Способ оценки перекисной резистентности эритроцитов

(51)5 6 01 й 33/5 ОПИСАН К АВТОРСКОМУ БР И ИДЕТЕЛЬС и институт онологииС.Мавричев,Изобретение отмедицине и может боценки состояния амы организма.Целью изобретени упрощение способаСпособ осущест ия являетс орение вляют следующим обГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(56) Покровский А.А. и др. К вопросу о перекисной реэистентности эритроцитов. - "Вопросы питания", 1964,М б,с. 44-49, (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ ПЕРЕКИСНОИ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ(57) Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано для оценки состояния антиоксидантной системы организма, Цель изобретения - ускорение и упрощение способа. Способ носится к биологии и ыть использовано для нтиоксидантной систеразом.В центрифужную пробирку, содержащую 50 мкл антикоагулянта (оксалат 1,34- ного натрия), вносят 400 мкл взятой из пальца капиллярной крови, эритроциты осаждают путем центрифугирования образца при 1000 об/мин в течение 10 мин, после чего плазму осторожно отсасывает. Осадок эритроцитов взбалтывают легким потряхи 1704083 А осуществляют следующим образом, К 1 части капиллярной крови с антикоагулянтом добавляют 5 частей 1.57 ь-ного раствора перекиси водорода на физиологическом растворе, Смесь инкубируют 30 мин при комнатной температуре, эвтем добавляют 5 частей дистиллированной воды и центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин. По найденной величине экстинкции вышедшего из разрушенных эритроцитов гемоглобина определяют процент гемолиза и при его значениях выше 127 ь диагностируют сниженную перекисную реэистентность эритроцитов. Способ прост в осуществлении, не требует термостатирования и отмывания эритроцитов от плазмы. в результате чего сокращается время его выполнения. ванием п робирки и автоматическим доэатором добавляют к взвеси зритроцитов в аутоплазме 2000 кмл 1,5 ф-ного раствора гипероксида водорода на физиологическом растворе, согретого предварительно до комнатной температуры. Содержимое каждой пробирки размешивают стеклянной палочкой и инкубируют при комнатной температуре в течение 30 мин. Затем в каждую пробирку автоматическим доэатором вносят по 2000 мкл дистиллированной воды, вновь перемешивают стеклянной палочкой содержимое каждой пробирки и тотчас ставят центрифугировать в течение 15 мин при скорости 3000 об/мин. По окончании центрифугирования пробирки осторожно выни1"04083 Формула изобретения Способ оценки перекисной резистентности зритроцитов путем калориметрического определения вышедшего из клеток гемоглобина в условиях действия перекиси водорода, о т л и ч а ю щи й с я тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, к 1 части капиллярной крови с антикоагулянтом добавляют 5 частей 1,5-ного раствора перекиси водорода на физиологическом растворе, инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре, создают гипоосмию давлением 5 частей дистиллированной воды. подвергают гипергравитации центрифугированием в течение 15 мин при 3000 об/мин и при доле экстинкции гемоглобина выше 12 оь от общего его содержания диагностируют сниженную псрекисную реэистентность эритроцитов,Составитель А.КашулинаТехред М.Моргентал Корректор С.шевкун Редактор О.Хрипта Заказ 60 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва. Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 мают, надосадочную жидкость фотометрируют против воды, используя фотоэлектроколориметр ФЭК, кюветы с длиной светового пути 3 мм. Используют зеленый светофильтр. 5По найденной величине экстинкции вышедшего иэ разрушенных зритроцитов гемоглобина определяют процент гемолиэа, принимая за 100 гемолиэ эритроцитов, полученный иэ такого же объема крови от эдо ровых людей после добавления к нему 4 мл воды (инкубация осадка эритроцитов в дистиллированной воде 30 мин, центрифугирование при 3000 об/мин).Специальными исследованиями уста новлено, что у здоровых людей при данных условиях определения величина гемолиэа колеблется от 4 до 12 ф, от величины полного гемолиэа зритроцитов в таком же обьеме крови, вызванном добавлением к ним 4 мл 20 воды. При получении результатов выше 12 диагносцируют сниженную переписную резйстентность мритроцитов.П р и м е р 1. Гр, А 58 лет, практически здоров. Берут 400 мкл крови иэ пальца в 25 центрифужную пробирку, содержащую 50 мкл антикоагулянта, Эритроциты осаждаютцентрифугированием при 1000 об/мин в течение 10 мин. Осадок после удаления плазмы взбалтывают и добавляют 2000 мкл 30 1,5 ф)-ного раствора перекиси водорода в физиологическом растворе, согретого до комнатной температуры. Содержимое пробирки размешивают стеклянной палочкой и инкубируют при комнатной температуре в 35 течение 30 мин. Затем в пробирку вносят 2000 мкл дистиллированной воды, вновь перемешивают стеклянной палочкой и центрифугируют в течение 15 мин при 3:00 об/мин, Нэдосадочную жидкость фо тсметрируют против воды, используя ФЭК, кюветы с длиной светового пути 3 мм при зеленом светофильтре. Величину гемолиза рассчитывают по отношению к полному гемолиэу эритроцитов, содержащихся в таком же количестве взятой для исследования крови после добавления к ней 4000 мкл дистиллированной воды, Найденная величина составила 86, что соответствует нормальному уровню.П р и м е р 2, Гр. Б 48 лет, жалуется на дискомфорт со стороны кишечника. Предлагаемым способом определена величина переписного гемолиэа, которая составила 52. После коррегирующей терапии витаминными препаратами она снизилась до 22, т,е. произошло частичное восстановление резистентности эритроцитарных мембран к действию перекиси водорода.По сравнению с известным предлагаемый способ проще в осуществлении, не требует термостатирования и отмывания эритроцитов от плазмы, в результате чего сокращается время его выполнения.