Способ выделения и идентификации бактерий хаnтномоnаs маlторнiliа

союз соВетскихСОЦИАЛИСТИЧЕСКРЕСПУБЛИК 3696 А 9) 51)з С 1 04, СЙ КОМИТЕТЯМ И ОТКРЫТИЯМ ГОСУДАР СТ В ПО ИЗОБРЕТ ПРИ ГКНТ СС ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ(56) Определение грамтенциально патогенныхтелей внутрибольничныМетодические рекоРСФСР, 1986. с. 8-17. отрицательныбактерий- возх инфекций.мендации, М иВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЙ ХАМТНОМОИАЗ МАТОРН 11 1 А(57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается бактериологических исследований инфекционных эаболеваИзобретение относится к медицинской микробиологии и касается бактериологических исследований инфекционных заболеваний человека и экологии микроорганизмов.Известен способ выделения и идентификации бактерий Х, та 1 торЫ 11 а путем обработки материала в течение 120 мин 0,0035 М раствором этилендиаминтетрауксусной кислоты в 0,15 М трис-солянокислом буфере рН 8,8 с последующим выращиванием в жидкой селективной среде, содержащей четыре селективных компонента, и учетом результатов по наличию роста бактерий.Однако известный способ сложный и имеет низкую чувствительность (рост Х, п)а 1 торЫ 11 а наблюдается при минимальной посевной дозе 10 микробных тел в 1 мл).Цель изобретения - упрощение и повышение чувствительности способа.Цель достигается тем, что исследуемый материал засевают на плотную питательний человека и экологии микроорганизмов. Цель изобретения - упрощение и повышение чувствительности способа. Способ сводится к тому, что исследуемый материал засевают нз плотную питательную среду, содержащую, г/л: сухой питательный агар из рыбного гидролизатв 35 - 36; висмута нитрат основной 1,5-3; фурагина калиевая соль 0,018-0,03; дистиллированная вода до 1 л; рН 6,8-7,2. Инкубируют посев при 35-37 С в течение 40-48 ч или 18-24 ч при посеве чистых культур. Индентифицируют искомые бактерии Х. ааИорЫ 11 а непосредственно на данной среде по наличию вокруг выросших колоний или газона бактерий зоны серебристого металлического блеска питательной среды,ную среду, содержащую, г/л: сухой питательный агар иэ рыбного гидролизата 35- 36; висмута нитрат основной 1,5-3; фурагина калиевая соль 0,018 - 0,03; дистиллированная вода до 1 л; рН 6,8 - 7,2; инкубируют посев при 35-370 С в течение 24-48 ч и идентифицируют искомые бактерии Х, п)айарЫ 11 а непосредственно на данной среде по наличию вокруг выросших колоний или газона бактерий зоны серебристого металлического блеска питательной среды,Способ осуществляется следующим образом.Приготовление дифференциальной питательной среды. В 1 л дистиллированной водц вносят 35 г сухого питательного агара из рыбного гидролизата, рН 6.8 7,2, кипятят до полного растворения, стерилизуют в паровом стерилизаторе при 120 С 20 мин. Горячий питательный агар разливают по 200 мл в стерильные колбы, Добавляют в каж 1703696дую колбу висмут нитрат основной 0,4 г, порошок растертого в ступке препарата "фурагин растворимый 106-ный с натрия хлоридом 906-ным" 40 мл (т,е. фурагина калиевой соли 4 мг), тщательно перемешивают, разливают в стериальные чашки Петри. Среда в чашках имеет желтый цвет, пригодна к использованию в течение 1 сут при хранении от 4 до 8 С.П р и м е р 1. Исследуемый материал - отделяемое раны засевают ватным темпоном на поверхность питательноЯ среды в чашке Петри (среда содержит на 1 л дистиллированной воды, г: сухой питательный агар из рыбного гидролиэата 35; висмута нитрат основной 1.5; фурагина калиевая соль 0,018; рН 1,0), инкубируют при 37 С в течение 48 ч, после чего учитывают результаты: на поверхности среды выросли изолированные колонии различных бактерий, в том числе выпуклые колонии диаметром 2-3 мм темно-коричневого цвета с кольцевой зоной серебристого металлического блеска среды вокруг колоний. Наличие колониЯ с зоной серебристого металлического блеска питательной среды указывает на принадлежность бактерий к виду Хаптйовопаз гпайорЫИа,П р и м е р 2, Исследуемый материал - воду реки 0,1 мл вносят пипеткой и растирают шпателем по поверхности питательной среды в чашке Петри (среда содержит на 1 л дистиллированной воды, г; сухой питательный агар из рыбного гидролизата 35,5; висмута нитрат основной 2; фурагина калиевая соль 0,02; рН 7.0), инкубируют при 37 С в течение 48 ч, почле чего учитывают результаты: на поверхности среды выросли 30 изолированных колоний различных бактериЯ, в том числе 5 выпуклых колоний диаметром 2-3 "м темно-коричневого цвета с кольцевой зоной серебристого металлического блеска среды вокруг колоний. Наличие ко- лоний с зоной серебристого металлического блеска питательной среды указывает на выдвление бактерий вида ХапсЬовопаз пзайорЫИа, количество которых составляет 50 КОЕ в 1 мл воды,П р и м е р 3. Исследуемый материал - чистую агаровую культуру бактерий засевают петлей в виде бляшки диаметром 5 мм на поверхность сектора питательной среды в чашке Петри(среда содержит на 1 л дистиллированной воды, г: сухой питательный агар из рыбного гидролиаата 36; висмута нитрат основной 3; фурагина калиевая соль 0,03; 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 рН 7,0), инкубируют при 37 С в течение 24ч, после чего учитывают результат; на местепосева вырос газон бактерий коричневогоцвета, окруженный зоной серебристого металлического блеска питательной среды, наличие которой указывает напринадлежность исследуемых бактерий квиду Хап 1 потопаз еаорЫИа.Свойства Х. ва 11 орЫИа давать цветнуюреакцию на питательной среде, используемой в способе, было выявлено у всех изученных штаммов Х, ва 1 орЫИа (110 штаммов) иотсутствовало у прочих бактерий 56 видов24 родов. Это позволяет упростить выделение и идентификацию Х. гпа 1 орЫИа, приводя их однозтапно и сопряженно бездополнительных тестов,Питательная среда обладает высокойчувствительностью, полностью равной чувствительности ее питательной основы (питательного агара из рыбного гидролизата) -2 - 9 КОЕ. Этот уровень чувствительностиполностью сохраняется в присутствии бактерий - тассоциантов в больших концентрациях (10 КОЕ), большинство видов которыхподавляется средой, в том числе зшерихии,морганеллы, цитробактер и другие.Применение изобретения позволяеттакже проводить количественные исследования на Х, гпаИорЫИа материалов от боль- .ных и внешнеЯ среды.Формула изобретенияСпособ выделения и идентификациибактерий Хап 1 йовопаз ва 11 орЫИа, включающий посев исследуемого материала в питательную среду, содержащую источникиазота и углерода, селективный агент и дистиллированную воду, инкубирование посевов при 35-37 фС в течение 24-48 ч и учетрезультатов по характеру роста бактерий,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с цельюповышения чувствительности и упрощенияспособа, исследуемый материал непосредственно высевают на поверхность плотнойпитательной среды, содержащей, г/л;Сухой питательный агарна рыбном гидролиэате 35-36Висмута нитрат основной 1,5 - 3Яурагина калиевая соль 0,018-0,03Дистиллированная вода До 1 лрН среды 6.8-7,2и после инкубирования выдеЛение и идентификацию Х. ваИорЫИа проводят по наличию на среде вокруг выросших колоний илигазона бактерий зоны серебристого металлического блеска,