413654
Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Номер патента: 413654
Текст
413654 ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК ПАТЕНТУдюз С 86 тских Социалистических Респубяик,1964 ( 899278/31-16) 611 с 21/0007 д 11/00124 9/14 влено 0 оритет Гасударственный комитет Совета Министров СССЯ оа делам иеобретений и огкрытнйУДК 615.779.931(088,8) Опубликовано 30.1.1974. Бюллетень4Дата опубликования описания 17 Х 1.97 Авторыизобретен Иностранцы аеда Кензди Окамиио и Такеучи ава Хамао,аявител Иностранная фирма Исследовательский институт микробиоло промышленностиимичес ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БЛЕОМИЦИ Блеомицстепени актерий.Приме30 л, содерзасевают к Изобретение относится к медицине, в частности к производству антибиотиков.Предложенный способ получения блеомицина, не описанный ранее в патентной литературе, заключается в том, что культуру 5 Ягер 1 огпусез чегЫс 111 цз АТСС 15003 выращивают в аэробных условиях на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, при температуре 25 - 35 С в течение 7 - 10 дней, целевой продукт выделяют из филь трата культуральной жидкости сорбцией на ионообменной смоле, водный элюат, имеющий рН - 6,0 - 7,0, концентрируют или упаривают досуха под вакуумом, промывают органическим растворителем, например ацетоном, 15 осаждают блеомицин из водного или метанольного раствора органическим растворителем, например этанолом, и водный раствор разделяют хроматографией на колонке сефадекса 6-35 на блеомицин А и блеомицин В. 20Блеомицин обладает противоопухолевой активностью и активен в отношении ряда грамм- положительных и грамм-отрицательных бактеО н А и блеомицин В в различной 2ивны в отношении различных бак 1, Два ферментера объемом посащих по 10 л питательной среды,льтурой 51 гер 1 огпусез чег 11 с 111 цз ЗО 2АТСС 15003 (в количестве 600 см), выращенной на той же среде в течение 2 суток.Среда имеет следующий состав (%):Соевая мука 3,5 Крахмал 2,5 Глюкоза 0,5 ХаС 1 0,3 КгНРО 4 0,1 Сульфат цинка 0,05Сульфат меди 0,01Исходное рН 7,0ферментацию проводят при 27 - 29 С, аэрации 10 л/мин и перемешивании со скоростью 500 об/мин. До начала ферментации в среду добавляют в качестве антивспенивающего вещества 0,0033% силиконового масла, а затем еще 50 см соевого масла в процессе фермента ции.Каждый день из ферментера берут пробы, в которых определяют рН и содержание блеомицина.После 10-суточной ферментации культуральную жидкость из ферментеров охлаждают, рН доводят до 4,6 соляной кислотой. Мицелий отфуговывают на холоду, надосадочную жидкость фильтруют. Полученный фильтрат, содержащий 358,5 мг блеомицина, пропускают через колонку диаметром 5,5 см, содержащую 1750 смз Амберлита 1 КС. После промывки колонки дистиллированной водой производят413654 Предмет изобретения Составитель С, ЩеневаТекред 3, Тараненко Корректоры; А, Николаеваи Л. Корогод Редактор Н. Спиридонова Заказ 66;20 Изд, М 122 Тираж 482 ПодписноеЦНИИПИ Государстве 1 и 1 ого комитета Совета Министров СССРпо делам изобретений и открытийМосква, Ж, Раушская наб., д. 4,5 Типография, пр Сапунова, д. 2 десорбцию 0,2 и. НС 1. Фракции с 3 по 6 соединяют вместе, нейтрализуют Амберлитом 1 КВ (ОН-типа), концентрируют под вакуумом и экстрагируют 150 см метанола. Нерастворившаяся в метаноле часть (11,59 г) содержит 57,5 мг блеомицина с активностью 4,98 мкг/мг. Метанольный раствор перегоняют, высушивают до порошка, экстрагируют 100 см этилового спирта. Нерастворившийся порошок (4,038 г), содержащий 293 мг блеомицина с активностью 72,5 мкг/мг растворяют в дистиллированной воде, обрабатывают на колонке сефадекса Сзи фракционируют до 5 смз. Фракции, содержащие блеомицин, хроматографируют па бумаге Тойо51 и проявляют 10% -ным хлористым аммонием восходящим методом, Биоавтограф на хроматографической бумаге испытывают против МусоЬас 1 епшп р 11 ее 1. Наиболее активными являются фракции16 - 23 с большой зоной подавления роста при К 1 0,94 - 0,88 (блеомицин А) и фракции24 - 29 при И 0,70 - 0,66 (блеомицин В),П р и м е р 2, Фракция 24 хроматографии на сефадексе 6-25 в примере 1 дает 244,6 мг блеомициа - порошка, содержащего 76 мг блеомиципа (310 мкгмг). Этот порошок растворяют в 20 см метанола в подогретом состоянии. После охлаждения нерастворимый порошок весом 35,5 мг, содержащий 1,48 мг блеомицина (42 мкг/мг), отфильтровывают и к метанольпому раствору добавляют 20 смз этилового спирта, что приводит к осаждению мелкого порошка. Этот порошок весом 46,9 мг, содержащий 1,87 мг блеомпцппа (39,8 мкг 7 вг), отделяют фильтрованием. При добавлении к фильтрату еще 70 см этилового спирта осадоке выделяется. Этот раствор перегоняют под вакуумом, после чего выпадает бесцветный осадок блеомицпна. После упарива ия до 20 см, выдержки при (О) - ( - 5)С в течепие 6 час, фильтрования и сушки из него по- лучаот 95 мг синеватого порошка. Этот порошок разлагается при 192 - 196 С и содержит 742,5 мкг солянокислого блеомицина на 1 мг.5 Элементарный анализ этого порошка солянокислого биомицина дает следующие результаты (% ): С - 42,43; Н - 6,72; Х - 14,57; О - 22,99,- 2,22; С 1 - 10,06; Сц - 0,81 (зола пересчитывается на медь). По данным бумаж ной хроматографии с хлористым аммонием вэтом порошке содержится в основном блеомпцин В.С другой стороны, 100 мг фракции22(содержащей 27,5 мг блеомицина, 275 мкг(мг) 15 обрабатывают таким же образом и получают27,9 мг очищенного белого порошка. Элемен.тарный анализ этого порошка солянокислого блеомицина дает следующие результаты (%): С - 44,60; Н - 7,33; Х - 15,61; О - 23,09; 8 - 20 2,55; С 1 - 7,39; Сц - 0,15. Способ получения блеомицина, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что культуру Ягер 1 огпусевчег 11 с 111 цз АТСС 15003 выращивают в аэробных условиях на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли при температуре 25 - 35 С в течение 7 - 10 дней, 30 целевой продукт выделяют из фильтрата культуральной жидкости сорбцией на ионообменной смоле, водный элюат, имеющий рН 6,0 - 7,0, концентрируют или упаривают досуха под вакуумом, промывают органическим раствори телем, например ацетоном, осаждают блеомицин из водного или метанольного раствора органическим растворителем, например этаполом, и водный раствор разделяют хроматографией па колонке сефадекса Сзна блеоми цин А и блеомицин В.
СмотретьЗаявка
899278, 09.05.1964
МПК / Метки
МПК: C12P 19/58
Метки: 413654
Опубликовано: 30.01.1974
Код ссылки
<a href="https://patents.su/2-413654-413654.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">413654</a>
Предыдущий патент: 413653
Следующий патент: 413655
Случайный патент: Устройство для формирования порций стеблей лубяных культур