Способ получения ферментных препаратов каталазы

О П И"С"Х"Н И Е ИЗОБРЕТЕНИЯ 237 ОЗО Союз Советских Социалистических Республик)рисоедицснисм заявки Ь Комитет по делам зобретений и открыт.ЧПК С 121 риоритстпубликов ДК 663.11:576.8.093 (088.8) е МинистреССР но 12.11.1969. Бюллетень М рн Со Дата онуб),чиковаиия описания 25.Л.1969 Авторыизобретения аменко, В. А. Витковская и Т. П. 1 ачивай)к аинский научно-исследовательский институт спиртововодочной промышленности Заявитель У ликер СПОСОБ ПОЛУЧЕ.1 ИЯ ФЕР 1 ЧЕ 1 ТИЫХ ПРЕПАРАТОВ КАТАЛАЗЪ 1 И ГЛО 1(ОЗООКСИДАЗЫИзвестен способ получения фермситиь)к пре- ПЗРЗТОВ К 2 ТЗЛЯЗЫ И ГЛЮКОЗООСИДЯЗЫ ИЗ К) .)Ь- туральной )кидкости и,)есневОГО Гриоа Ре 1)- с)1 ш чч)12 с Рс 1 ор, е 1 В)12), яв 5 ощегос 5 продуцеитом этик ферментов, путем адсорбцги На КЯОЛИИЕ КЯТЯ;)ЯЗЫ ИЗ КЧЛЬТЕР 2;)Ь:ОИ ЖИДКОСТИ, Отделен 55 Ядсо )Оентя с кзя )Язон иснтри 1)ерировацисч, выделения каталдзы эчОцис) и Осакденисъ Спиртом, д)асороцни также на кзолине л)окозооксидазы из Остави)СГОся снтри (ругата с последующим выделен;Сч се )дни) из известнык способов, например элюиСй и осаждением ацетоном. Для одновременного получения наряду с 1 ферментами каталдзоиглюконовой к;)слоты, накапливающейся в культуральОЙ жидкости в процессе кульчивирования продуцента этик ферментов в виде сс кальциевой соли, а также уменьшения произ водствеццык потерь иентрифугат, полученый после отделения глюкозооксидазы с адсорбснтом, обрабатывают известковым молоком для нейтрализации глюконовой кислоты с образованиеь при этом ее кальциевой соли, Избыток 2 известкового молока отделяют от осадка, а последний промывак)т водой, Г 1 олученций фильтрат вместе с )трои)вными водами упаривают под вакуумом с последующим выделением из него глюконата кальция одним из из вестных способов, например, кристаллизацией,С)чосоо пол )е)чия рс 1):5)енти )к прспар,)тов каталдзы и глн).озоок,иддзы заключается и следующем.Вначале получают зассвцу)0 культуру. 1,Л 5 этого плессвый грио Реп)с 11 Нгп)21 с Р 11 ор 1. е 1 В 1 а Нри температуре 26 С в тсчецис 36 - )2 чос, кчльтиЗирОт иа цитате,чьндЙ срсгс, со;)ср)кднсй 0,5- - 1,7"кукурузного экс р 2 ктЯ Гз л лик веществ, 2", са.;дрозы и 0,2. КХОПолученную таким образом культур засс. вдют в фсрмситационную среду В)а (Нг)отиость засева 4 - 8"), Процесс фсрмснтации осуществляют ири дифференцированном дэрировдиии среды и температуре 26 - 30-С в течение 72 в 97 час.По окончдни; фермситации кульчурдл)адя кидкость соде 1 рж по 80 - 100 сдс), гл)окозооксидазы и кдтдлдзы, 2,5 - 3,0" фруктозы, 1,8 - 2,3",о глюконовой кислоты, рибофлдвиц, ДИНОКИ СГ)ОЫ И ПР.В 1 й,)ьтчра,чш)О жидкос)ь виос 5)т 0,0 р " долина и сорбируют катзлазу при псрсмешивации в течение 15.)5 ин. Сорбент с адсорби;)овацным ферментом оделяют цецтрифугироваиис.К Отдаленно)у кдог)ину с ЯдсороироьаинОЙ кача )азой добаГ)5)От 0,2.11 фосфдтц ) буфер до р 11 7; осущс; гвляют элн)цию каталдзы, 1103)ччсннтю с)Нсь .снрифтгирчют д:)5 ОдсЛЕНИ 5 ОСЗДКЯ, 2 ИЗ ЭЛЮДТД ОСДЖДД)ОТ КЗТЯЛДЗУ 530 п ропилоь )ч спиртом.237080 П редмет изобретения Составитель Т, ПолянскаяТехред Л, Я. Левина Корректор Г. И. Плешакова Редактор С. Сюткина Заказ 1299,4 Тираж 480 Подписное ЦН 11 ИП; Комитета по делаги изобретений и открыгий при Совете Мш 1 истров СССР Москва, Центр, пр. Серова, д. 4Типография, пр. Сапунова, 2 Центрифугат, полученный после сорбции каталазы, полкисляют до рН 3,4, вносят в него 2 В 1 ов КаОЛИНа И СОрбпруЮт ГЛЮКОЗООКСИЛаэу В стандартных условиях.Каолин с адсорбированной гл 1 окозооксидазой отделяют от жидкости центрифугированием. Полученный при этом центрифугат, содержащий 22% глюконовой кислоты, 2,6", фруктозы, 10,02 в 1 о а м инокислоты, используется лля выделения 1 люконата кальция.Глюкозооксилазу элюируют с сорбента 0,2 М фосфатным буфером (рН смеси 6,3), из элюата отделяют каолин центрифугированием, а глюкозооксидазу осаждают на холоду этиловым спиртом.Центрифугат (рН 3,4 - 3,6), полученный после выделения ферментов, обрабатывают известковым молоком для нейтрализации глюконовой кислоты, при этом образуется кальциевая соль глюконовой кислоты. Целесообразно на 1 л фугата вносить 0,3 л известкового молока до рН 6 8 - 7 О.Избыток мела отфильтровывают, осадок на фильтре промывают водой температуры 70 - 80 С ло тех пор, пока в промывных водах не будут содержаться ионы кальция,Фильтрат и промь вные воды смешивают и упаривают под вакуумом при температуре 60 - 62 С до содержания 55 - 60% сухих веществ. Затем из упаренной жидкости выделяют глюконат кальция одним из известных способов, например кристаллизацией. Способ получения ферментных препаратовкаталазы и глюкозооксидазы из культураль ной жидкости плесневого гриба Решс 1 Иштпйа 1 е РЫор 1. е 1 В 11 а 1, являющегося пролуцентом этих ферментов, путем адсорбции на каолипе каталазы из культуральной жидкости, отделения адсорбента с каталазой цеитрифуги рованием, выделения каталазы элюцией иОсаждением спиртом, алсороции также на каолине глюкозооксилазы из оставшегося центрифугата с последующим выделением ее одним из известных способов, например элюцией и осаждением ацетоном, ит,1 ича 1 ощийсч. тем, что, с целью одновременного получения наряду с катал азой и глюкозооксидазой глюконовой кислоты, накапливающейся в культуральной жидкости в процессе культивирования пролуцента этих ферментов в виде ее кальциевой соли, а также уменьшения производственных потерь, центрифугат, полученный после отделения глюкозооксидазы с адсорбентом, обрабатывают известковым молоком для нейтрализации глюконовой кислоты с образованием при этом ее кальциевой соли; избыток известкового гиолока отделяют от осадка, последний промывают водой, полученный фильтрат вместе с промывными волами упарива 1 от под ваЗо куумом с последующим выделением из негоглюконата кальция одним из известных способов, например кристаллизацией.