Способ получения меченых тритием нуклеозид-5-триофосфатов

Союз СоветскииСоциалистицескихРеспублик ОП ИСАН ИЕИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ, Кл.е07 Н 19/О 384/23 присоединением заявкиВ 23/ Гасудврствениый намитет Саватв ееииистрав СССР па делам изааретеиий и открытий(43) Опубликовано 25 Б етень 39. УДК 547.85 .7.07 (088.8 45) Дата ли ко вани я описания 15,02. 7) Зая ь 4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕЧЕННЫХ ТРИТИ НУКЛЕОЗИД-ТРИфОСФ АТОВ Цель изобретениивности и ради- повышение удельной мической чистоты целе тся к области получвпрепаратов биологии соединения нахое в молекулярной бизобретение относмеченных тритиемого назначения, Этширокое применени вого продукта,Для этого обработку бромпроизводного1нуклеозид- монофосфата тритием проводятпри 50-150 оС с промежуточным выделением меченного тритием нуклеотида и его последующим ферментативным фосфорилирова -нием, совмещенным с радиохимической очибт 10 кой.Достоинством способа также являетсявозможность получения препарата заданнойудельной активности регулировкой концентрации трития в газовой смеси,Образующиеся побочно меченные тритием нуклеозиды могут быть превращены вцелевой продукт трифосфорилированием либоиспользованы по иному назначению.7П р и м е р 42- мг 5-бромцитидин-20 -монофосфата адсорбируют на 350 мг палладиевого катализатора (10% палладия наактивированном угле "Норит"), Обработкугазообразным тритием проводят при 100 оСПродолжительность реакции в атмосфере25 500/О-ного трития 2 час. По окончании рееск дят лог 72) Авторы изобретения О В. Лавров, Н.С, Марче Ключевой стадией при синтезе этих соединений является введение меченного атома (трития) в нуклеозид-монофосфаты,Известен способ получения меченных тритием нуклеозид-трифосфатов обработкойсоответствующего бромпроизводного нуклеозид-монофосфата газообразным тритием в условиях высокочастотного электри -ческого разряда, Выделенный меченный триУтием нуклеозид-монофосфат далее биохимически фосфорилируется до соответствую 1щего нуклеозид - 5 -трифосфата одновременно с радиохимической очисткой,Однако известный способ сопровождается сильной деструкцией маркируемого соеди нения, что снижает удельную активность и чистоту целевого продукта и требует приме нения специальной аппаратуры и высокопроцентного трития.462467 А, =29,2 Составитель И, ОбручниковРедактор А, Купрякова Техред Г. Родак Корректор Н Бабурка Заказ 5442/171 Тираж 575 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035 Москва, Ж, Раушская набд.4/5филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул, Проектная, 4 акции продукты десорбируют скатализатора 100 мл 10%-ного водного пиридина и лабильный тритий замещают на водород путем трехкратного изотопного уравновешивания с водой, Сухой остаток после отгонки последней порции воды растворяют в 15 мл дистиллированной воды и наносят на колонну, содержащую дауэкс 1 х 8 в формиатной форме (1,2 х 20,0 см), Колонну промывают150 мл дистиллированной воды, при этом 1 выходит четкий пик цитидина(Т). Затем при элюации 150 мл 0,25 н,муравьинойУ кислоты выходит четкий пик цитидин- -монофосфата(Т), Далее выделяют 5 У-бром - цитидин-монофосфат-Т( б ), используя для элюации 2,2 н,муравьинуюкислоту. Цитидин(Т) концентрируют в ваку уме при 37 С. Цитидин-монофосфат(Т)оконцентрируют с помощью активированного УглЯ В опыте получают 31 тс цитидина- ркюи -5(Т) с удельной активностью 7,4 мвоьь1 13 йс цитидин-монофосата - 5 (Т) с удельной активностью 5,86 оль июри9 тп с 5-бром - цитидин-монофосфатаКЮРИ -Т( Й ) с удельной активностью 0,2 - м олЬ р Полученный препарат цитидин-монсфосфата(Т) фосфорилируют, используя 1,0 мл стандартного ферментного раствора, до цитидин-трифосфата(Т), Продукты р фосфорилирования разделяют ионообменной хроматографией на колонке (3,0 х 30 см) с ДЭАЭ - целлюлозой Ав бикарбонатной форме, Для элюации применяют линейный градиент триэтиламмонийбикарбонатного бу- Ц фера рН 8,6 (0,1-0,6 м). Соответствующие фракции собирают, обессоливают при помощи сефадекса КМв Н -форме и+концентрируют в вакууме. Получают 86 тпс цитидин-трифосфата(Т) с удельной ак,- 40 тивностью 4,12 . Теоретически, покюриммоль 4формуле, удельная активность препаратадолжна составить 4,7кюриммольТ Т+ Н+ - фО,Ъ 1Мп 62.100 где А у- теоретически достигаемая удельная активность маркируемого соединения в данных экспериментальных услови ях, кюри/ммоть;Т - количество трития в исходном газе, ммоль;Я - количество водорода в исход- ном газе, ммоль;М - исходное количество 5-бром)цитидин-монофосфата, ммоль;и:4 - число атомов водорода в лабильных положениях молекулы 5-бромцитидин-монофосфата;С - количество катализатора, мг.Полученный препарат цитидин-трифосфата(Т) хроматографически однороден и радиохимически чист. формула изобретения Способ получения меченных тритием нук 1леозид-трифосфатов обработкой адсорби рованного на палладиевом катализаторе соответствующего бромпроизводного нуклеозид-монофосфата газообразным тритием, выделением меченного тритием нуклеозид- -5-монофосфата и его биохимическим фосфорилированием, совмещенным с радиохими ческой очисткой, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения удельной активности и радиохимической чистоты целевого продукта, обработку бромпроизводного нуклеозид-монофосфата тритием проводят при 50-150 оС,