Способ определения содержания продуктов деградации фибрина в плазме

(21) 4208 (22) 10.03 (46) 30.06 (71) Тюме ский инс (72) А.Ш В,М.Шаф (53) 612.0 (56) йап Ьа гпогг.,и медицинухачева и Ьоз, Оайез440. 6 Изобретение относится к медицине и с может быть использовано научно-исследо- д вательскими и клинико-диагностическими и лабораториями для изучения состояния ге- т ж у больных.остаза при различных воздействиях, а так- . к1Цель изобретения - повышение точно сти способа. вПоставленная цель достигается тем, что м для повышения точности, упрощения и со кращения длительности анализа фибрино ген отделяют центрифугированием с н ускорением 80009,ПДФ осаждают с таким м же ускорением, растворяют в 1 н растворе р едкого натра, а также тем, что для количест- . н венного определения ПДФ применяют пря- т мую спектрофотометрию раствора, используя для пересчета эмпирическую таблицу зависимости содержания в плазме 2 ПДФ в мг, от светопропускания проб. вСодержание ПДФ в плазме определяют следующим образом. сВ центрифужный патрон вносят 6,5 мл с 0,14 М раствора хлорида натрия и 2,5 мл й гсыщенного раствора сульфата аммония,ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ И ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬС(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ПРОДУКТОВ ДЕГРАДАЦИИ ФИБРИНА В ПЛАЗМЕ(57) Изобретение относится к медицине, в частности к способам определения компонентов и продуктов свертывания крови, и позволяет определить содержание продуктов деградации фибрина (ПДФ) в плазме. С целью повышения точности, упрощения и сокращения длительности определения фибриноген предварительно удаляв)т иэ плазмы центрифугированием с ускорением 8000 ц, затем ПДФ осаждают с таким же ускорением, осадок растворяют в 1 н. растворе едкого натрия и содержание ПДФ определяют спектрофотометрически при 280 нм с последующим пересчетом на мг Применение способа позволит повысить точность определения ПДФ в 2,8 раза по сравнению с прототипом. мешивают и к смеси добавляют 1 мл исслеуемой плазмы, которая стабилизирована с омощью 3,8%-ного раствора цитрата нария, содержащего 1,3 аминокапроновой ислоты, смешивают при 3 - 50 С в течение 5 - 20 мин. Центрифугируют 30 мин при 000 д, осадок переносят в другой патрон и ыдерживают на водяной бане при 58 С 30 ин, затем центрифугируют 30 мин при 000 д. Надосадок отбросить, осадок два раа промывают 2 мл 0,14 М раствора хлорида атрия, центрифугируют при 8000 д по 15 ин каждый раз, После промывания осадок астворяют в 3 мл 1 н раствора едкого натра агреванием на кипящей водяной бане в ечение 5 мин,Раствор охлаждают и определяют при 80 нм светопропускание. С помощью приеденной таблицы находят соответствующую полученную значению ветопоглощения концентрацию ПДФ в иследуемой плазме.П р и м е р. У донора взяли кровь в шприц, содержащий 0,3 мл стабилизирую1659855 Индивидуальная вариабельность, установленная путем определения содержания ПДФ у 18 доноров, равна 9,2 + 1,1, следовательно, ошибка определения/М)100 . при и = 18 составляет 11,90.Таким образом предлагаемый способ позволяет повысить точность определения ПДФ в плазме в 2,9 раза по сравнению с прототипом.Формула изобретения Способ определения содержания продуктов деградации фибрина в плазме. включающий обработку плазмы крови сульфатом аммония с последующим центрифугированием,отличающийся тем,что,сцелью повышения точности, фибриноген, осадок, предварительно удаляют центрифугированием с ускорением 80009, затем продукты деградации фибрина осаждают с тем же ускорением, осадок растворяют в 1 н. растворе едкого натра на кипящей бане, а затем содержание продуктов деградации фибрина определяют спектрофотометрически при 280 нм. Пересчет показаний спектрофотометра в значениях светопоглощения при 280 нм наконцентрацию ПДФ в плазме ( при составлении таблицы учтено трехкратное разведениеисследуемого белка в ходе анализа) . мг СП 28 о СП 2 во мг 30 29 28,10 ,25 40 Б,55 5,70 5,85 6,00 6,06 6,12 6,18 6,2 1 6,30 6 14 6,78 7,02 7,26 щего раствора, до метки "3", получили плазму, В патрон внесли 6,5 мл 0,14 М раствора хлорида натрия, 2,5 мл насыщенного раствора сульфата аммония, смешали и добавили 1 мл исследуемой плазмы, оставили при 5 3 С на 20 мин, Затем смесь центрифугировали 30 мин с ускорением 80009. Надосадок перенесли в другой патрон и установили на водяной бане при 37 С на 30 мин, затем центрифугировали при ускорении 8000 д 30 10 , мин. Надосадок отбросили, а к осадку добавили 2 мл 0,14 М раствора хлорида натрия, взвесили осадок и вновь центрифугировали 15 мин, Отбросили насадок, опять добавили 2 мл 0,14 М раствора хлорида натрия и цен трифугировали 15 мин. Надосадок отбросили, а осадок растворили в 3 мл 1 н. раствора едкого натрия на кипящей водяной бане в течение 5 мин. Раствор охладили при комнатной температуре и определили его све топропускание при 280 нм, которое оказалось равным 48,0%, Согласно таблице это светопропускание соответствует ПДФ - 11,10. 9,90 10,20 10,50 10,80 11,10 11,40 11,70 12,00 12,75 13,50 14,25 15,00 15,75 16,50 17,2518,00 18,7 Б 19,50 20,85 21,60 22,65 23,70 19 18 17 16 15 14 13 12 11 10 9 8 7