Способ получения вакцины против респираторных заболеваний животных и птиц, вызываемых микоплазмами

"ф"ф" "А И Е пца 2562 з ИЗОБРЕТЕН Йя Союз Советских Социапиатицасхих Респубпин(22) Заявлено 28 (23) Приоритет (31) 100028/72 (43) Опубликов 73 (21) 1966657/ (32) 05.10.72 (33) Япония 1) М. Кл. С 12 К 5/00 А 61 К 39/00 ударстаенный комитетвата Министроа СССРо делам иэаоретенийи открытий УДК 615.371//372(088.8) Бюллетень 3 о 25.09 45) Дата опубликовании писания 01.09.7 Ин остранцы.оримаса Есикоа и Еизо Х(Япония) 72) Авторы изобретения Иностранная ФирмаДзе Китасато Институт(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ РЕСПИРАТОРНЫХзАБОлевАний живОтных и птиц, вызывАеиыхИИКОПЛАЗ ИЛИИ способам эации доираторныхызываемых Изобретение относится получения вакцин для имм машних животных против Р инфекционных заболеваний микоплазмой. Однако вакцины оказали точно эффективными для бо занными заболеваниями у ж птицы.Цел едоста. с уканых и ььбво ниеиоствнут цель дости плазм после тельно подв полученной лизатор и д ток д х 10 Поставленна что клетки мико рования дополн могениэации, к добавляют стаб центрацию кл 2,0 х 10- 2,ается тем инактивиргают гоуспензииводят коничиныок/мл вак 0 о вел клеци последовасбора и суспендимикоплазм его добавклеток микоспензию ния исп среда с Вакцину готовят путем щ) тельного культивирования,инактивирования микоплаэм рования инактивированных в водной среде и последую ления к суспенэии мертвых 25 плазмы стабилизирующего с раствора. Для культивиров зуется жидкая питательная дующего состава, г: Настой бычьей крови 30 ПептонольлеРеспираторный микоплазмоз домашних животных распространен во всех странах мира. К заболеваниям такого типа можно отнести хронические респираторные заболевания домашней птицы, вызванные микоплаэмовым куриным септиком, поражение воздушных мешочков у домашней птицы, вызванное микоплазмовой синовиальной жидкостью, энэоотическую пневмонию у свиней, вызванную микоплазмовым возбудителем пневмонии, инфекционную плевропневмонию у коэ, вызванную микоплаэмовыми микоидами или козьими паразитическими грибками и прочее. Эти энэоотические микоплазмовые респираторные заболевания домашних животных являются инфекционными.Известны сгособы получения вакцин против респираторных заболеваний,вызванных микоплаэмами, включающие суспендирование клеток микоплаэм в физиологическом растворе и последуюшее их инактивирование 11. ью изобретения является повыш ммугенности вакцины и воэможвведения ее животным и птицетрахеально.Ъ20Таблица 11 625623 Способ иммунизации Степень инфекционногозаражения Впрыскивание 3/10 10/10 Контроль 4)В знаменателе дроби показано число подопытных коз, а в числителе - число коз, у которых обнаружено привитое заболевание легких. Таблица 12 Выделение микоплазмового куриного септика М Степень поражения воздушныхмешочков Вакцина тТрахея Легкое Воздушньймешочек Инакт;.вированнаявакцина без стабилизатора суспензии 2/10 О/10 1/10 0,70 Инактивированнаявакцина с стабили 1/10 О/10 3,50 за:ором суспензии 10/10 10/т 8/10 2,10 Контроль х 7В знаменателе дроби указано число подопытных цыплят,а в числителе - :.исло цыплят, у которых был выделен:.:икоплазмовый куриный септик. Формула изобретения Составитель Л,Мурая Редактор Д,Пинчук ТехредН.Андрейчук Корректор П.МакаревичЗаказ 5263/4 Тираж 568 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Сов -та Министров СССР п делам изобретений и открытий 113035, Москв.:, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП Патент, .-, ужгород, ул. Проектная, 4 Способ получения вакцины против респираторных заболеваний животных и 10 птиц, вызываемых микоплазмами, включающий суспендирование клеток мико- плазм в физиологическом растворе и инактивирование их, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения иммуногенности вакцины и возможности введения ее внутритрахеально 45 животным и птице, клетки микоплазм после инактивирования дополнительно подвергают гомогенизации, к пол;ченной суспензии добавляют стаби.":изато; и доводят концентрацию клеток до величины 2,0 х 10 к - 2,0 х 1 О клеток/мл вакцины.Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:1. Акцептованная заявка Великобритании Р 1274993, кл, А 5 В, 17.05.7,5,0 10 15 30 35 40 45 60 Хлористый натрийВода для осуществленияпроцесса 1000 млЖидкая среда дополнительно обогащается таким источником углерода,какглюкоза в количестве 0,1 - 1,0 отобъема воды, В случае культивированиямикоплазмового куриного септика вуказанную жидкую среду дополнительно добавляется птичья кровяная сыворотка в количестве 5-15 от объемасреды. В случае культивирования микоплазмового синовия в жидкую средудополнительно добавляется 5-15птичьей кровяной сыворотки, 0,0010,1 (от объема воды)дифосфопир, динануклиотида, 0,001 - 0,1 хлоргидрата(.-цистеина и 0,01-0,1 (от объемаводы), витаминов Игл (100-нойконцентрации).1 л концентрата витаминов содержит мг:1 - Биотин 0,24Фолевую кислоту 0,44Амид никотиновой кислоты 0,12Пантотенат кальция 0,24Хлоргидрат Пиридоксал 0,20Хлоргидрат тиамина 0,34Рибофлавин 0,04Хлорид холина 0,14При культивировании грибков микоплазмовой пневмонии в питательнуюсреду дополнительно добавляется 1020 (от объема воды) сыворотки свинойкрови, а при культивировании микоидов микоплазмы для козьих паразитических грибков в питательную средудополнительно добавляется 5-15 (отобъема воды) сыворотки козьей крови.Каждая из вышеупомянутых сывороток может по желанию быть замененана препарат из яичного желтка в количестве 3-8 от объема воды. Препаратиз яичного желтка может быть приготовлен путем экстрагирования яичногожелтка равным по объему количествомчистой (деионизированной или дистиллированной) воды или водным.раствором, имеющим рН 6,0-7,8 :аким, например, как физиологический солянойраствор, 100-мольный фосфатный буферный раствор или смесь этих двух растворов. Экстрагирование может быть,например, выполнено путем перемешивания смеси яичного желтка и деионизированной воды (1:1 по объему) при56 С в течение 2 час с последующимохлаждением до комнатной температуры.Затем смесь центрифугируют при10000 об/мин и всплывшую жидкостьфильтруют в условиях полной стерильности для получения препарата изяичного желтка,Каждый из перечисленных штаммовмикоплазм засевают в при: ;овленнуюописанным выше способом питательнуюсреду для выращивания клеток микоплазмы, которо -Ушествляется азробным способом при 35-38 С в течение1-7 дней, и обеспечивает высокий выход клеток микоплазм, составляющий1,0 - 5,0 г клеток на 1 л питательнойсреды,Для сбора урожая клеток миксплаз-. мы питательный раствор центрифугируют с применением центробежного сепаратора при 8000 об/мин или более в течение не менее 20 мин или с применением центробежного сепаратора непрерывного действия, работающего, например, со скоростью 16000 об/мин (около 25000).Отделение клеток микоплазмы от питательного раствора может осуществляться добавлением геля гидроокиси алюминия или геля фосфата алюминия, который, являясь адсорбентом, способствует отделению или осаждению клеток микоплазмы, Количество используемого адсорбента может лежать в пределах 10 - 400 мл (предпочтительно 30 - 100 мл) на 1 л питательной среды.Собранные таким образом клетки микоплазмы затем смешивают с физиологическим водным раствором, имеющим рН 6,0 - 7,8 (предпочтительнее 6,5- 7,4). Такой физиологической средой может быть физиологический соляный раствор, 100-мольный буферный раствор фосфата или смесь двух этих растворов. В результате получают взвесь клеток штамма микоплазма.Типичным примером смеси фосфатного буферного раствора и соляного физиологического раствора может служить раствор, имеющий следующий состав:МаН РО2 Н О 507 мг ХаНРО 959 мг Маса 8,5 г Вода 1000 см рН 7,2 В полученной взвеси клеток регулируют их концентрацию, которая должна быть не менее 2,0 х 106 клеток/мл.Взвесь клеток подогревают в течение 5-30 мин до 50-56 С для умерщвления клеток. Этого же результата можно добиться добавлением инактивируюшего клетки реактива. Таким реактивом может быть, например, формалин (0,01- 0,5 от объема воды), натрий- этил-ртутная соль салициловой кислоты (0,01-0,02 от объема воды) или )3 - -пропиолактон (0,01-0,2 от объема воды).Взвесь клеток может быть получена путем суспендирования осадка в небольшом количестве физиологического соляного раствора. Затем полученную суспензию подвергают такой инактивируюшей обработке, которая обеспечивает полное разрушение клеток мико- плазмы, например, ультразвуковой дезинтеграции, осуществляемой в тече625623 ние 0,5-10 мин в 10 кГц, или прессованию французским способом. Раствор разбавляют физиологическим соляным Раствором до указанной выше концентрации клеток и получают суспензию инактивированных клеток.Приготовленная таким образом инактивированная вакцина микроплазмы яв-. ляется суспензией инактивированных клеток микроплазмы или их частиц в физиологическом соляном растворе с рН 6,0 " 7,8. Число клеток или их частиц должно быть не менее 2,0 Х 10 1 О на 1 мл суспенэии живых клеток.Прекрасный иммунизирующий эффект может быть получен даже в том случае, когда используется также суспензия инактивированных клеток. Однако для 5 усиления этого эффекта предпочтительнее, чтобы суспензия содержала стабилизирующее вещество.Стабилизирующим веществом может служить один из перечисленных ниже составов (или смеси этих составов).Сахариды,: глюкоза 0,3 - 1,0; сахароза 0,5-10 у лактоза 0,1-1,0 или декстран 0,5-3,0.Аминокислоты,: глутаминовая кислота 0,1-0,5 или глицин 0,5-5,0.Сыворотки.В случае применения вакцины на основе микроплазмового куриного септика или на основе синовиальной микоплаэма:сыворотка птичьей крови (0,1-1,0) или альбуминсыворотки птичьей крови (0,1 0,5). Количес во суспензии вакцины мертвой микоплазмы, вводимой путем впрыскивания или инъецирования в трахеи, может изменяться в зависимости от степени инфекции домашних животных. Так, для предотвращения заболевания дыхательных органов у птиц необходимо вводить не менее 0,1 мл суспензии вакцины мертвого микоплаэмового. куриного септика или мертвои синовиальной микоплазмы (или смеси этих вакцин); для предотвращения заболевания свиней энзоотической пневмонией необходимо вводить не менее 0,5 мл суспензии вакцины мертвой пневмониальной микоплаэмы; для предотвращения заболевания овец инфекционной плевропневмониейнеобходимо вводить не менее 0,5 мл суспензии вакцины мертвых микоидов микоплаэмы или козьих паразитических грибков. Обычно вакцины можно вводить путем вспрыскивания или инъекции нх в трахеи с помощью небулиэатора нли другого устройства для впрыскивания. Введение вакцин следует делать не менее 2-3 раз с интервалом в 10 дней,Суспензия вакцин мертвой микоплазмы, приготовленная в соответствии с изобретением, показала значительный иммунизирующий эффект против воздействия сильных штаммов микоплазмы даже в том случае, когда подверганхциеся иммунизации этой вакциной домашние животные были .заражены и другими патогенными микроорганизмами. В случае применения вакцины на основе пневмониальной микоплазмм:сыворотка свиной крови (0,1-1,0) или альбуминсыворотки свиной крови (0,1-0,5), щ 0В случае применения вакцины на основе микоидов микоплазмы или козьих паразитических грибков;сыворотка к зьей крови (0,1-1,0) или альбуминсыворотки козьей крови (0,1-0,50) .Прочие: 45Твин 80 фф (0,05-0,5), желатин (0,01-0,05) илидинатрий этилендиамин-тетраацетат (0,03-0,3),50 Перед добавлением стабилизирующего состава к инактивированной суспензии клеток эта суспензия должна быть подвергнута гомогениэации с использованием любого физического метода, 55 например, обработки ультразвуком мощностью 10 кГц в течение 0,5-1,0 мин или встряхивания с помещением в сосуд мелких стеклянным шариков. После этого стабилизирующий состав добавляется в соответствующих количествах в суспенэию клеток для получения суспенэии вакцины убитых клеток микоплазмы. . 65 Предотвращение респираторных забо леваний, вызываемых инфекционной микоплазмой, цостигается за счет иммунизации органов дыхания домашних животных путем впрыскивания суспензии вакцины в трахеи.Однако суспензия вакцины мертвой миЮоплазмы, приготовленная в соответствии с изобретением, не может дать сколько-нибудь заметного эффекта,когда вакцина вводится внутримыаечно либо одна, либо в смеси с различными вспомогательными растворами, такими, например, как фБакто-аджувент, комплект фрюнд, магнитная окись железа, смесь альгината натрия с хлоридом кальция, смесь анактивированного вещества ффГемофилус галлинарумф с гелем гидроокиси алюминия или гель гидроокиси алюминия.Суспензия инактивированной вакци" ны микоплазмыприготовленная в соот" ветствии с изобретением, может, однако, дать прекрасный защитный эффект при введении или впрыскивании непосредственно в трахеи. Эта иммунизирующая процедура является безвредной н не дает таких побочных эффектов, как отвердение места инъекции, которое часто наблюдается в случаях применения внутримышечной инъекции вакцин, предварительно инактивированных.625623 40 П р и м е р 1, К 1 л исходной жидкой питательной среды для мико- плазмы добавляют 0,5 (от объема воды) глюкозы и 10% по объему подогретой сыворотки крови цыпленка. Приготовленную жидкую питательную среду засевают микоплазменным куриным септиком. Культивирование бактерий осуществляют в аэробных условиях прио35-38 С в течение 2 дней, По окончании культивирования питательную жидкость центрифугируют при 13000 об/мин в течение 30 мин и получают осажден ные .(отцеженные) клетки микоплазмового куриного септика. К этому осадку добавляют водный физиологический раствор, забуференный фосфатом и имеющий рН 7,2. Количество раствора 15 выбирается так, чтобы обеспечить концентрацию клеток в суспензии не менее 2,0 х 10 клеток на 1 мл. В при 5готовленную таким образом суспензию клеток добавляют 0,01% формалина,ко торый убивает клетки. После этого суспензию мертвых клеток гомогенизируют с помощью ультразвука при 100 кГц в течение 30 сек, а затем к полученному раствору добавляют стабилизатор суспензии - смесь 0,02 желатина с 0,1 Твин 80 для получения суспензии инактивированной вакцины куриного септика.П р и м е р 2, Повторяют процеду ру, описанную в примере 1. Однако подогретую сыворотку крови цыпленка, используемую в качестве компонента при приготовлении питательной среды для размножения клеток микоплазмового куриного септика, заменяют 6-ным35 по объему количеством препарата яичного желтка, экстрагированного деионизированной водой, Получают суспензию инактивированной вакцины микоплазмового куриного септика.П р и м е р 3. Повторяют процедуру, описанную в примере 1, однако, осаждение клеток микоплазмового куриного септика проводят добавлением 50 мл геля гидроокиси алюминия в 1000 мл питательной среды. Получают суспензию инактивированной вакцины45 микоплазмового куриного септика.П р и м е р 4. Повторяют процедуру, описанную в примере 1, однако, в качестве исходной культуры используют бактерии синовиальной микоплазмы и в питательную среду добавляют 13 по объему подогретой сыворотки крови цыпленка, а также 0,01 хлоргидрата Ь -цистеина и 0,025 витаминов Игл (100-ной концентрации). Получают суспензию инактивированной вакцины синовиальной микоплазмы.П р и м е р 5, Повторяют процедуру, описанную в примере 1, однако в60 качестве исходной культуры для засева питательной среды используют микоидную микоплазму или козьи паразитичес 8кие грибки и в среду вводят подогретую сыворотку козьей крови в количестве 1 по объему. Получают суспензию мертвой вакцины микоидной мико- плазмы.П р и м е р 6. Повторяют процедуру, описанную в примере 5, однако, подогретую сыворотку козьей крови заменяют бВ-ным яичным желтком. Получают суспензию инактивированной вакцины микоидной микоплазмы.1-ый опыт. 10 цыплят 10-дневного возраста без патологических явлений были подвергнуты иммунизации путем ,впрыскивания в дыхательные трахеи суспензии мертвой вакцины микоплазмового куриного септика (группа 1) .Другие 10 цыплят были подвергнуты иммунизации путем внутримышечного введения той же самой суспензии мертвой вакцины (группа 2).Еще 10 такихже цыплят были подвергнуты иммунизации путем внутримышечного введения той же суспензии мертвой вакцины, которая была использована при иммунизации цыплят группы 1, но с добавлением различных вспомогательных растворов (группа 3) . Иммунизация была повторена 3 раза с интервалом в 10 дней. Разовая иммунизирующая доза составляла 0,1 мл.Спустя 10 дней испытуемые цыплята всех трех групп были подвергнуты заражению путем впрыскивания сильного штамма микоплазмового куриного септика, содержащего 3,2 х 10 или 1,6 х 10 живых клеток. Спустя 2 недели после заражения подопытные цыпля,та были вскрыты и обследованы с целью оценки эффективности действия вакцины, главным образом с точки зрения макроскопического поражения воздушных мешочков, Результаты обследования приведены в табл.1. На основании данных табл.1 можносделать вывод, что вышеупомянутаясуспензия мертвой вакцины не можетобеспечить сколько-нибудь заметныйзащитный эффект, если она вводитсявнутримышечно либо одна, либо в смеси с различными вспомогательными веществами. Однако введение этой вакцины непосредственно в трахеи можетобеспечиь требуемый защитный эффект,2-ой опыт. Был повторен 1-ый опытс тем лишь изменением, что вместосуспензии мертвой вакцины микоплазмового куриного септика и сильного штамма микоплазмового куриного септикабыли взяты соответственно суспензиямертвой вакцины синовиальной микоплазмы и сильный штамм синовиалзноймикоплазмы, имеющий концентрацию,равную 5,7 х 10 живых клеток,5Полученные результаты приведеныв табл,2,3-ий Опыт. Выл повторен 1-ый опытс тем лишь изменением, что вместо15 25 Для того, чтобы узнать защитный эффект суспензии мертвой вакцины микоплазмы от респираторных заболева ний домашних животных, вызываемых заражением этих животных сильными штаммами микоплазмы, были проведены следующие Опыты.5-ый Опыт, 10 цыплят 10-дневного возраста, не имеющих признаков патологии, были иммунизированы 2 или 3 раза с 10-дневным интервалом, причем доза суспенэии мертвой вакцины микоплазмового куриного септика и вводимой внутритратеально с помощью инъекции или впрыскивания, была 50 0,1 мл. Спустя 10 дней после последней иммунизации все 40 цыплят, 20 из которых составляли не иммунизирован. - ную группу (контрольную), были помещены вместе с десятью цыплятами, за раженными сильным микоплазмовым куриным септиком, имеющим концентрацию 2,3 х 10 живых клеток. Спустя 4 не 5дели была произведена оценка защитного эфФекта инактивированной вакцины, 60 оказываемого на дыхательные органы цыплят в условиях воздействия на них инфекционной микоплазмы, Оценка про 9 б 25 б 2вакцины микоплазмового куриного септика и сильного штамма микоплазмового куриного септика были взяты соответственно суспензия инактивированнои вакцины свиной пневмониальноймикоплазмы и сильным штамм свинойпневмониальной микоплазмы. Опыт проводили на свиньях без патологических изменений в возрасте 3-4 недель.Доза разовой иммунизации составила0,5 мл, Десять дней спустя после проведения последней иммунизации свиньибыли подвергнуты заражению путем 10впрыскивания сильно. з штамма свиной пневмониальной микоплазмы, имеющей концентрацию 5,5 х 10 живыхклеток. Спустя б недель подопытныесвиньи были вскрыты и обследованы сцелью оценки эффективности действиявакцины по патологическим изменениямв легких.Полученные результаты приведеныв табл,3,204-ый Опыт. Был повторен 3-ий опытс тем лишь изменением, что вместосуспензии мертвой вакцины свинойпневмониальной микоплазмы, сильногоштамма свиной пневмониальной микоплазмы и свиней без патологическихизменений были соответственно взятысуспензия мертвой вакцины микоидовмикоплазмы или паразитических козьихгрибков, полученная в примере 5,сильный штамм микоидов микоплазмыили паразитических козьих грибков,имеющий концентрацию 7,0 х 10 ф живых клеток. Опыт ставили на козахбез патологических изменений в возрасте 3 недель. Полученные результаты приведены в табл.4,10изводилась го степен.-; пораже-:ия воздушных мешочков . по реэу,ьтатам выделения микоплаэмового куриного септика из трахей, легких и воздушныхмешочков. Полученные рсзультаты приведены в табл.5,В табл.5-9 в знаменателе дробиуказано число подог 1 ытных цыплят Вчислителе - число пораженных цыплят,Общая оценка - это отношение числаподопытных цыплят к общему числу зараженных цыплят.б-Ой Опыт, Был повторен 5-ый опыт,но вместо суспензии мертвой вакцинымикоплазмового куриного септика исильного штамма микоплазмового куриного септика были взяты соответственно суспензия мертвой вакцины синовиальнои микоплазмы и сильная синовиальная микоплазма имеющая концентраlцию 5,0 х 10 живых клеток. Заражение иммунизированной и неиммунизированной групп. путем помещения их вместе с зараженными цыплятами было осуществлено спустя 12 дней ггосле последней иммунизации. Полученные результаты показаны в табл.б.7-Ой Опыт. Был пов горен б-ой опытс тем лишь изменением, что через7 днеи после последней иммунизациииммунизированная группа была годвергнута заражению через питьевую водувирусом инфекцион: в :ого бронхита и вирусом ньюкаслской болезни. Спустя еше5 дней зараженные таким образом цыплята (20 голов) были помещены вместес десятью цыпля:ами, зараженными сильной синовиальнои микоплазмой, как вб-ом опыте.Полученные результаты приведеныв табл.7.8-ой Опыт. Был повторен 5-ый опыт,но вместо суспензии мертвой вакцинымикоплазмового куриного септика былаиспользована смесь суспензии мертвойвакцины микоплазмового куриного септика и суспе:-.з и мертвой вакцины синовиальной м:коплазмы, Заражение иммунизированной и неиммунизированнойгруппы пУтем гомещения их вместе сзараженной раннее группой было осуществлено через 12 дней после проведения последней иммунизации. Полученные результаты приведены в табл,8.9-ый Опыт. Был повторен 8-ой опыт,нО вмес=о сильного микоплазмовогОкуриного септика была примененаная синовиальная микоплазма, имеющаяконцентрацию 5,0 х 10 живых клеток,Полученные результаты приведены втабл,9,10-ый Опыт, Опыт проведен насвиньях трехнедельного возраста, неимеющих признаков патологических изменений, которым вводили суспензиюмертвой вакцины свиной пневмониальной микоплазмы с последующим заражением сильной свиной пневмониальноймикоплазмой,имеющей концентрациюффБакто-аджвувент,комплект фрюнд То же 1,6 х 103,2 х 10 ф 2,10 2,80 Магнитная окисьжелеза 1,6 х 10 3,2 х 10ц 1,6 х 10 2,06 Аль гин атиатрия+хлористый кальций 2,70 1,90 ИнактивированныйфГемофилус галлииарума+гельгидроокисиалюминия 3,2 х 103 3,00 1,6 х 10 ф 2,05 3,2 х 10 1,6 х 10 Гель гидроокисиалюминия 2,70 1,85 В трахеи 3,2 х 1051,6 х 10ч3,2 х 101,6 х 10 То же 1,75 1,40 3,15 Контроль 2,00 0 60 0 - нормальное,1 - уплотнение воздушных мешочков,2 - точечные поражения,3 - образование хотя бы одной творожистой опухоли,4 - образование множественных или распространенныхтворожыстых опухолей. 11 62 5,0 х 10 живых клеток. Разовая имФмуниэйрующая доза вакцины составляпа 0,5 мл. Спустя 6 недель после заражения свиньи были вскрыты и обследованы с целью выявления патологических изменений в легких. Полученные результаты приведеныв табл.10.11-ый Опыт. Опыт был поставленна козах трехнедельного возраста,неимеющих признаков патологических изменений, которым вводили суспензнюмертвой вакцины микоидов микоплаэмыили козьих паразитических грибков,а для их заражения испольэовали сильный раствор иикоидов микоплазмы, имеющий концентрацию 5,0 х 10 живыхклеток. Полученные результаты привецены в табл.11,12-ый Опыт, Для того, чтобы выявить влияние стабилизатора суспенэии,12входящего в состав инактивированнойвакцины микоплазмы, были проведеныследующие сопоставительные опыты.Цыплята 10-дневного возраста былитрижды (с интервалом в 10 дней) подвергнуты иммунизации с помощью суспенэии мертвых клеток и вакцины мертвых клеток, в состав которой вошелстабилизатор суспензии (доза разовойиммунизации - не менее 0,1 мл) . Спустя 10 дней после последней иммунизации цыплята были заражены сильным ф 0 раствором микоплазмового куриногосептика, имеющим концентрацию 7,4 х 10живых клеток. Еще через 2 недели подопытные цыплята были обследованы дляоценки влияния вакцины, главным обра"зом, по состоянию воздушных мешочкови по выделению иэ трахей, легких ивоздушных мешочков штамма микоплаэмы. Полученные результаты приведеныв табл.12,20625623 13 Таблица 2 ид инъекции 2,20 Магнитная окисьжелеза 2,25 То же 2,30 2,25 В трахеи Контроль 0,50 Таблица 3 ид инъекции Внутримышечно 8/10Бакто-аджувент,комплект фрюнд То же 7/10 Магнитная окисьжелеза 8/10 9/10 8/10 Гель гидроокисиалюминия 9/10 4/10 В трахеи 9/10 Контроль а)В знаменателе дроби указано число подопытных свиней, а в числителе - число свиней с явным поражением легких,Вспомогательный раствор к вак- цине Бакто-аджувент, Внутримыкомплект Фрюнд шечно Альгинат натрия ++хлористый кальций ИнактивированныйГемофилус галлинарум + гельгидроокиси алюминия Вспомогательный раствор к вак- цине Альгинат натрия + хлористыйкальций ИнактивированныйГемофилус галлинарум + гельгидроокиси алюминия Степеньпоражениявоздушныхмешочков 1,55 2,35 Степеньинфекционногозаражениянутримнаечно 7/10 Бакто-аджувент,комплект фрюнд То же Магнитная окисьжелеза 8/10 Альгинат натрия++хлористый кальций 8/10 ИнактивированныйфГемофилус галлинарум+гель гидроокиси алюминия 7/10 8/10 Гель гидроокисиалюминия В трахеи 8/10 О/10 Контроль ф В знаменателе дроби указано число подопытныхкоз, а в числителе - число коз с явным поражением легких,т а б л и трахеальнаяинъекция О/20 Впрыскивание О/20 Контроль О/50 7/20 5/20 5/20 7/20 35 1/20 5 О/20 1/20 Конт оль 3/20 8/20 инъекция Впрыскивание О/20 О/20 О/20 0,20 О/20 О/20 О/20 О/20 О/20 1/20 1/20 1/20 5/20 8/20825623 17 18Таблица 7 Способ введениясуспензии мертвой вакцины пень Общаяоценка ажея,Ъ Внутритрахеальная инъекция О/20 2/20 10 О/20 1/20 ВпрыскиваниеКонтроль б/20 9/20 45 епень Способ введения суспензии мертвой вакцины Общаяоценка фекциного ражения Тра хея душ меек Внутритрахеальнаяинъекция О/20 О/20 О/20 О/20 Впрыскивание Контроль 8/20 40 4/20 Таблица 9 Общая оценк пособ введенияуспензии мертой вакцины тепень ыделение синовиальой микоплазмы екцинног зараже ния, % нутритрахеальнаянъекция/2 20 7 2 О, 7/20 2/2 блица 10 Способ иммунизации тепень инфекционного заражения 2/10 Впрыскивани Внутритрахеальная инъекция 8/10 Конт В знаменателе дроби У свиней, а в числителе рых обнаружено привит ано число подопытны число свиней, у кот заболевание легких. Впрыскив ание КонтрольСтепень поражения воздушных мешочков Степень поражения воздушных мешочков епень порания воздушх мешочков ыделение сиовиальной ми- коплазмы рахея Воздушныймешочек О/20 2/20 О/20 1/20 5/20 9/20 Выделение микоплазмового куриного септика О/20 О/20 О/20 О/20 О/20 О/20 5/20 О/20 4/20 ра- Воздушный еямешочек О/20 1/20 О/20 О/20 Таблица 8