Способ получения псевдохолинэстеразы

187238 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Сеаэ Советских Социалистических РеспубликЗависимое от авт. свидетельстваЗаявлено 07.Ч 11.1962 ( 785985/31-16) к 301 т,присоединением заявкиИПК А 611( итет Комитет по дел изобретений н открытий прн Совете Министров СССРК 615.45:615,779.9 (088.8) публиковано 11,Х,1966. Бюллетень2 ата опубликования описания 18.Х 1,196 Авторыизобретения М ан, А. В, Бейлинсо вител СПОСОБ ЕНИЯ ПСЕВДОХОЛИНЭСТЕРАЗ чеоных сывороток; фильтрат плазмы после высаливания иммунного глобулина, остаточную плазму в эритроцитарной массе после обработки иммунной крови и плазму или сы воротку, непригодные для изготовления очищенных препаратов лечебных сывороток по недостаточной специфической активности нли физическим свойствам (гемолиз, мутность н т. п,),10 При получении псевдохолинэстеразы нзфильтрата плазмы после выделения из нее иммунного глобулина высалнванием на каждые 100 л плазмы добавляют 28 кг сухого измельченного сернокислого аммония, Г 1 осле ра створения и отстаивания в течение 2 час прикомнатной температуре осадок иммунного глобулина отфильтровывают и очищают известным способом. 1( фильтрату после отделения иммунного глобулина добавляют серно кислый аммоний (0,15 кг( г), отстаивают 2 час,отфильтровывают осадок через техническое полотно, прессуют и диализуют в проточной воде в течение 48 час. Днализат разбавляют до содержания в нем белка не более 5%, до бавляют 0,1 объема 10),-ного раствора сернокислого цинка и оставляют на 24 час. Выпавший осадок белка отфильтроьывают и выбрасывают, а к фильтрату добавляют сернокнслый аммоний (320 г/л). Выпавший белок сночо ва отделяют и добавляют еще 80 гл сульфата Известны спосооы получения псевдохолинэстеразы - фермента, расщепляющего эфиры холина и применяемого в качестве индикатора для обнаружения фосфорсодержащих ядовитых веществ во внешней среде, путем высаливания сернокислым аммонием. Указанные способы предусматривают применение в качестве сырьевого источника электрического органа электрического угря и поджелудочной железы собак, что сильно удорожает производство и не позволяет получать псевдохолинэстеразу в достаточно чистом виде.С целью удешевления производства фермента и повышения степени его очистки в качестве источника сырья используют отходы сывороточного производства, которые обрабатывают солями тяжелых металлов совместно с сернокислым аммонием.Г 1 редлагаемый способ предусматривает получение псевдохолинэстеразы и очищенных концентрированных лечебных сывороток из одной и той же плазмы крови лошадей продуцентов. При этом разделение белковых фракций плазмы, содержащих антитоксин, проводят высаливапием сернокислым аммонием, а для выделения псевдохолинэстеразы производят фракционирование солями тяжелых металлов совместно с сернокислым аммонием, В результате в качестве источника псевдохолинэстеразы используют отходы производства леДомбровская и В. Р, Макарова187238 Предмет изобретения Составитель В, А, ТаратутаРедактор А. И. Пименова Техред А. А. Камышникова Корректоры: В. В. Крылови М. П. Ромашова Заказ 3404/2 Тираж 525 формат бум, 60 с 90/з Объем 0,16 изд. л. ПодписноеЦ 1.1 ИИПИ Комитеза по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Центр, пр. Серова, д. 4 пр. Сапунова, 2 Типография,аммония. Выпавший осадок псевдохолинэстеразы отфильтровывают, прессуют и диализуот в течение 48 час. К диализату, разбавленному до содержания в нем белка не более 5%, добавляют 0,2 объема 2/о-ного раствора уксуснокнслого свинца, отстаивают 30 мин и отделяют выпавший балластный белок центрифугированием. К прозрачному раствору добавляют 320 г/л сернокислого аммония, отделяют белок центрифугированием, промывая его 0,6 объема 32%-ного раствора сернокислого аммония, к центрифугату вместе с промывными водами добавляют 40 г/л сульфата аммония и отфильтровывают выпавший осадок, содержащий некоторое количество псевдохолинэстеразы. Осадок промывают 0,6 объема 36%-ного раствора сульфата аммония, диализуют и сублимируют. Получают холинэстеразу с невысокой активностью, используемую для специальных целей. К фильтрату добавляют еще 40 г/л сульфата аммония, оставляют на 24 час, отфильтровывают выпавший осадок, содержащий основное количество псевдохолинэстеразы, промывают его 40%- ным раствором сульфата аммония и сублимируют.При получении псевдохолинэстеразы из остаточной плазмы в эритроцитарной массе, вытекающую из разделительной системы сепаратора, эритроцитарную массу собирают в бутыли с раствором поваренной соли (2,5 л раствора на 1 л эритроцитарной массы). Полученную смесь вновь сепарируют и получают экстракт плазмы, к которому прибавляют 0,1 объема раствора сернокислого цинка и оставляют на сутки, Выпавший осадок балластного белка отбрасывают, а к фильтрату добавляют 400 г/г сульфата аммония. Выпавший осадок, содержащий псевдохолинэстеразу, отфильтровывают и диализуют 48 час. К диали. зату добавляюг 320 г 1.г сульфата аммония,отфильтровывают выпавший балластный белок, а к фильтрату добавляют 80 г/л сульфата аммония, Содержащий псевдохолинэстеразу осадок отфильтровывают, диализуют 48 иис и обрабатывают раствором уксуснокислого свинца. Последнюю, а также дальнейшие операции по выделению псевдохолинэстеразы проводят так же, как в случае ее получения из фильтр ата плазмы после выделения иммунного глобулина.При получении псевдохолинэстеразы из целой плазмы или сыворотки, непригодой для изготовления очищенных концентрированныхиммунных сывороток к плазме добавляют250 г/л сульфата аммония и оставляют на2 иас, после чего отделяют и отбрасывают вы 5 павший осадок балластного белка. К фильтрату добавляют 150 г/л сульфата аммония,отстаивают 2 час и фильтруют через техническое полотно. Осадок выпавшего белка с псевдохолинэстеразой прессуют и диализуют10 48 час. Диализат разводят водой до содержания в нем белка не более 5%, добавляют 0,1объема сернокислого цинка и оставляют на24 час. Выпавший осадок белка отбрасывают,а к фильтрату добавляют 320 г/л сульфатааммония и оставляют на 2 час. К фильтратупосле отделения балластного белка вновь добавляют сульфат аммония в количестве 80 г/л.Полученный осадок псевдохолинэстеразы отфильтровывают, диализуют 48 час, разбавля 20 ю. водой до содержания белка не более 5%и добавляют 0,2 объема 2%-ного раствора уксуснокислого свинца. После 30 мин отстаивания отфильтровывают балластный белок, добавляют 320 а/л сульфата аммония и снова25 отфильтровывают балластный белок, промывая его на фильтре 0,6 объема 36%-ного раствора сульфата аммония. К фильтрату добавляют еще 40 г/л сульфата аммония, отстаивают 2 час и отфильтровывают выпавший осаЗ 0 док, промывая его 36%-ным раствором сульфата аммония, Из этого осадка указаннымвыше методом получают псевдохолинэстеразумалой активности, а из фильтрата получаютосновное количество псевдохолинэстеразы с35 удовлетворительной активностью.Псевдохолинэстераза, полученная любымиз описанных выше способов, обладает активностью от 80 до 200 единиц по расщеплениюбутирилхолиниодида.40 Предлагаемый спосоо позволяет удешевитьпроизводство псевдохолинэстер азы, улучшитьее качество и расширить сырьевую базу дляее получения,Способ получения псевдохолинэстеразы путем высаливашя сернокислым аммонием, отлииаюигийся тем, что, с целью удешевления и 50 повышения степени очистки препарата, отходы сывороточного производства обрабатывакгг солями тяжелых металлов совместно с сер.нокислым аммонием,