Способ определения бикарбоновых кислот

Союз Ссзегсних Социалистичесних Респтблинисоединением заявки ПриоритетОпубликовано 22.11966. БюллетеньДата опубликования описания 4.111.196Комитет по делам изобретений и отирытийпри Совете МииистСССР Авторыизобретени Загайкеви Литвак витель ы 1, ,нОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИКАРБОНОВЬХ КИСЛОТИХ АМИДОВ В ПРОДУКТАХ СВЕКЛОСАХАРИОГОПРОИЗВОДСТВА Общеизвестны способы количественного определения бикарбоновых кислот и их амидов в продуктах свеклосахарного производства.Согласно одному из известных способов для определения следующих бикарбоновых кислот и их амидов - аспарагина, глютамина, аспарагиновой, глютаминовой и пирролндонкарбоновой кислот - из отобранной для анализа пробы вначале удаляют соли и сахара, 10 а затем проводят хроматографию с последующими электрофорезом при напряжении 280 в и силе тока 10 лга и фотоэлектроколориметрией, Этот способ длительный, для его проведения требуется сложное оборудование. 15 Кроме того, вместе с солями и сахарами удаляется часть определяемых веществ, что уменьшает точность анализа.Предлагаемый способ проще известных, так как он предусматривает определение би карбоновых солей и их амидов одновременно из одной отобранной для анализа пробы без предварительного удаления солей и сахаров,Это достигается тем, что электрофорез испытуемого образца проводят при пониженном 2 напряжении и силе тока, после чего электрофореграмму разделяют по стартовой линии и определяют бикарбоновые кислоты и амиды из соответствующей половины бумаги известными приемами. Электрофорез следует вести 3 пряженпи 180 - 200 в и силе ток прн на а 0,8 лга.В качестве навески можно использовать теже фильтраты, что и для определения сахарозы в продуктах свеклосахарного производства.Предлагаемый способ заключается в следующем.Берут 140 в 1 лгк,г фнльтрата, полученного при определении сахарозы в жидких продуктах, илн 40 - 60 лгкл фильтрата, полученного прн определении сахарозы в густых продуктах свеклосахарного производства, и наносят микропипеткой прн подогреве теплым воздухом на хроматографнческую бумагу, Пробу наносят в виде полосы длиной 1 Х лглт и шириной Х лглг на поперечную стартовую линию, находящуюся на середине листа, Расстояние между пробами на стартовой линии 1 Х лглг. Затем хроматографическую бумагу с нанесенными несколькими, например семью - - восемью, пробами помещают в прибор для электрофореза на 2,Х час при напряжении 180 - 200 в и силе тока 0,8 лга на каждый сантиметр поперечного разреза бумажной полосы. Через 2,Х час бумагу вынимают из прибора для электрофореза и сушат при 60 С.Полученную электрофореграмму разрезают на две части по стартовой линии. Половину бумаги, расположенную ближе к положи:аказ 415, Тпвакк 1650 Формат бум. 60)(90/в Объем 0,21 пзд. л. ПодписноеЦНИИПИ Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Центр, пр. Серова, д. 4. Типография, пр, Сапунова, д. 2ел 1110 ау цОлюсу, О 1 рыс 1(цв 1 от растворо. нннгцдрина и проявляот при 60 С в течение 20 лин. Н 11 этой половине бумаги четко проявлян 1 тся пятна, соответствующие аспарагиновой и гл 1 отамццовой кислотам.По Окра 1 пецнь 1 пятнам с помощью известного способа фотоэлектроколориметрировапия определяют аспарагиновую и глютамнновую кислоты в нанесенных пробах, а затем и в исходной цавеске,Из второй половины электрофореграммы, расположенной блике к отрицательному полюсу и не опрысканцой раствором нингидрпна, определяют асггарагип и глютамиц. Для этого пз половины электрофореграммы вырезают участки бумаги шириной 15 лгл и длиной 30 л 1 л. Колчестно полосочек бумаги равно числу нанесенных проб, Ширина полосочек 15 л 1 л установлена в связи с тем, что верхней границей их является стартовая линия, а нижняя находится в 15 лл от нее.Из полосочек элюируют 8 н. соляной кислотой аспарагпц и глютамин непосредственно в коническую пробирку. На элюирование, которое длится 4 - 5 лин, требуется 4 лл соляной кнслоты. Конические пробирки закрывают пришлифованными крышками, соединенными с воздушными холодильниками стеклянными трубками длиноц 60 - 70 сл и диаметром 0,6 сл, Пробирки помещают пучком на 3 час в кипящую водяную баню или в сушильный шкаф, в верхней части которого имеется отверстие для воздушных холодильников. В течение 3 час при температуре 100 С происходит полный п 1 дролиз аспарагина и глютамица в соответствующие кислоты.Отсоединив пробирки от холодильников, производят выпаривание до тех пор, пока в цнх це останется приблизительно две капли раствора, Этот остаток наносят в виде одной пробы ца хроматографическую бумагу при подогреве теплым воздухом для вторичного электрофореза, который проводят при таких же условиях, как и первый.После вторичного электрофорезя яспарагиц и глютамиц определяют так же, как аспарагиновую и гснотямицовую кислоты. По полу:.ецпым новым величинам узнают путем пересчета 0 содержяпи 11 кяждого амида В ис.ходцой цавеске.Пцрролндош:,:.1 рбоцовую кислоту определя 1 от по разности между количеством общей глютамнновой кислоты и количеством гидролп;1 ованцого глютамина вместе с количеством собственно глютаминовой кислоты, определенной после первого электрофореза. Гидро лиз фильтрата для определения общего количества глютаминовой кислоты проводят в то время, когда происходит первый электрофорез и гидролиз амидов. Фильтрат для гидро- лиза берут в таком же количестве, как и для 15 первого электрофореза. Гидролиз проводят вконических пробирках в присутствии 4 ял 8 и. соляной кислоты при тех же условиях, что и гидролиз амидов.Остаток после выпаривания гидролизован ного фильтрата наносят в виде одной пробыпрн подсушивании теплым воздухом на хроматографическую бумагу рядом с пробой п 1;1 ролизованных амидов для вторичного электрофореза. После вторичного электрофо реза определяют количество общей глютаминовой кислоты и путем пересчета - количество пирролидонкарбоновой кислоты в исследуемом продукте. Точность способа +5%. 30 Предмет изооретения. Способ определения бикарбоновых кислот и их амидов в продуктах свеклосахарного производства при помощи хроматографииэлектрофорезом и электрофотоколоримет рироьанием, от,гичагощийся тем, что, с цельюупрощения способа путем определения их из одной отобранной пробы без предварительного удаления солей и сахаров, электрофорез проводят при пониженном напряжении и силе 40 гока с последующим разделением электрофореграммы по стартовой линии и определе;шем бнкарбоновых кислот и амидов известнымп приемами.2. Способ по п. 1, оггичаощийся тем, что 45 электрофорез проводят при следующих параметрах тока: напряжение 180 - 200 в и сила тока 0,8 ла.