Способ получения активной фракции антирабической сыворотки

О П И С А Н И Е 166463ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических РеспубликЗависимое от авт, свидетельстваЗаявлено 17,111,1961 ( 722231/31-1 011, 6 присоединением заявкиПриоритет ЦП осударственныи омитет по делам изобретений открытий СССРно 19.Х 1.1964. Бюллетеньикования описания 9.Х 11.196 Опублик УЛК опу Авторыизобретени 1, Никитенк о инскии Заявитель СОБ ПОЛУЧЕНИЯ АКТИВНОЙ ФРАКЦИИ АНТИРАБИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ уииа Лб 293 Подгисн Известен способ получения активной фракции антирабической сыворотки путем осаждения спиртом и ферментации пепсипом,Предлагаемый способ упрощает производство и позволяет получать активную фракцию антирабической сыворотки с большим выходом и со сниженными апафилактогенными свойствами. Это достигается применением при осаждении большои ионной силы и ферментировапием готового продукта (гаммаили гамма-, бета-глобулппов),Для осуществления способа иммунную сыворотку животного разводят ледяной дистил. лировапной водой 1:1 и ацетатным оуфером с рН 4,0, доводят рН всей среды до 6,4 и при энергичном перемешивании (избегая вспенивапия) добавляот 900 гл 53",-ного этилового спирта на 1,г смеси, Осаждепие начинают при 0 С и заканчивают при - 7 С. После прибавления спирта смесь перемешивают 1 час и центрифугируют прп - 7 С. В надосадочной жидкости получают альфа-, бета-глобулпы и альбумип, а в осадке белки, обла;1 аюшце наибольшей активностью. Полу еви 11 осадок суспепдируют и растворе хлористого атрця в отношении 1; 7,5 с таким расчетом, чтобы вся суспензия имела довольно высокую 1 оп 1;.ецтрацию хлористого натрия, например 0,2 доль. Для этого В 6 - 7 г дпстц,лп 1)овд 1 пс," воды растворяют 99,45 г хлористого натрия н в этом растворе суспендируют 1 кг осадка. Замеряют полученный объем суспензип, доводят весь объем водой до 8,5 л. После тщательного размешивания при 0 С рН суспензии понижа ют ацетатным буфером до 5,00,05, 1 час перемешивают при 0 С и при постоянном перемешивании добавляют 110 1 л 53%-ного спирта на 1 л суспензип. Осаждение заканчивают при - 4 С, После добавления спирта смесь 0 тщательно перемешивают 1 час, после чегоцецтрнфугируют при - 5 С, Выпавший осадок це используют, а надосадочную ж;дкость фильтруют через бумажное тесто прп 5 С и прозрачный фильтрат замеряют. Для ссажде.5 ция белков с подвижностью гагма-глобулиповрН фильтрата повышают 1 моль бикарбоцатом натрия до 7,0+0,1; если же надо осадить белки с подвижностью гамма- и бета-глобулппов, то рН фильтрата доводят до 5,0+.0,05. В том 0 и другом случае добавляют равный объем530 О-ного спирта при энергичном перс.,ешивании. Осаждепие начцнают прп 0 С и вакачпвают при - 7. Выпавший осадок отделяют на центрифуге при - 7 С, Электрофоретическая 5 картина осадков, выделенных из фильтрата прирН 7,0, обнаруживает наличие гамма-глобулипов, а при рН 5, 0-гамма и бета-глоулшов.Полученный осадок растворяют прп 20"С в 0,15 лгогь растворе ХаС до показателя пре ломлепия па рефрактометре равного 1,3530 -166463 Составитель С. В. ПыжевРедактор А. И. Байнова Техред Л. К. Ткаченко Корректор Л. Е, Марисич Заказ 3146/10 Тираж 425 Формат бум. 60 К 90/ Объем 0,16 иад. л. Цена 5 коп,ЦНИИПИ Государственного комитета по делам изобретечий и открытий СССР Москва, Центр, пр. Серова, д. 4Типография, пр. Сапунова, 2 1,3600. Полученный раствор прозрачен, ус.ойчив и содержит антитела, но обладает высокой анафилактогенностью. Для ослабления анафилактогенности проводят ферментацию. Для этого полученный раствор разводят двумя объемами дистиллированной воды, поникают рН 10 в/в-ной соляной кислотойо 3,0 й 0,05, нагревают на водяной бане до 37 С и до. бавляют при энергичном помещении 0,5 в, медицинского пепсина для производства сывороток. Смесь тщательно перемешивают при 37" С в течение 1 час с момента добавления пепсина, За 5 - 10 мин до истечения этого срока берут небольшую пробу раствора и титрют ед. ким натром 1 моль до рН 4,2 0,05 и при этом рН всю смесь греют еще 1 час. 1-1 еооходимое количество щелочи на весь раствор определяют путем расчета. По истечении 2 час с момента добавления пепсина рН всей смеси повышают 1 моль щелочью до 7,1+0,1 и быстро охлаждают до 0"С. Затем при постоянном перемешивании добавляют равный объем 53 в/,-ного спирта. Процесс заканчивают при- 7 С. После прибавления спирта сме ь 1 час перемешивают и центрифугируют при - 7 С.Полученный осадок растворяют в щелочном растворе 0,15 моль хлористого натрия до 5 коэффициента преломления 1,3600. Щелочнойраствор хлористого натрия готовят добавлением на 1000 мл 0,15 моль раствора хлористого натрия 1 моль бикарбоната натрия, Конечный рН белкового раствора должен быть 10 7,2 - 7,4. Полученный белковый раствор имеетцвет янтаря, прозрачен и обладает хорошей устойчивостью. Предмет изобретения15Способ получения активной фракции из антирабической сыворотки путем осаждения спиртом и ферментации пепсином, отличаюиийся тем, что, с целью уменьшения анафи лактогенности препарата и упрощения производства, берут при осаждении ионную силу 0,2 и ферментируют гамма- или гамма+бета-глобулины,