323010

ОПИСАН И ЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 3230 Ю Союз Советскиз Социелистическиз РеспубливсвидетельстваЗависимое от ав Заявлено 20.1.19 с присоединением 1. Кл. С 0719 1299621/23-4) явкииорите Комитет по делом изобретении и открыти при Совете Министров СССР, Гордеева и В. К. Дедо аявите ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АДЕНОЗИН"-Н-МОНОФОСФАТА известными прсть его окол ожность по- фиксированнии пуриноки представ- биохимиче- нуклеиновых на том, что зин фосфо- Образую-монофос- дегалогенисреде в прина носителе. вторызобретепия В. М, Вдовенко, В. Н, Боброва Изобретение относится к области получения меченых радиоактивными изотопами биологически активных соединений, а именно к способу получения не описанного в литературе аданозин-Н-монофосфата, аденозин-монофосфата, меченного тритием в 8 положении пуринового кольца.Это соединение, являясь предшественником РНК, может быть применено в биологии и ,биохимии для изучения синтеза рибонуклеиновых кислот в живом организме.Известный до сих пор неопределенно меченный тритием аденозин-монофосфат получен изотопного обмена и имеет удельную активность 0,25 - 0,75 кюри/ммоль. Предлагаемый способ дает возмлучить аденозин-монофосфат,но меченный тритием в 8 положевого кольца, Определенность метляет существенную ценность дляских исследований синтеза рибокислот.Описываемый способ основан8-бром,3-О-изопропилиденадеиорилируют пирофосфорилхлоридомщийся при этом 8-бромаденозинфат далее по известной реакциируют тритием в водно-щелочнойсутствии катализатора палладий Целевои продукт выделяют иемами. Удельная активно о 5 кюри/ммоль.Пример, К 386 мг (1 ммоль) 8-бром,3- 5 О-изопропилиденаденозина, охлажденному до- 20 С приливают 1,2 мл (10 ммоль) пирофосфорилхлорида, температуру реакционной смеси постепенно доводят до комнатной, при этом происходит полное растворение. Смесь обра батывают 25 лл эфира, растворитель дека(нтируют, а остаток растворяют в 15 мл воды, Раствор доводят 5 н. раствором гидроокиси лития до рН 1 и выдерживают при 20 С в течение 48 час. Реакционную смесь доводят 15 до рН 8 - 9 и 8-бромаденозин-монофосфат(Вг - АМФ) выделяют на колонне со смолой Вотъех (С 1-форма).Нуклеотид выделяют при элюировании раствором 0,005 ммоль НС 1+ О,О 1 ммоль 1 лС.20 Контроль за концентрацией нуклеотида осуществляют измерением плотности при Хпз 263(Н+), Кислый раствор нуклеотида доводят 5 н, раствором гидроокиси лития до рН 7 - 8 и выпаривают, досуха при ЗО - 35 С и давле нии 10 - 12 мм рт. ст. Сухой остаток для освобождения от хлористого лития экстрагируют смесью метанол-ацетон (1:9) до отрицательной реакции на хлор-ион, Вг - АМФ сушат в вакуум-эксикаторе над хлористым кальцием 30 в течение 6 час. Выход 200 мг (37%).3Вычислено, о/о. М 13,26; Вг 15,15.С 10 Н 2 И 507 РЬ 12 5 Н 20.Найдено, %. М 13,38; 13,77; Вг 14,54; 14,57.Хтах (Н+) 263 ммк.Для получения аденозин-Н-монофосфата проводят дегалогенирование Вг - АМФ тритием над катализатором 5/о Рд/С. Для этого 50 мг 8-бромаденозин-монофосфата растворяют в 3 мл воды, содержащей 1,2 мл 0,1 и. раствора едкого натра, добавляют 50 мг 5% РфС, предварительно насыщенного водородом, и подают тритий-газ при перемешивании и комнатной температуре. Продолжительность реакции 2 час. После отделения катализатора и нейтрализации раствор упаривают досуха в вакууме. Неорганические соли экстрагируют метанолом, аденозин-Н-монофосфат отделяют центрифугированием и сушат в вакуум-эксикаторе, Выход 30 - 38/о. Удельная 323010 активность 10 кюри/г (5 кюри/ммоль), Радиохимическая чистота 98+2%, метод контроля - хроматографический анализ в системах:и-пропанол-аммиак-вода (55: 10: 35) - ме тол ьосходятцей хроматографии;и-бутанол-уксусная кислота-вода (7: 1: 5) -метод восходящей хроматографии;этанол-ацетат аммония до рН 7,5 (7: 3) -метод нисходящей хроматографии.10Предмет изобретен и яСпособ получения аденозин-Н-монофосфата, отличающийся тем, что 8-бром,3-0- изопропилиденаденозин фоофорилируют пиро фосфорилхлоридом и образующийся при этом8-бромаденозин-монофосфат далее дегалогенируют тритием в водно-щелочной среде в присутствии катализатора палладий на носителе, Составитель М. макарон Редактор Т. Пилипенко Техред Е, Борисова Коррекгор Т, Бабакина Заказ 147771 Изд. Мц 612 Тираж 448 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Ж, Раушская паб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2