Способ идентификации бактерий brucella suis 4 биовара

СОК)З СОБГ 1 СКИХСОЦИАЛИС 1 ИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ГОСУДАР СТ 8 Е ННЫ Й КОМИ ТЕ ТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) Научно-исследовательский противочумный институт Кавказа и Закавказья(54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЙ ВЗНОСЕ М 30 Я 4 БИОВАРА Изобретение относится к микробиологии, в частности к внутривидовой дифференциации бактерий рода Вгцсеа,Цель изобретения - упрощение идентификации,Сущность изобретения заключается в том, что 1,2 и 5 биовар бактерий роды Вг, вцв дифференцируют от 4 биовара по отсутствию у него ферментативной активности в отношении аденина.П р и м е р 1, Готовят взвесь двухсуточной агаровой культуры испытуемого штамма Вг. в 0 з 1330 в 4 мл фосфатного буфера, рН 7.0 до концентрации 3 10 микробных клеток в 1 мл по оптическому стандарту мутности для бруцелл ГИСК им. Л.А.Тарасевича. Взвесь инкубируют в течение 1 ч при 37" С, после чего ее делят на две равные части. В опытную часть пробы добавляют 1 мл 0,1 о-ного раствора аденина, в контрольную 1 мл дистиллированной воды. После икубирования проб при 37 С в течение(57) Изобретение относится к микробиологии, в частности к внутривидовой дифференциации бактерий рода Вгцсеа. Цель изобретения - упрощение идентификации бактерий, Поставленная цель достигается тем, что 1,2,5 биовары Вг. зоз дифференцируют от 4 биовара по отсутствию у него ферментативной активнос 1 и в отношении аденина, При этом перед определением ферментативной активности реакционную смесь обрабатывают реактивом Несслера,24 ч в каждую иэ них вносят по 0,2 мл реак аагпва Несслера и учитывают результаты поизменению окраски содержимого пробирок. При этом ярко-оранжевое окрашиваниеопытной пробы свидетельствует о наличииадениндезаминаэной активности у штаммаВг, зиэ 1330 и принадлежности его к 1 биовару Вг. в 0 з, Контрольная проба окрашивается в желтовато-зеленый цвет,П р и м е р 2. Взвесь двухсуточнойагаровой культуры штамма Вг. звз9влейР 1 овзеп с концентрацией 3 10 м.к,/мл в4 мл фосфатного буфера, рН 7,0 выдержива- фют пои 37 С в течение 1 ч, После инкубации Свзвесь делят на две равные части - опытную Си контрольную, В опытную часть пробы добавляют ма 0,1 тг-ного раствора арвннна. )яв контрольную 1 мл дистиллированной водыи помещают при 37 С на 24 ч. Учет проводят после добавления в каждую из проб по0,2 мл реактива Несслера, Контрольная рооба приобретает желтовато-зеленый цвет,что свидетельствует об отсутствии аленин1671309 Формула изобретения Способ идентификации бактерий Вгнсе 11 а зн 1 з 4 биовара. включающий получение суспензии исследуемого штамма, внесение субстрата. определение ферментативной активности с последующей оценкой результатов. отл и ч а ющи йс я тем, что, с целью упрощения идентификации, в качестве субстрата используют раствор аденина, а перед определением ферментативной активности реакционную смесь обрабатывают реактивом Несслера, а о принадлежности исследуемого штамма к 4 биовэру судят по отсутствию окрашивания. Составитель А,ФедоровТехред М,Моргентал Корректор М,Кучерявая Редактор М.Бланар Заказ 2784 Тираж 438 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 дезаминазы, Опытная проба окрашивается воранжевый цвет, что является признаком наличия ферментативной активности в отноше-,нии лденинэ и позволяет отнести культуру Вг.зн 1 з ТЬотзел к 2 биовару вида Вг, зн 1 з. 5П р и м е р 3. Готовят взвесь штамма Вг.зн 1 з 513 с концентрацией 3 10 м.к./мл в 4мл фосфатного буфера, рН 7,0, После инкубации взвеси при 37 С в течение 1 ч ее делятна две равные части. В опытную часть добавляют 1 мл 0,1-ного раствора аденина. вконтрольную 1 мл реактива Несслера и выдерживают при 37 С в течение 24 ч, послечего в обе пробы вносят по 0,2 мл реактиваНесслера и проводят учет результатов. Изменение цвета контрольной пробы не наблюдается. Опытная проба окрашивается винтенсивно оранжевый цвет, что говорит опринадлежности штамма к биовару 5,П р и м е р 4. Двухсуточную агаровую 20культуру штамма Вг. знз 40 суспендируюте 4 мл фосфэтиого буфера, рН 7,0 до концентрации 3 10 м.к./мл и инкубируют 1 ч при37 ОС. Затем взвесь делят на две равныечасти - опытную и контрольную, В первую 25из них добавляют 1 мл 0,1-ного растворааденина, во вторую 1 мл дистиллированнойводы. После выдерживания проб при 37 С втечение 24 ч в каждую из них вносят по0,2 мл реактива Несслера и наблюдают изменение окраски содержимого пробирок.Как контрольная, так и опытная пробы остаются бесцветными. Это свидетельствует об отсутствии у шгамма Вг. зн 1 з 40 адениндезаминазной активности и принадлежности его к биовару 4.Таким образом, предлагаемый способ дифференциации биоваров бруцелл вида Вг. зн 1 з прост в исполнении, не требует специальных приборов, содержит минимальное количество реактивов. Способ основан на качественном определении наличия аммиака, образующегося при дезаминировании бруцеллами аденина, является высокочувствительным и позволяет получить надежные и четкие результаты, регистрируемые визуально (цветная реакция). Способ не требует значительного времени для исследования и позволяет изучить одновременно несколько культур.