Способ выявления антителообразующих клеток на гистологическом препарате

(51)5 С 01 М 1 28 АНИЕ ИЗОБРЕТЕН ый медиотьк А.Н. Морфологич енности инфициро еток, выявляемых(56) Кун вы и осо русами кл флюоресци ная литер ские осно анных вис помощью увщих антител.тура, 1958, с.2 ЕЛООБГИЧЕСКОМт в мин У н е. Инсредстт соля"ирт,водот Д в 6 мг солянворявт в 2Затем 2я разводяттворы смешиву добавля) 30%-ной ис 21 мл3 мг5 вают.т водуереГОСУДАРСТ 8 ЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕ:1 ЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СС АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛ.(71) Курский государственцинский институт(54) СПОСОБ ВЬИВЛЕНИЯ АНРАЗЖЩИХ КЛЕТОК НА ГИСТОЛПРЕПАРАТЕ Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии.Целью является получение четкого свечения антителообразувщих клеток за счет ингибирования неспецифического свечения окружающего ФонаСпособ осуществляют следующим образом.Готовят мазки-отпечатки или криос атные срезы нефиксированной ткани. алее после 10 мин высушивания на оздухе мазки Фиксируют в охлажденном абсолютном ацетоне в течение 10 мин. Обработку специфическими сыворотками проводят через 24 ч. Препарат ополаскивают в Физрастворе, приготовленном на 0,05 М Фосфатном буфере (рН 7,0 - 7,4). Сыворотку наслаивают на препарат и инкубируют с ней во влажной камере при комнат 2(57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. Цель -1 получение четкого контраста клетокза счет ингибирования неспецифического сведения фона, Для этого обработку в специфической сыворотке проводят в течение 30-40 мин при 20 - 25 С. Далее препараты дополнительнооинкубируют в среде, содержащей бензидин, этиловый спирт, нитропруссид натрия, перекись водорода и воду. Среда выявляет наличие миелопероксидазы в клетке. Данная обработка полностью снимает свечение Фона, что позволяет точно определить наличие и содержание антителообразующих клеток на препарате. ной (20 - 25 С) температуре 340 мин. Затем препарат отмываютрех порциях Физраствора по 1и помещают в инкубационную срдля выявления миелопероксидазь5 мин при комнатной температуркубационнув среду готовят непвенно перед употреблением.Инкубационная среда содержинокислый бензидин, этиловый спнитропруссид натрия и перекись рода,Сначала 0,4 - О,лого бензидина раств96 этилового спиртанитропруссида натри10 ю воды. Эти расК полученному соста1. 1 каплю (1 - 1,5 юкиси водорода.1649362 П р и м е р 2. Ребенок 6 мвс. Патологоанатомический диагноз: острый диффузный миокардит, серозно-гнойная пневмония. Приготовлены криостатные срезы бифуркационного лимфоуэла, которые обработаны люминесцирующей сывороткой против иммуноглобулинов, человека. БензидинЭтиловый спирт 40 Нитропруссид натрия303-ная перекись водородаВода 0,4 - 0,6 20 - 21 2 - 31 - 1 ф 5Остальное Составитель Л,СтеблеваТехред С,Мигунова Редактор Т.Лазоренко Корректор Л.Патай Тираж 397 Заказ 1516 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5Производственно-иэдательский комбинат "Патент", г,ужго-од, ул. Гагарина,101 Препараты в инкубационной среде выдерживают в течение 5 мин при комнатной температуре. После их ополаскивают в Физиологическом растворе и заключают в глицерин. При просмотре используют фильтры СЗС-4; СЗС- 2 и СС-4.П р и м е р 1. Больной, 23 года, огнестрельное ранение сердца. Иммунолюмисцентному исследованию на наличие антителопродуцирующих клеток была подвергнута селезенка. Криостатные срезы нефиксированной ткани селезенки после высушивания, фиксации в абсолютном ацетоне, ополаскивании в Физрастворе, далее обрабатывали люминесцирующей сывороткой против иммуноглобулинов человека. При просмотре отмытых препаратов селезенки в люминесцентном микроскопе в красной пульпе обнаружено большое количество ярко светящихся клеток, Для исключения люминесценции зернистых лейкоцитов эти же препараты инкубировали в течение 5 мин.при комнатной температуре в инкубационной среде на миелопероксидазу. При повторном просмотре этих препаратов в люминесцентном микроскопе обнаружены лишь единичные светящиеся плазматические клетки в красной пульпе, что дало возможность выявить наличия антителообразующих клеток в селезенке. Обнаружено умеренное количествосветящихся клеток в мозговых тяжахи большое количество светящихсяклеток в синусах. Для исключения люминесценции зернистых лейкоцитов этиже срезы обработаны на миелопероксидазу и вновь просмотрены в люминесцентном .микроскопе. Свечение клетокв мозговых тяжах сохранилось, а всинусах исчезло. В клетках синусоввыявлена высокая активность миелопероксидазы, что указывает на принадлежность .их к антителообразующим 15 клеткамСпособ позволяет более полно выявить антителообразующие клетки. Окраска,дополнительно в средесодержащей бензидин, снимает полностьюнеспецнфическое свечение Фона.Формула изобретенияСпособ выявления антителообразую",щнх клеток на гистологическом препарате путем его обработки специфической люминесцирующей сывороткой споследующей микроскопией, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с цельюполучения четкого свечения клетокза счет ингибирования свечения окру"жающего фона, обработку сывороткой 30проводят в течение 30-40 мин притемпературе 20-25 С, далее препаратдополнительно инкубируют в среде,содержащей бензидин, этиловый спирт,нитропруссид натрия и перекись водорода при следующих соотношениях компонентов, мас.%: