Питательная среда для дифференциации энтеропатогенных эшерихий

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКЧТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ 1(56) 1, Справочник по микробиологическими вирусологическим методам исследования./Под ред. М.О, Биргера, М.: Медицина,1982, с. 59,2, ччг 19 И К,С, "А пещ зеест 1 че апббЖегепт 1 а 1 адаг веб 1 опт аког Е. со 11 апбсо 11 тогФ огдап 1 звз"1, от Арр 11 ебВастег 1 ооду, 1984, ч. 56, р. 381 - 988.3, Справочник по микробиологическими вирусологическим методам исследования./Под ред. М.О. Биргера, М.; Медицина,1982, с. 58. Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для бактериологической диагностики эшерихиозов.Известна дифференциальная элективная среда Левина для выделения патогенных кишечных палочек: на 100 мл мясопептонного агара добавляют 2 мл 0,5-ного водного раствора мителенового синего, 1,5 мл 2-ногг водного раствора эозина (эозин натрий бактериологический), 2 г лактозы, 0,2 г двухосновного фосфата калия. Среда позволяет отличать по внешнему виду синие или черные колонии лактозопозитивных кишечных палочек от лактозонегативных, прозрачных, бесцветных колоний шигелл, сальмонелл и оранжеЯ 21703695 А 1(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ДИФФЕР Е Н ЦИАЦИИ Э НТЕ РОПАТОГЕННЫХ ЭШЕРИХИЙ(57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для бактериологической диагностики эшерихиозов. Цель изобретения - повышение точности дифференциации эшерихий. На 1 л мясопептонного агара добавляют 5-10 г сахарозы, 0,2-0,25 г фенол рота. 0,1-0,1 г анилина синего. Цвет готовой среды крас. ный. Сахарозонегативные колонии энтеропатогенных эшерихий розового цвета, сахарозопозитивн ые - серовато-розовые. среда элективная, оказывает ингибирующее действие на рост стафилококка. вых колоний протея, обладает способностью задерживать рост грэм положительных микробов (1 ),Другая дифференциальная селективная 0" среда предложена Райтом 2): 30 г лактозы, О 20 г триптозы, 6 г дрожжевого экстракта, 1 г (Я додецила сульфата натрия, 0,2 г фенол рота, 0,1 г анилина синего растворяют в 1 л дистиллированной воды и добавляют 12 г агара (Охо 1 б М 1), Среда позволяет дифференцировать лактозонегативные колонии от лактозопозитивных, а также является селективной - ее состав стимулирует рост патогенных энтеробактерий и добавляет рост других сопутствующих микробов.Однако известные дифференциальныесреды не дают возможности дифференци 1703695ровать колонии кишечных палочек по сахарозному признаку и морфологической характеристике. Среда Райта трудоемка в приготовлении из-за сложности состава.Наиболее близкой по достигаемому эффи гу является дифференциальная среда Ассоль-Либермана: на 1 л мясопептонного агара добавляют 1 О г сахарозы и 0,6 г конго рота. Среда обладае- способностью дифференцировать разные виды кишечных палочек, в том числе и энтеропатогенные, по сахарозному признаку и морфологической характеристике, однако не обладает элективностью 31 .Цель изобретения - повышение точности дифференциации эшерихий,Среду готовят следующим образом, В растопленный стерильный питательный агар добавляют навески сахарозы, фенол рота и анилина синего, Тщательно перемешивают до растворения ингредиентов. Среду разливают по 25 мл в стерильные чаши Петри и оставляют до застывания. Затем чашки со средой подсушивают в термостате при 43 С в течение 30 мин, после чего она готдва для использования. Цвет готовой среды красный.П р и м е р 1, На 1 л мясопептонного агара добавляют 5 г сахароэы, 0,2 г фенол рота, 0.1 г анилина синего. Тщательно размешивают, разливают в чашки Петри. Затем чашки со средой подсушивают в термостате. Среда готова для использования. Сахарозонегативные колонии энтеропатогенных эшерихий отличаются от сахарозопоэитивных интенсивностью окраски: сахарозонегативные - розовые, сахарозопозитивные - серовато-розовые, Элективность среды сохраняется.П р и м е р 2. Готовят среду аналогично примеру 1, но в 1 л мясопептонного агара вноят 10 г сахарозы, 0,25 г фенол рота, 0,15 г анилина синего, Интенсивность окраски колоний более яркая: сахарозонегативные - розовые с красным центром, сахарозопозитивные бледно-розовые с чертым центром, Отмечаются морфологические различия при росте колоний лактозонегативных, слабос,заживающих сахарозу, Элективность среды сохраняется.П р и м е р 3. На 1 л мясопентонного агара добавляют 7,5 г сахарозы, 0,225 г фенол рота и 0,125 г анилина синего. Среда красного цвета. Интенсивность окраски колоний, выросших на этой среде, более яркая, чем в примере 1: сахарозонегативные - роэовыв с красноватым центром, сахарозопозитивные - бледно-розовые с серым или черным цен ром. Элективность среды со.храняется. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Приготовленные по примерам вариантысреды позволяют дифференцировать выросшие колонии эшерихий по "сахарозному"признаку и, отчасти, по их морфологическойхарактеристике, а также обеспечивают электианость среды - происходит задержка роста грамположительных микробов,Среду используют следующим образом.Готовят суточные агаровые культурылактозоотрицательных штаммов (шигелл,сальмонелл, стафилококка, протея, лактозо-сахарозоположительных штаммов(ЭПКП 018 ас, 0142) лактозоположительных,но сахарозонегативных (ЭПКП 044, 04),штаммов, слабо сбраживающих сахарозу(ЭПКП 0111, 026). С помощью оптическогостандарта мутности готовят взвеси монокультур их высевают по 0,1 мл из разведения 10, 10 на чашки с предлагаемыми иизвестными средами (Левина, Райта, ЯсельЛибермана). Высекают также различные варианты смесей этих культур,Учет результатов проводят через 18-20ч инкубации посевов при 37 С.Чувствительность, стабильность исходных биологических свойств, скорость ростаиспытуемых штаммов на опытной и известных средах одного порядка.Дифференцирующие свойства: при посеве смеси ЭПКП 018 ас (сахарозо-лактозопозитивные), ЭПКП 044(сахарозонегативные,лактозопозитивные), шигелл (лактозо-сахарозонегативные) и ЭПКП 0111 (лактозопоютивные, но слабо сбраживающие сахарозу) наопытной среде отмечается четкая дифференциация всех четырех видов энтеробактерий.Колонии имеют разнообразное окрашивание;розовато-серые с темным центром, розовые Скрасным центром, оранжево-розовые и красные. На известных средах-аналогах (Левинаи Райта) отмечаются только два вида колоний на основе лактозного признака, СредаАсель-Либермана обладает такими же дифференцирующими свойствами, как и предлагаемая, но не обладает элективностью.При количественном посеве миллиард.ной взвеси суточных агаровых культур эшерихий, протея и сальмонелл напредлагаемую среду и среды Левина иЯсель-Либермана количество колониеобразующих единиц для каждого отдельно взятого штамма было высоким и практическиодинаковым - 1,4 х 10, 4,6 х 10, 2,2 х 10 соответственно. Среда Райта, хотя и была чувствительна к эшерихиям и сальмонеллам(1,2 х 10 колониеобразующих единиц), новоказывает ингибирующее действие на рост 5протея и стафилококка - 1,2 х 10 и 1,4 х 10соответственно.)Составитель Н.ГолутваТехред М.Моргентал Редактор Л.Волкова Корректор Т.ПалийЗаказ 41 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Предлагаемая среда и среда Левина оказывают ингибирующее действие только на рост стафилококка - 2,3 х 10,Среда Асель-Либермана не обладает элективностью.Формула изобретения Питательная среда для дифференциации энтеропатогенных эшерихий, содержащая мясопептоннцй агар, краситель и сахароэу. о т л и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью повышения точности дифференциации эшерихий, она в качестве красителя содержит фенол рот и анилин синий при 15 следующем соотношении компонентов, г/л:Сахароза 5,0-10,0 Фенол рот 0,2-0.25 Анилин синий 0,1-0,15 Мясопептонный агар 1 л