонитриле.Элюирование проводят смесью ацетонитрила с водой (4:1), контролируя процесс методом бумажной хроматографии. Фракции, содержащие соль антибиотика, объединяют, 15 упаривают досуха, растворяют в небольшомколичестве диметилсульфоксида, а затем эта.иола и осаждают активное вещество добавлением избытка эфира. Осадок отделяют центрифугированием и сушат в вакууме. Получают 20 91 мг моноаммониевой соли антибиотика. Предмет изобретенияСпособ получения антибиотика, отличагощийся тем, что штамм ККК 1. 3584 выращи вают в питательной среде, содержащей источники азота, углерода и минеральные соли в аэробных условиях при 25 - 37 С в течение 36 - 72 час и выделяют целевой продукт из культуральной жидкости известными прие мами.