Способ электрофоретического определения фракций серомукоида сыворотки крови

(57) Использование; в медицине, в клинической биохимии. Цель; повышение точности способа и количества выявляемых фракций, Сущность изобретения: перед злектрофорезом в полиакриламидном геле дополнительно проводят перерастворение осадка в 0,025 в ,05 М трис-глициновом буфере рН 8,3 с последующим его высушиванием, Положительный эффект: использование изобретения позволяет почти на 35% больше выявить число фракций серомукоида сыворотки крови и на 20% повысить точность определения фракционного состава. 1 табл,ныи медии О.В.ЛоМ., Исаев аминогли ЧЕСКОГО ОМУКОИфракций в полиакриламидном геле, вносят в стеклянные трубки 90 мм длиной и 5 мм в диаметре, заполненные 5% концентрирующим и 10% разделяющим гелями. Для приготовления 10 О/, разделяющего геля берут 1 мл раствора К. 1, 2,8 мл раствора )ч". 2, 0,2 мл Н 20, 4 мл раствора М 3.Пропись приготовления растворов следующая, Раствор М. 1: 1 н. НС 48,0 мл, трис 36,6 г, ТЕМЕД 0,2 мл, довести дистиллированной водой до 100 мл, Раствор М. 2: акрилэмид 30 г. И.И-метиленбисакрилэмид 0,8 г, довести дистиллированной водой до 100 мл, Раствор М: 3: 0,14 г персульфата аммония довести до 100 мл водой. Конструирующий 5% гель приготовляют разведением раствора 10% геля дистиллированной водой в соотношении 1;1,Разделение фракций проводят при силе ока 2 мА на труоку в течение 65 мин. Окрашивание гелей - в 1",- растворе алцианового инего в 7 - уксусной кислоте. Фракии сеомукоида окрашиваются в голубой цвет. ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССРГОСПАТЕНТ СССР) К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Волгоградский государственцинский институт(56) Зверев А.П., Золотарева НП.И, Способ определения гликозканав сыворотки крови,(54) СПОСОБ ЭЛЕКТРОФОРЕТИОПРЕДЕЛЕНИЯ ФРАКЦИИ СЕДА СЫВОРОТКИ КРОВИ Изобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии,Целью изобретения является повышение точности способа и количества выявляемых фракций,Способ осуществляется следующим образом, К 0,5 мл сыворотки прибавляют 4,5 мл дист,воды и 2 мл 1,8 М хлорной кислоты, через 10 мин центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 минут. К супернатанту прибавляют 0,5 мл 5% фосфорно-вольфрамовой кислоты в 2 н. НС 1, Через 10 мин центрифуги руют и ри 3000 об/мин в течение 10 мин. Осадок высушивают в той же центрифужной пробирке, К каждой пробе прибавляют по 0,1 мл 0,05 М трис-глицинового буфера рН 8,3 тщательно размешивают и высушивают при комнатной температуре.Осадок, содержащий 200 - 300 мкг белка по биуретовой реакции, растворяют в 0,2 мл 0,005 М трис-глицлнового буфера рН 8,3. В пробу добавляют 20 мкл 0.5% раствора додецилсульфата натрия. Пробы используют для злектрофоретического разделения 1827636 А182 636 Составитель А.БесединТехред М,Моргентал Корректор Г.Кос Редактор Заказ 2357 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Ра шская наб 4/5 Производственно-издатепвскии комбинат "Патент", г, Ужгород, уп. Гагарина, 101 П р и м е р, Из вены больного М. натощак взято 10 мл крови в сухую пробирку, которую поставили в термостат 37 С на 1 ч, Затем отделили сыворотку от сгустка крови стеклянной палочкой, предварительно проведенной через пламя горелки и остуженной. Для получения прозрачной сыворотки кровь центрифугируют при 1000 об/мин в течение 20 - 30 мин. Берут 0,5 мл сыворотки крови, добавляют 4,5 мл дист.воды и 2 мл 1,8 М хлорной кислоты, через 10 мин центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин. К супернатанту добавили 0,5 мл 5 фосфорно-вольфрамовой кислоты в 2 н,НС. Через 10 мин пробы центрифугировали при 3000 об/мин в течение 10 мин. Осадок высушили, К каждой пробе добавили по 0,1 мл 0,05 М трис-глицинового буфера рН 8,3 и высушили при комнатной температуре. Осадок растворили в 0,2 мл 0,005 М трис-глицинового буфера рН 8,3, Взяли 130 мкл раствора, содержащего примерно 2/3 осадка или 200 мкг белка. В пробу добавили 20 мкл 0,5% раствора додецилсульфата натрия. Пробы нанесли на стеклянные трубки, заполненные 5% концентрирующим и 10% разделяющим гелями. Электрофорез проводили при силе тока 2 мА на трубку в течение 65 мин. Гели окрашивали в 1% растворе алци.анового синего в 7% уксусной кислоте. Былсвыявлено в пробе, обработанной по прототипу 4 фракции, а по предлагаемому способу 7 фракций серомукоида.Преимущества предлагаемого способавидны из таблицы,Из данных таблицы видно, что по предлагаемому способу можно выявить досто 10 верно большее число фракций серомукоидаи повысить точность определения фракционного состава.Формула изобретенияСпособ электрофоретического опреде 15 ления фракций серомукоида сыворотки крови, включающий депротеинизациюсыворотки крови хлорной кислотой, осаждение серомукоида из супернатанта фосфорно-вольфрамовой кислотой, растворение20 осадка в щелочи и переосаждение этаноломс последующим электрофорезом в полиакриламидном геле и окрашиванием алциановымсиним,отлича ющи йся тем, что, сцелью повышения точности способа и коли 25 чества выявляемых фракций, перед электрофорезом проводят перерастворение осадкав 0,025 - 0,05 М трис-глициновом буфере рН8,3 с последующим его высушиванием,