Способ диагностики раннего срока беременности

(19) (11) 5 С 01 й 33/577 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕ В в, Л.Ф.Роа надотрос.143. ретения корение кция не- испольикума - гароэы, ыми ан- ническо(ХГЧ),(ХГЧ) с помощью реак Иэобрчастностипредндзнасрока берЦель ии ускоунплоОлоги ии непряиспольэскума - зерози, наальные анЧ), продуц2.следующ мой им ванне)л ен циг которые )итела к руемие мунофлуоресцтердофазного дногентромироваконьюгированы3-субьединице Хгибридомным клСпособ осу с ид, ност нной а монокло ГЧ ф-ХГ оном Ф ществляю и са стии)лмтехнкрло имобГ зом,М цели ис- еменноженщин еловека ия поставленно диагностики бе ужения в моче гонадотропина остиж спос обнДля пользую сти путе хориониравным раствор центриф ског(71) Научно-исследовательскийморфологии человека АМН СССР(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РАННЕГО СРОКА БЕРЕМЕННОСТИ(57) Изобретение относится к медицине, частности к акушерству и гинекологии, предназначено для диагностики раннег срока беременности. Целью изоб является повышение точности и ус способа. В основе способа - реа прямой иммунофлуоресценции с зованием . вердофазного диагност зерен цианогенбромированной а коньюгированной с моноклональн тителами к )г)-субьединице хорио го гонадотропина человека етение относится к медицине, в к акушерству и гинекологии. и чено для диагностики раннего мен ности,эобретения - повышение точнорение способа, стандартизация ических реагентов и обеспечение чности производства диагностипродуцируемыми гибридомным клоном Ф 12. Для осуществления способа пробу мочи женщин разводят равным обьемом фосфатного буферного раствора (ФБР) с рН 7,2-7,4, добавляют к ней 40,0-60,0 мкл суспенэии агарозы, соединенной с моноклональными антителами К,О-ХГЧ, Инкубируют смесь при комнатной температуре 15 - 20 мин, отмывают троекратно ФБР, центрифугируют при 1000 - 1500 об/мин в течение 1-1,5 мин. К осадку добавляют 50,0-60,0 мкл кроличьих моноспе. цифических антител к ХГЧ, меченч.,)х флуоресцеинаэотиоциа натом (Ф ИТ Ц нкубируют смесь повторно при комнатной те)лпературе в течение 15-20 мин. Троекратно отмывают ФБР центриФугируют и исследуют осадок в люминесцентном микроскопе и при наличии краевого свечени зерен диагностикума диагносцируют ранний срок беременности, Пред)а)аемьи способ позволяет выявлять беременность у 100 женшин при сроке 3-4 недели при оценке результата через 1 ч, Время анализа уско;)яется в 5-6 раз. еред исследованием разводят ьемом Фосфатного буферного Ф Б Р) 0,25- 0,3 М, р Н 7,2-7,4. В ную пробирку вносят 0,5 - 1,0 мл1673975 П р и м е р 2, П-ва Г.А., задержка месячных 8 дней. Взято 0,5 мл мочи, прибавлено 0,5 мл ФБР с рН 7,2, к пробе мочи прибавлены 50 мкл суспензии зерен агарозы, соединенной с моноклональными антителами к ф -ХГЧ, смесь проинкубирована 20 мин при комнатной температуре, отмыта троекратно ФБР, отцентрифугирована при 1000 об/мин в течение 1 мин, прибавлены 50 мкл кроличьих моноспецифических антител к ХГЧ, меченых ФИТЦ, смесь повторно проинкубирована в течение 15 мин при комнатной температуре, отмыта троекратно ФБР, отцентрифугирована при 1500 об/мин в течение 1,5 мин, Осадок исследован в люминесцентном микроскопе, отсутствие краевого свечения свидетельствует, что ХГЧ в моче не выявлен - беременности нет.задержка месячных обуслолвена нарушением менструального цикла. Диагноз подтвержден.Таким образом, предлагаемый способ позволяет выявлять беременность у 1007 ь женщин при сроке 3 - 4 недели при оценке результатов через 1 ч. исследуемой разведенной мочи, 40-60 мкл взвеси зерен диагностикума (в 1 мл 5000- 6000 зерен), инкубируют при комнатной температуре в течение 15-20 мин, отмывают троекратно ФБР путем центрифугирования пробирки при 1000-1500 об/мин в течение 1-1,5 мин. К осадку приливают 50,0 - 60,0 мкл кроличьих моноспецифических антител к ХГЧ,меченных флуоросцеинизотиоцианатом (ФИТЦ), встряхивают пробирку, повторно инкубируют при комнатной температуре в тчение 15-20 мин, отмывают троекратно ФБР путем центрифугирования. Учет результата реакции осуществляют под люминесцентным микроскопом. 1 каплю суспензии зерен наносят на предметное стекло, покрывают покровным стеклом и исследуют при увеличении х 110 - 160 с использование фильтров ФС- 2,СС - 15 - 2,Б - С - 8 - 2,В случае положительной реакции наблюдают яркое краевое свечение зерен диагностикума. При постановке реакции обязательно проводят исследование контрольных образцов мочи: положительного (содержащего ХГЧ) и отрицательного (не содержащего ХГЧ).П р и м е р 1, А-Я И.Р., задержка месячных 7 дней, Взято 0,5 мл мочи, прибавлено 0,5 мл ФБР с рН 7,2, добавлено 40 мкл суспенэии зерен агарозы, соединенной с моноклональными антителами к 3 -ХГЧ, смесь проинкубирована в течение 20 мин при комнатной температуре, отмыта троекратно ФБР, отцентрифугирована при 100 об/мин в течение 1 мин, прибавлены 50 мкл кроличьих моноспецифических антител к ХГЧ, меченных ФИТЦ, смесь проинкубирована в течение 20 мин при комнатной температуре, троекратно отмыта ФБР, отцентрифугирана при 1000 об/мин в течение 1 мин, осадок исследован в люминесцентном микроскопе, по наличию краевого свечения зерен диагнос.,трован ранний срок беременности. Спустя 3 недели диагноз беременности подтвержден при гинекологическом обследовании и ультразвуковом исследовании. Срок беременности установлен 5 - 6 недель,Таким образом, при иммунологическом исследовании предлагаемым способом беременность была диагностирована в срок 2-3 недели. 5 10 15 20 25 Формула изобретения Способ диагностики раннего срока беременности путем определения содержания хорионического гонадотропина человека в моче, отл ича ю щий с я тем, что, с целью повышения точности и ускорения способа, пробу мочи разводят равным объемом фосфатного буферного раствора с рН 7,2-7,4, добавляют к ней суспензию агарозы, соединенной с моноклональными антителами к /3 -субъединице хорионического гонадотропина человека, продуцируемыми клоном Ф 12, инкубируют смесь, отмывают троекратно буферным раствором, центрифугируют, к осадку добавляют кроличьи моноспецифические антитела к хорионическому гонадотропину человека, меченные флуоресцеинизотиоцианатом, повторно инкубируют, отмывают фосфатным буферным раствором, центрифугируют и исследуют осадок в люминесцентном микроскопе и при наличии краевого свечения диагносцируют ранний срок берем ен ности. 30 35 40 45 50 Составитель Р. ГуменюкТехред М.Моргентал Корректор Э, Лончакова Редактор А. Огар Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Заказ 2915 Тираж 391 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж. Раушская наб., 4/5